一种精准高效的PITC柱前衍生HPLC测定牛磺酸颗粒含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种精准高效的PITC柱前衍生HPLC测定牛磺酸颗粒含量的方法。其基于牛磺酸与PITC精准衍生化机制研究结果而构建，方法严谨，精准、高效、环保，适用性广，具有充分的理论依据和有力的技术支撑，符合中国药典分析方法要求，具备显著的社会和生态效益、较显著的经济效益。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于药物分析领域，具体涉及一种精准高效的pitc柱前衍生hplc测定牛磺酸颗粒含量的方法。

技术介绍

1、牛磺酸，化学名为2-氨基乙磺酸，是一种含硫的非蛋白氨基酸。牛磺酸颗粒为《中国药典》收载品种，其含量测定为“采取适宜的氨基酸分析法或照高效液相色谱法测定”，由于hplc采用柱后衍生法，需在hplc仪基础上配备反应管，对设备要求较高，而“适宜的氨基酸分析法”，缺乏具体的分析方法。这不利于牛磺酸颗粒质量控制，不利于保障公众健康。专利技术一种符合中国药典要求的牛磺酸颗粒含量测定的“适宜的氨基酸分析法”的具体方法尤为必要。

2、自1958年用阳离子交换色谱与柱后茚三酮衍生结合的方法分析氨基酸以来，现已是多种氨基酸分析方法并存互补。由于大多基酸分析方法操作繁琐、受因素影响较大、灵敏度低、仪器检验成本相对较高，近30年来,柱前衍生高效液相色谱法测定氨基酸在许多领域中得到应用。主要柱前衍生试剂及其检测方法，有邻苯二甲醛(荧光)、氯甲酸芴甲酯（荧光）及丹酰氯(荧光、uv)等，存在着衍生剂易爆剧毒强致癌性、衍生物不够稳定、生成干扰副产物等方法不足,而本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种精准高效的PITC柱前衍生HPLC测定牛磺酸颗粒含量的方法，其特征在于：包括异硫氰酸苯酯（以下以英文缩写为“PITC”）精准高效衍生化制备牛磺酸衍生物和相对应的HPLC测定牛磺酸衍生物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：PITC精准高效衍生化制备牛磺酸衍生物包括精准高效柱前衍生化、在长宽颈容量瓶或XYL衍生化反应器中终止衍生化和纯化衍生物。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：精准高效柱前衍生化包括以下步骤：（1）以定量的牛磺酸与PITC反应：精密量取0.2mg▪mL-1衍生前牛磺酸供试品溶液或衍生前对照品溶液10mL，置25mL容量瓶(可...

【技术特征摘要】

1.一种精准高效的pitc柱前衍生hplc测定牛磺酸颗粒含量的方法，其特征在于：包括异硫氰酸苯酯（以下以英文缩写为“pitc”）精准高效衍生化制备牛磺酸衍生物和相对应的hplc测定牛磺酸衍生物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：pitc精准高效衍生化制备牛磺酸衍生物包括精准高效柱前衍生化、在长宽颈容量瓶或xyl衍生化反应器中终止衍生化和纯化衍生物。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：精准高效柱前衍生化包括以下步骤：（1）以定量的牛磺酸与pitc反应：精密量取0.2mg▪ml-1衍生前牛磺酸供试品溶液或衍生前对照品溶液10ml，置25ml容量瓶(可选择瓶颈较长较大者，以下简称“长宽颈容量瓶”）中或置发明人发明的适于水浴加热的衍生化反应器（以下简称“xyl衍生化反应器”）中，与pitc反应。（2）按精准的pitc/牛磺酸摩尔数比，取定量微过量的pitc与定量的牛磺酸衍生化反应，量取前将pitc/牛磺酸摩尔数比折算成量取一定体积的pitc乙腈溶液的浓度，再配制成一定浓度的pitc乙腈溶液。也即在步骤（1）已放有10ml衍生前牛磺酸供试品溶液或衍生前牛磺酸对照品溶液的长宽颈容量瓶或xyl衍生化反应器中，加入0.127%pitc乙腈溶液（v/v）5ml，形成牛磺酸和pitc混合液。pitc/牛磺酸摩尔数比是通过以下技术手段实现的。通过实验研究，发现牛磺酸与pitc在不同条件下的衍生化反应机制，揭示了牛磺酸与pitc衍生化反应的两者之间数量关系，建立了基于按摩尔数比反应的衍生化反应数学模式，确定了在该模式下能完全反应的pitc/牛磺酸摩尔数最小比值为2.636/1。综合考虑供试品含量、称样允许范围、pitc溶液储存过程微小变化、供试品溶液配制转移、其他试验操作随机误差和系统误差多因素影响，以及分析方法学验证需要，将pitc/牛磺酸摩尔比在2.636/1基础上，增加25%，提高至3.295/1，取整修约为3.3/1。经验证，最后确定了精准高效衍生化的pitc/牛磺酸摩尔数比为3.3/1。按pitc/牛磺酸摩尔数比为3.3/1投料，按加入5ml pitc，pitc浓度应为0.127%（v/v）。（3）采用“温和衍生化反应模式”的低浓度三乙胺模式，在上述牛磺酸和pitc混合液中加入0.134%三乙胺乙腈溶液5ml。所述的采用“温和衍生化反应模式”的低浓度三乙胺模式，是通过三乙胺对牛磺酸与pitc衍生化反应影响的深入研究，揭示了三乙胺在牛磺酸与pitc衍生化反应中的重要作用，三乙胺对牛磺酸的氨基酸酸碱两性电离作用，三乙胺与牛磺酸、pitc之间在衍生化反应中的交互作用，发明了低浓度的0.134%（v/v）三乙胺乙腈溶液的“温和衍生化反应”模式。本模式下，较低浓度的0.134%三乙胺乙腈溶液，即保证了适宜的衍生化反应碱度，确保衍生化反应完全，而且衍生化反应后溶液ph值不大于10，更适用于普通色谱柱分析。（4）采用首创...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢友亮，林川，陈沛，郑晓琴，吴美芳，宋洋，郭淋凯，
申请(专利权)人：宁德市食品药品检验检测中心，
类型：发明
国别省市：