一种非洲猪瘟LAMP-CRISPR检测试剂及其检测方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种非洲猪瘟LAMP‑CRISPR检测试剂及其检测方法和应用，其优点在于，所述检测试剂包括LAMP反应体系、CRISPR反应体系，将LAMP核酸扩增与CRISPR/Cas12a核酸检测方法相结合，采用一管两步法，在管底设置LAMP反应体系，管盖设置CRISPR反应体系，并采用液封封闭液面，能同时检测非洲猪瘟Ⅰ型和/或Ⅱ型，其检测方法简单，检测效率高，检测结果具有良好的灵敏性、特异性和重复性，在非洲猪瘟Ⅰ型和Ⅱ型的检测中具有重要的应用价值和应用意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物检测，尤其涉及非洲猪瘟检测，具体涉及一种非洲猪瘟lamp-crispr检测试剂及其检测方法和应用。

技术介绍

1、非洲猪瘟(african swine fever，asfv)，是由非洲猪瘟病毒(african swinefever virus)感染家猪和各种野猪(如非洲野猪、欧洲野猪等)而引起的一种急性、出血性、烈性传染病，又称非洲猪瘟疫或疣猪病，世界动物卫生组织将其列为法定报告动物疫病，也是我国重点防范的一类动物疫情。非洲猪瘟病毒可以感染不同年龄段的所有猪群，急性症状最为常见，且非洲猪瘟引起的临床病程较短、发病比较急，最急性和急性感染死亡率高达100％，通常在病毒抗体产生以前动物已经发病死亡。该病的临床症状主要表现为发热、出血以及皮肤发绀，甚至出现血块。病理剖检后通常可见脾脏异常肿大和淤血，淋巴结、肝脏和肾脏出血，这些临床症状与经典猪瘟、蓝耳病、伪狂犬病等很难区分，因此一般通过实验室手段进行非洲猪瘟的诊断和确诊。

2、目前非洲猪瘟尚没有安全有效的商品化疫苗，主要的实验室诊断方法有：红细胞吸附试验，直接免疫荧光试验，间接免疫荧本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种非洲猪瘟LAMP-CRISPR检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包括CRISPR反应体系，所述CRISPR反应体系包括用于区分非洲猪瘟Ⅰ型和/或非洲猪瘟II型的sgRNA；其中，用于检测非洲猪瘟Ⅰ型的sgRNA序列如SEQ ID NO：11～SEQ ID NO：16所示，用于检测非洲猪瘟Ⅱ型的sgRNA序列如SEQ ID NO：17～SEQ ID NO：30所示。

2.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述CRISPR反应体系还包括V-A型Cas蛋白和反式切割报告分子ssDNA。

3.根据权利要求2所述的检测试剂，其特征在于，所述V-A型Cas蛋白...

【技术特征摘要】

1.一种非洲猪瘟lamp-crispr检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包括crispr反应体系，所述crispr反应体系包括用于区分非洲猪瘟ⅰ型和/或非洲猪瘟ii型的sgrna；其中，用于检测非洲猪瘟ⅰ型的sgrna序列如seq id no：11～seq id no：16所示，用于检测非洲猪瘟ⅱ型的sgrna序列如seq id no：17～seq id no：30所示。

2.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述crispr反应体系还包括v-a型cas蛋白和反式切割报告分子ssdna。

3.根据权利要求2所述的检测试剂，其特征在于，所述v-a型cas蛋白为cas12a；

4.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂还包括用于检测非洲猪瘟ⅰ型和/或非洲猪瘟ii型的lamp反应体系，所述lamp反应体系包括lamp引物组合物；其中，所述lamp引物组合物包括如seq id no：3～seq id no：6所示序列的扩增引物1和/或如seqid no：7～seq id no：10所示序列的扩增引物2。

5.根据权利要求4所述的检测试剂，其特征在于，所述crispr反应体系包括cas12a、如seq id n...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨德全，王建，杨显超，李鑫，沈海潇，鞠厚斌，葛菲菲，赵洪进，王晓旭，向蒙，冯桂丹，
申请(专利权)人：上海市动物疫病预防控制中心上海市兽药饲料检测所，上海市畜牧技术推广中心，
类型：发明
国别省市：