一种超灵敏的特定蛋白质检测方法技术

本发明专利技术公开了一种超灵敏的特定蛋白质检测方法，本检测方法包括如下步骤：S1、制备具有超顺磁性的功能化的蛋白捕获磁珠；S2、使用功能化的蛋白捕获磁珠进行蛋白捕获抓取，得到磁珠蛋白复合物；S3、将清洗后的磁珠蛋白复合物与连接了Amp‑oligo的特异性配适体进行孵育，得到磁珠复合体；S4、洗脱未结合的配适体，将磁珠复合体加热，配适体变性后洗脱；S5、使用针对Amp‑Oligo设计的特异性引物和5’水解探针对洗脱的配适体进行定量PCR扩增检测；S6、根据检测结果，换算得到目的蛋白质的初始浓度；本发明专利技术具有灵敏度高、背景噪音低、操作简便、耗时短和检测灵活，易于开展的优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及蛋白质检测，具体为一种超灵敏的特定蛋白质检测方法。

技术介绍

1、蛋白质是由α-氨基酸残基组成的生物大分子，是生物体的重要组成部分和功能物质。作为生命活动的直接参与者，蛋白质发挥着多种功能：参与生物体内新陈代谢的调节、运输代谢物质、控制神经反应和神经传递以及参与免疫、细胞分化、细胞凋亡等关键过程。对于特定蛋白质标志物的检测，在生物医学领域如临床诊断、疾病分型和药物筛选等方面有着十分重要的意义。

2、目前，针对特定目标蛋白的检测方法，多基于抗原抗体的免疫反应原理，通过特异性的抗体来识别目标蛋白，通过化学发光底物显色来定量或者半定量目标蛋白的含量。

3、目前常用的特定蛋白质检测方法主要有以下两种：一是免疫印迹(westernblotting)，这是一种经典的技术，通过使用特异性抗体来检测蛋白质样品中的特定蛋白质。样品首先通过凝胶电泳分离，然后转移到膜上，使用一抗和二抗进行检测。信号通过化学发光或荧光方式被检测和可视化。为了提高低丰度蛋白的检测灵敏度，可以采用高灵敏度的化学发光底物，如supersignal west att本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种超灵敏的特定蛋白质检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种超灵敏的特定蛋白质检测方法，其特征在于，所述步骤S1中，通过如下方法制备具有超顺磁性的功能化的蛋白捕获磁珠：

3.根据权利要求1所述的一种超灵敏的特定蛋白质检测方法，其特征在于，所述步骤S2具体包括如下细分步骤：

4.根据权利要求3所述的一种超灵敏的特定蛋白质检测方法，其特征在于，所述洗涤缓冲液由0.05％CHAPS、150mM氯化钾、10mM Tris和1mM EDTA组成，所述洗涤缓冲液的pH值为7.4。

5.根据权利要求1所述的一种超灵敏的特定...

【技术特征摘要】

1.一种超灵敏的特定蛋白质检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种超灵敏的特定蛋白质检测方法，其特征在于，所述步骤s1中，通过如下方法制备具有超顺磁性的功能化的蛋白捕获磁珠：

3.根据权利要求1所述的一种超灵敏的特定蛋白质检测方法，其特征在于，所述步骤s2具体包括如下细分步骤：

4.根据权利要求3所述的一种超灵敏的特定蛋白质检测方法，其特征在于，所述洗涤缓冲液由0.05％chaps、150mm氯化钾、10mm tris和1mm edta组成，所述洗涤缓冲液的ph值为7.4。

5.根据权利要求1所述的一种超灵敏的特定蛋白质检测方法，其特征在于，所述步骤s3具体包括如下细分步骤：

6.根据权利要求5所述的一种超灵敏的特定蛋白质检测方法，其特征在于，所述步骤s31中，所述特异性配适体的核酸序列为：acaaagcgacacacaggagcc gggacgaagaccaaccgaacccccgggcggcaacaggcagccccggccgccccccgcccg...

【专利技术属性】
技术研发人员：李蕾，张晓光，王均永，
申请(专利权)人：苏州海斗量基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：