一种5-羟甲基糠醛诱导的氧化应激模型的构建方法技术

本发明专利技术属于动物模型评价技术领域，公开了一种5‑羟甲基糠醛诱导的氧化应激模型的构建方法。包括以下步骤：S1，对实验果蝇进行培养；S2，果蝇发育周期测定；S3，果蝇血淋巴中的ROS的定量分析；S4，测定SOD、CAT酶活力和MDA含量。本发明专利技术用含有5‑羟甲基糠醛的食物喂食果蝇构建用于研究食品中伴生危害物副作用的动物模型，以正常食物作为对照，在喂食含5‑羟甲基糠醛的食物后对果蝇的体内和肠道抗氧化应激能力测定，本发明专利技术可用于建立在果蝇食品中伴生危害物引起副作用的氧化损伤动物（果蝇）模型并对其进行评价，建立减轻伴生危害物引起机体氧化损伤生物活性物质的高通量筛选平台。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于动物模型评价，特别涉及一种5-羟甲基糠醛诱导的氧化应激模型的构建方法。

技术介绍

1、5-羟甲基糠醛（5-hydroxymethylfurfural，5-hmf）是一种常见的食品加工污染物，美拉德反应和焦糖化反应都是其主要的生成途径。值得注意的是，与其他伴生危害物（如丙烯酰胺、晚期糖基化终末产物）相比，5-hmf在大多数食品中的含量要高出几个数量级，并且广泛存在于各种食品中，如蜂蜜、咖啡、干果、果汁、早餐麦片、面包、奶粉和酒类产品。

2、当前对于伴生危害物5-羟甲基糠醛的研究大多是体内或体外细胞实验，体内实验中哺乳动物造模时间长、费用高并且存在动物伦理等因素使得在研究中受到诸多限制。体外实验仅在体外单细胞水平上做出毒性评估，而受试动物相对于细胞水平则更加复杂。因此，缺少合适的探究5-羟甲基糠醛副作用动物模型。

3、尽管人们越来越关注5-羟甲基糠醛等伴生危害物的有害影响，但目前几乎还没有利用黑腹果蝇模型进行5-羟甲基糠醛的毒性评价的报道。黑腹果蝇具有易于饲养、生命周期短、繁殖能力强、染色体简单、突变表型多且易于观察等诸多本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种5-羟甲基糠醛诱导的氧化应激模型的构建方法，其特征在于包括以下操作步骤：

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于：步骤S1中所述5-羟甲基糠醛的纯度为≥99%，所用浓度为5mM-50mM。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于：步骤S2中所述果蝇发育周期测定具体是将雌雄果蝇成虫50对，放入正常培养基中产卵1 h后，将成虫倒出，在体式显微镜下挑出形态大小均一的受精卵于实验培养基中培养，每天定时定点观察并同时记录，分别计算从卵到前蛹、从卵到成虫的发育时间。

4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于：步骤S3中所述果蝇血淋巴中的RO...

【技术特征摘要】

1.一种5-羟甲基糠醛诱导的氧化应激模型的构建方法，其特征在于包括以下操作步骤：

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于：步骤s1中所述5-羟甲基糠醛的纯度为≥99%，所用浓度为5mm-50mm。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于：步骤s2中所述果蝇发育周期测定具体是将雌雄果蝇成虫50对，放入正常培养基中产卵1 h后，将成虫倒出，在体式显微镜下挑出形态大小均一的受精卵于实验培养基中培养，每天定时定点观察并同时记录，分别计算从卵到前蛹、从卵到成虫的发育时间。

4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于：步骤s3中所述果蝇血淋巴中的ros的定量分析具体按照以下操作：称取果蝇三龄幼虫，用pbs清洗后用滤纸吸干水分，置于1.5ml离心管中，按质量体积比1g:9ml的比例加入 pbs缓冲液，用珠磨机充分匀浆，匀浆液在7500 rpm、4℃条件下离心10 min，离心完成后，在荧光专用黑色96孔板中加入190 μl稀释5~10倍后的匀浆上清液和10 μl o12荧光探针；37℃下避光孵育...

【专利技术属性】
技术研发人员：张媛媛，陈珣琳，林晓蓉，陈忠正，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：