基于超薄切片和明场光镜下的光镜-电镜联动方法技术

本发明专利技术公开了一种基于超薄切片的光镜‑电镜联动方法。该方法步骤如下：1.按照常规的电镜方法制备样品包埋块；2.将包埋块的样品在超薄切片机上切下一张100‑400nm的超薄切片，常规染料染色后，在普通明场光镜高倍下拍照片a；3.紧接着再连续切出一张50‑100nm的超薄切片，常规染色后，以高分辨的透射或扫描电镜拍下照片b；4.利用拍照b的高分辨优势，确定照片b和照片a相同位点细胞的结构特征和名称，以对光镜和电镜下的形态结构进行相互佐证和联动；5.最后利用光镜具有宽视野的优势，对组织细胞的结构进行定性定量分析；细胞和大部分细胞器直径超过200nm，连续获取两个断面的形态结构非常相似，通过本发明专利技术可以以较成本进行光镜‑电镜的联动，具有推广价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于现代生物医学，具体涉及一种基于超薄切片的光镜-电镜联动的观察方法。

技术介绍

1、显微镜主要分为光学显微镜和电子显微镜是现代生命科学、农林科学和医学研究中的两类主要的观测设备。显微镜的分辨，除了受阿贝原则所列的入射光波长、介质和镜口率这三大参数之外，切片厚度和光源的纯度也影响分辨率。根据阿贝原则，一般光镜的极限分辨率在200nm，其操作简便，仪器较为便宜，视野范围宽；电镜的分辨率可达0.2nm，操作复杂，仪器价格高，视野范围较狭窄。目前组织细胞在眀场观察中的方法主要有三类：石蜡切片、冷冻切片、组织细胞的铺片或爬片，但是三者的观察厚度一般可在5-15微米，分辨率较低，不适合光-电联动分析。

2、为了能结合二者的优点，市面上出现了多种光镜-电镜联动的装置。其基本原理都是基于激光扫面共聚焦显微镜的免疫荧光标记技术和电子显微镜的联动，激光扫描共聚焦显微镜由于使用比减少色差的激光作为光源，其分辨较明场的光镜高。目前性能较高的激光扫描共聚焦显微镜价格不菲，其价格在150-600万人民币之间，而且只能标记特定的蛋白分子。p>

3、显微镜本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.基于超薄切片明场下的光镜-电镜联动方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种基于超薄切片明场下的光镜-电镜联动方法，其特征在于，步骤（1）中，混合固定液包括多聚甲醛、戊二醛、磷酸盐缓冲液或二甲胂酸钠缓冲液，混合固定液中，多聚甲醛的体积百分比为2%、戊二醛的体积百分比为2%；磷酸盐缓冲液或二甲胂酸钠缓冲液的浓度为0.1M；锇酸在混合固定液中的质量百分比为0.5-2%。

3.根据权利要求1所述的一种基于超薄切片明场下的光镜-电镜联动方法，其特征在于，步骤（3）中，渗透处理的具体步骤包括：环氧丙烷置换后的样品中加入体积比为1:1的环氧丙烷与Epo...

【技术特征摘要】

1.基于超薄切片明场下的光镜-电镜联动方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种基于超薄切片明场下的光镜-电镜联动方法，其特征在于，步骤（1）中，混合固定液包括多聚甲醛、戊二醛、磷酸盐缓冲液或二甲胂酸钠缓冲液，混合固定液中，多聚甲醛的体积百分比为2%、戊二醛的体积百分比为2%；磷酸盐缓冲液或二甲胂酸钠缓冲液的浓度为0.1m；锇酸在混合固定液中的质量百分比为0.5-2%。

3.根据权利要求1所述的一种基于超薄切片明场下的光镜-电镜联动方法，其特征在于，步骤（3）中，渗透处理的具体步骤包括：环氧丙烷置换后的样品中加入体积比为1:1的环氧丙烷与epon812或spurr混合物中处理1小时后，加入体积比为1:2的环氧丙烷与epon812或spurr混合物中处理1小时，然后再加入纯的epon812或spurr处理2次，每次1小时。

4.根据权利要求1所述的一种基于超薄切片明场下的光镜-电镜联动方法，其特征在于，步...

【专利技术属性】
技术研发人员：甘光明，盛清远，陈梅，庞宣，张亦哲，
申请(专利权)人：东南大学，
类型：发明
国别省市：