【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开涉及生物制药分析和临床诊断与治疗领域。它特别涉及测量sars-cov-2中和抗体的协同抗体依赖性增强(ade)效应的生物测定。
技术介绍
1、由严重急性呼吸综合征冠状病毒-2(sars-cov-2)引起的2019冠状病毒病(covid-19)大流行代表了前所未有的全球公共卫生紧急情况，带来经济和社会后果。任何改善患者状况，加速其康复，降低恶化和死亡风险的手段都将被认为具有重要的临床和经济意义。
2、关于宿主产生的免疫应答，针对病毒产生的特异性中和抗体被认为是以各种方式控制病毒感染所必需的。然而，在某些情况下，特异性抗体的存在可能对病毒有益。这种被称为病毒感染的抗体依赖性增强(ade)的活性通过与fc和/或补体受体的相互作用增强病毒进入，并且在某些情况下增强病毒复制到宿主细胞中。先前冠状病毒研究的数据也报道了ade可能在病毒的病理学中发挥作用(gabriela athziri sánchez-zuno等(2021)，“综述：covid-19的抗体依赖性增强：抗体不那么友好的一面(a review:antibody-dependentenhancement in covid-19:the not so friendly side of antibodies)”，internationaljournal of immunopathology and pharmacology，第35卷：1-15)。
3、抗体依赖性增强(ade)是指抗病毒抗体通过fcγr途径增强病毒进入和复制到免疫细胞中的现象(tirado
4、ade可以是抗病毒抗体的保护性或致病性作用：如果抗体调理的病毒粒子和感染的细胞通过吞噬作用，细胞毒性和诱导适应性免疫反应而被消除，它是保护性的(bournazos s,dilillo dj,ravetch jv(2015).fc–fcγ相互作用在igg介导的微生物中和中的作用(the role of fc–fcγinteractions in igg-mediated microbialneutralization).j.exp.med.212,1361–1369)。
5、然而，病毒的抗体结合也可导致携带fcγr的免疫细胞的病毒进入，病毒复制以及增强的感染和毒力(iwasaki a，yang y(2020).covid-19抗体反应欠佳的潜在危险(thepotential danger of suboptimal antibody responses incovid-19).naturereviews.immunology.20(6):339–341)。
6、因此，ade的发生可能是致力于开发针对covid-19的安全疫苗的科学家面临的最大挑战之一。尽管几种疫苗已在紧急情况下从监管机构获得批准并在全球范围内分发，但我们不能排除病毒进化可能直接影响其靶标的可能性，因此，寻找和评估中和病毒中高效安全的新抗体候选物是非常重要的。
7、如果疫苗不能产生针对可能的诱变变体的中和抗体以产生反应，则结果可能导致产生亚中和抗体，甚至能够促进表达fcr的巨噬细胞的摄取，随后刺激巨噬细胞并产生促炎细胞因子。
8、sars-cov-2感染和免疫的ade在疾病发展和治疗终点中起作用。ade的协同作用可能是两种或更多种中和抗体是否应该一起使用的关键生物学终点。它还可以通过使用来自covid-19患者的血清中和抗体测试协同ade效应来帮助临床医生确定临床结果。然而，目前还没有评估抗sars-cov-2抗体的协同作用的生物测定。
9、因此，非常需要测量sars-cov-2中和抗体的抗体依赖性增强(ade)效应，特别是两种或更多种sars-cov-2中和抗体的协同作用的生物测定。
技术实现思路
0、专利技术概述
1、在这里，我们开发了体外生物测定，其通过分析用sars-cov-2刺突蛋白假型化的表达荧光素酶的水疱性口炎病毒(vsv)感染的表达fcγr的细胞系，可以评估抗sars-cov-2中和抗体的协同抗体依赖性增强作用及其控制机制。
2、根据第一方面，本文公开了一种用于确定两种或更多种抗体(例如sars-cov-2中和抗体)在sars-cov-2感染中是否具有协同抗体依赖性增强(ade)效应的方法，其中该方法包括：将所述两种或更多种抗体的组合与感染假病毒的表达fcr的细胞接触，其中所述假病毒用sars-cov-2抗原假型化；并确定该组合是否协同增加假病毒内化进入表达fcr的细胞。
3、在一些实施方式中，fcr是fcγr。在一些实施方式中，fcγr选自fcγri(例如fcγria，fcγrib和fcγric)，fcγrii(例如fcγriia，fcγriib和fcγriic)和fcγriii(例如fcγriiia或fcγriiib)，优选fcγrii(例如fcγriia)。
4、在一些实施方式中，表达fcr的细胞选自天然表达fcr的细胞，例如单核细胞，巨噬细胞，造血细胞；或工程化细胞，例如cho细胞，hek 293t细胞。
5、在一些实施方式中，假病毒选自vsv；逆转录病毒系统，如鼠白血病病毒(mlv)；慢病毒系统，如hiv-1；腺病毒；或腺相关病毒(aav)。
6、在一些实施方式中，细胞还包含一个或多个报告基因，这些基因选自荧光素(例如荧光素酶，gfp)，β-半乳糖苷酶，分泌型碱性磷酸酶(seap)。
7、在一些实施方式中，sars-cov-2抗原衍生自刺突蛋白(s蛋白)，优选免疫显性表位，例如来自s蛋白的n-末端结构域或rbd区。
8、在一些实施方式中，该方法还包括例如通过elisa确定两种或更多种抗体的组合与fcr(优选fcγriia)的结合作用的步骤。
9、在一些实施方式中，该方法还包括确定两种或更多种抗体(例如两种或更多种sars-cov-2中和抗体)组合的假病毒中和作用的步骤。
10、在一些实施方式中，sars-cov-2抗原来源于s蛋白，并且用表达ace2的细胞(例如表达ace2的cho-k1细胞)测试假病毒中和作用。
11、在一些实施方式中，该方法用于选择抗体用于制备用于预防sars-cov-2感染的疫苗或疫苗组合。
12、在一些实施方式中，该方法用于预测和/或预防sars-cov-2感染的治疗或疫苗接种中ade效应的风险。
13、在一些实施方式中，该方法用于生物制药产品开发，制造和/或储存期间的质量控制。
14、在另一方面，本文提供了用于确定两种或更多种抗体(例如sars本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于确定两种或更多种抗体在SARS-CoV-2感染中是否具有协同抗体依赖性增强(ADE)效应的方法，其中所述方法包括：
2.如权利要求1所述的方法，其中所述抗体是SARS-CoV-2中和抗体，例如FcγR结合SARS-CoV-2中和抗体。
3.如权利要求1所述的方法，其中所述FcR是FcγR，例如选自FcγRI(例如FcγRIa、FcγRIb和FcγRIc)、FcγRII(例如FcγRIIa、FcγRIIb和FcγRIIc)和FcγRIII(例如FcγRIIIa或FcγRIIIb)的FcγR，优选FcγRII(例如FcγRIIa)；和/或
4.如权利要求1所述的方法，其中所述假病毒选自VSV；逆转录病毒系统，如鼠白血病病毒(MLV)；慢病毒系统，如HIV-1；腺病毒；或腺相关病毒(AAV)；和/或
5.如权利要求1所述的方法，其中所述SARS-CoV-2抗原来源于刺突蛋白(S蛋白)，例如来源于S蛋白的N端结构域或RBD区。
6.如权利要求1所述的方法，其中所述方法还包括选自下组的一个或两个步骤：
7.
8.如权利要求1所述的方法，其中所述方法用于：
9.用于确定两种或更多种抗体(如SARS-CoV-2中和抗体)是否在SARS-CoV-2感染中具有协同抗体依赖性增强(ADE)作用的物质在制备产品(如试剂盒)中的用途，所述产品用于(a)选择抗体用于制备用于预防SARS-CoV-2感染的疫苗或疫苗组合；和/或(b)预测和/或预防SARS-CoV-2感染治疗或疫苗接种中ADE效应的风险；和/或(c)生物制药产品开发，制造和/或储存期间的质量控制，其中所述产品用于如权利要求1-8中任一项所述的方法。
10.一种用于确定两种或更多种抗体(例如SARS-CoV-2中和抗体)
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于确定两种或更多种抗体在sars-cov-2感染中是否具有协同抗体依赖性增强(ade)效应的方法，其中所述方法包括：
2.如权利要求1所述的方法，其中所述抗体是sars-cov-2中和抗体，例如fcγr结合sars-cov-2中和抗体。
3.如权利要求1所述的方法，其中所述fcr是fcγr，例如选自fcγri(例如fcγria、fcγrib和fcγric)、fcγrii(例如fcγriia、fcγriib和fcγriic)和fcγriii(例如fcγriiia或fcγriiib)的fcγr，优选fcγrii(例如fcγriia)；和/或
4.如权利要求1所述的方法，其中所述假病毒选自vsv；逆转录病毒系统，如鼠白血病病毒(mlv)；慢病毒系统，如hiv-1；腺病毒；或腺相关病毒(aav)；和/或
5.如权利要求1所述的方法，其中所述sars-cov-2抗原来源于刺突蛋白(s蛋白)，例如来源于s蛋白的n端结构...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈敏，贾晓青，
申请(专利权)人：上海药明生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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