从虎杖中提取分离白藜芦醇的方法技术

本发明专利技术涉及一种从虎杖中提取分离白藜芦醇的方法，该方法包括粉碎、酶解、提取、离心、柱分离、重结晶或粉碎、提取、酶解、离心、柱分离、重结晶步骤。通过在酶解步骤中加入水解酶，再通过柱层析的分离，其中柱层析所用填料为聚丙烯酸树脂ＣＧ７１、聚丙烯酸树脂ＲＰＣ？４０、聚苯乙烯树脂ＣＧ１６１、聚苯乙烯树脂ＣＧ３００、葡聚糖凝胶Ｓｅｐｈａｄｅｘ？Ｇ－２５或葡聚糖凝胶Ｓｅｐｈａｄｅｘ？ＬＨ－２０中的一种，解决了现有从虎杖中提取分离白藜芦醇方法成本高，产品收率低，不能将白藜芦醇甙进一步转化为白藜芦醇，工艺繁琐、周期长，不适用于工业化大生产的技术问题。该方法成本低、收率高、工艺简单、生产周期短，适用于工业化大生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种黄酮类化合物的提取分离领域，具体涉及一种。
技术介绍
白藜芦醇(Resveratrol)，又叫三羟基芪，分子式C14H1203，相对分子质量为 228.24。白藜戸醇是无味，灰白色或白色粉末，难溶于冷水，能溶于热水、乙醚、乙醇、甲醇、 乙酸乙酯、丙酮等，熔点为256 257°C。白藜芦醇是从寥科植物虎杖的根茎和根或者葡萄 属葡萄科植物葡萄的果皮中提取出来的一种黄酮类化合物。1940年首次发现白藜芦醇，20 世纪70年代首次发现葡萄中含有这种物质，后来人们发现虎杖、花生、桑椹等植物中也含 有这种成分。白藜芦醇是一种重要的植物抗毒素，它能够阻止低密度脂蛋白的氧化，因而具 有潜在的防心血管疾病、防癌、抗病毒及免疫调节作用，它被美国专著《抗衰老圣典》 一书列 为100种最热门有效抗衰老物质之一，成为全世界研究的热点。 目前，白藜芦醇的制备方法有化学合成法，植物细胞培养法和天然产物提取法。 现合成白藜芦醇需要通过5步以上的合成工艺才能达到98%的含量，并且合成工 艺条件苛刻，试剂昂贵，收率低，很难实现工业化生产； 植物细胞培养技术，是指在不改变植物天然属性的基本特性的前提下，把本来应 在天然环境中生长的植物，置于完全人工受控的反应环境中，并利用优化的细胞繁殖条件 促使植物细胞高速繁殖，然后从细胞中提取对人类有用的天然的药用成分，这一技术仅限 于小实验的培养，并且培养过程中人为控制严格，操作复杂，对于工业化大生产还需深入的 研究和探讨。 从天然产物中提取和分离白藜芦醇，既充分利用了我国丰富的自然资源，又具有 经济可行的生产优势。 中国专利CN 1116264C 白藜戸醇和白藜戸醇甙分离方法及其应用和中国专利 CN1724495A 从中草药植物虎杖中制备白藜芦醇的方法主要采用将虎杖根茎用有机溶剂 提取，经乙酸乙酯萃取、浓縮、柱层析和重结晶，得到纯度高达97%以上的白藜芦醇和白藜 芦醇甙。但是，该方法是用乙酸乙酯萃取，乳化现象明显，产品损失严重，从而导致收率降 低，且该方法是从虎杖中将白藜芦醇和白藜芦醇甙提取分离出来，没有将白藜芦醇甙转化 为白藜芦醇，这一步骤没有实施，也会影响白藜芦醇的收率。 中国专利CN1269831C 虎杖甙和白藜芦醇的新制备方法提出一种虎杖苷和白藜 芦醇的新制备方法，它是用聚酰胺层析法分离纯化虎杖苷和白藜芦醇。该专利中用聚酰胺 树脂分离，聚酰胺树脂目数比较细，容易堵柱，并且专利中没有将虎杖甙转化为白藜芦醇， 工艺不经济。 中国专利CN 1513822A 虎杖提取高纯白藜芦醇工艺，本专利技术简化了工艺和操作 程序，縮短了生产周期，降低了生产成本，提高了产品收率和纯度。此工艺利用微生物转化， 用40%乙醇与4-甲基-2-戊醇混合剂作为萃取溶剂，利用较好的设备微波提取，縮短生产周期，但是将微波提取用于规模化生产现在仍旧有一定的难度，工艺不可行，仅局限于实验 室的实验。 中国专利CN 1384088A —种从虎杖植物中提取白藜戸醇的制备方法和中国专 利CN 1926592A —种从中药虎杖中分离纯化白藜戸醇苷和白藜戸醇的方法分别采用专 用的高压层析柱和高速逆流色谱法分离白藜芦醇，设备成本高，仅能达到公斤级生产，产率 低，生产成本高，局限于实验室的分离，不适用大生产。 中国专利CN1090603C—种从中药虎杖中提取白藜芦醇的工艺，本专利技术涉及一种 药用原料白藜芦醇的提取工艺。所述的提取工艺为在粉末状虎杖原料中加入复合酶在恒 温下进行酶解反应48-72小时获得酶解原料；再用溶解萃取、浓縮获得含白藜芦醇的半成 品，再经精制即得。此专利工艺简单，但需要反复结晶才能得到白藜芦醇的精品，反复重结 晶会造成产品收率低，损耗大，生产成本高的缺点。
技术实现思路
为了解决
技术介绍
中存在的从虎杖中提取分离白藜芦醇方法成本高，没有将白藜芦醇甙转化为白藜芦醇，白藜芦醇收率低，且工艺繁琐、周期长，不适用于工业化大生产的技术问题，本专利技术提供了一种成本低、白藜芦醇收率高、工艺简单、周期短，适用于工业化大生产的。 本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是 ，包括以下步骤 1)粉碎 将虎杖原料粉碎； 2)酶解 将步骤1)粉碎后的原料中加入原料重量1 2倍量的水和原料重量1%。 10%。 的水解酶，拌匀，在35 4(TC条件下酶解12 48h，将酶解后的原料干燥；该水解酶可以是 纤维素酶、植物提取复合酶、淀粉酶、果胶酶或P-葡聚糖苷酶的一种、两种或两种以上的 混合酶； 3)提取 将步骤2)酶解后的干燥原料，用提取溶剂回流或冷浸提取，将提取液浓縮至比重 为1. 10 1. 30，该比重是在60 7(TC，常压下测定的，然后加入体积为浓縮液体积1 3 倍量的水，沉降； 4)离心 将步骤3)制得的加水浓縮液离心，过滤，得到沉淀； 5)柱分离 5. 1)沉淀溶解拌样 取沉淀重量1倍量的体积浓度为60 80%的甲醇或乙醇加入步骤4)的沉淀中溶 解，得到溶解液和沉淀，弃沉淀，将溶解液与柱填料拌样，烘干，得到拌样样品； 所加柱填料与步骤4)得到的沉淀的质量比为1:2; 柱填料可以是聚丙烯酸树脂CG71、聚丙烯酸树脂RPC40、聚苯乙烯树脂CG161、聚 苯乙烯树脂CG300、葡聚糖凝胶S印hadex G-25或葡聚糖凝胶S印hadex LH-20中的一种； 5. 2)上柱 取步骤5. 1)制得的拌样样品与柱层析填料上柱，再用洗脱体系进行洗脱，通过薄层层析法检查各流份，收集含有白藜芦醇的流份，浓縮至原体积的1/10 1/3，放置产生结曰曰曰5 拌样样品与柱层析填料的质量比为i : 3 i : 15; 柱层析填料可以是聚丙烯酸树脂CG71、聚丙烯酸树脂RPC40、聚苯乙烯树脂 CG161、聚苯乙烯树脂CG300、葡聚糖凝胶S印hadex G-25或葡聚糖凝胶S印hadex LH-20 ; 6)重结晶 将步骤5. 2)产生的结晶用离心机或板框过滤器过滤，得到粗结晶，将此粗结晶用 粗结晶重量的1 4倍量的体积浓度为80% _95%的甲醇或乙醇重结晶，得到含量不低于 98%的白藜芦醇。 上述步骤2)中加入的最佳水解酶为13 -葡聚糖苷酶和果胶酶的混合酶，用量为原 料重量的4%。， P-葡聚糖苷酶与果胶酶的质量比为19 : 1，酶解温度为37t:，酶解时间为 36h时最佳; 上述提取溶剂可以是甲醇、乙醇、乙酸乙酯或丙酮； 上述洗脱体系可以是甲醇/水、乙醇/水、丙酮/水或石油醚/乙酸乙酯体系； 上述步骤3)中提取溶剂是丙酮，冷浸提取，将提取液浓縮至比重为1.21，该比重 是在65t:，常压下测定的，向浓縮液中加入体积为浓縮液体积2倍量的水；步骤5. 1)中取 沉淀重量1倍量的体积浓度为70X的甲醇，柱填料为聚苯乙烯树脂CG161 ;步骤5.2)中上 柱所用的拌样样品与柱层析填料的质量比为1 : 8;柱层析填料为聚苯乙烯树脂CG161;洗 脱体系为石油醚/乙酸乙酯洗脱体系；步骤6)中使用离心机过滤，得到粗结晶，将粗结晶用 粗结晶重量的2倍量的体积浓度为95%的甲醇重结晶为最佳。 本专利技术解决其技术问题所采用的另一技术方案是 ，包括以下步骤 1)粉碎 将虎杖原料粉碎； 2)提取 将步骤1)粉碎后的原料，用提取溶剂回流或本文档来自技高网...

【技术保护点】
从虎杖中提取分离白藜芦醇的方法，包括以下步骤：　　１）粉碎　　将虎杖原料粉碎；　　２）酶解　　将步骤１）粉碎后的原料中加入原料重量１～２倍量的水和原料重量１‰～１０‰的水解酶，拌匀，在３５～４０℃条件下酶解１２～４８ｈ，将酶解后的原料干燥；所述水解酶是纤维素酶、植物提取复合酶、淀粉酶、果胶酶或β－葡聚糖苷酶的一种、两种或两种以上的混合酶；　　３）提取　　将步骤２）酶解后的干燥原料，用提取溶剂回流或冷浸提取，将提取液浓缩至比重为１．１０～１．３０，该比重是在６０～７０℃，常压下测定的，然后加入体积为浓缩液体积１～３倍量的水，放置沉降；　　４）离心　　将步骤３）制得的加水浓缩液离心，过滤，得到沉淀；　　５）柱分离　　５．１）沉淀溶解拌样　　取沉淀重量１倍量的体积浓度为６０～８０％的甲醇或乙醇加入步骤４）的沉淀中溶解，得到溶解液和沉淀，弃沉淀，将溶解液与柱填料拌样，烘干，得到拌样样品，所加柱填料与步骤４）得到的沉淀的质量比为１∶２；所述柱填料为聚丙烯酸树脂ＣＧ７１、聚丙烯酸树脂ＲＰＣ４０、聚苯乙烯树脂ＣＧ１６１、聚苯乙烯树脂ＣＧ３００、葡聚糖凝胶Ｓｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ－２５或葡聚糖凝胶Ｓｅｐｈａｄｅｘ　ＬＨ－２０中的一种；　　５．２）上柱　　取步骤５．１）制得的拌样样品与柱层析填料上柱，再用洗脱体系进行洗脱，通过薄层层析法检查各流份，收集含有白藜芦醇的流份，浓缩至原体积的１／１０～１／３，放置产生结晶；所述拌样样品与柱层析填料的质量比为１∶３～１∶１５，所述柱层析填料为聚丙烯酸树脂ＣＧ７１、聚丙烯酸树脂ＲＰＣ４０、聚苯乙烯树脂ＣＧ１６１、聚苯乙烯树脂ＣＧ３００、葡聚糖凝胶Ｓｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ－２５或葡聚糖凝胶ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－２０；　　６）重结晶　　将步骤５．２）产生的结晶用离心机或板框过滤器过滤，得到粗结晶，将此粗结晶用粗结晶重量的１～４倍量的体积浓度为８０％－９５％的甲醇或乙醇重结晶，得到含量不低于９８％的白藜芦醇。...

【技术特征摘要】
从虎杖中提取分离白藜芦醇的方法，包括以下步骤1)粉碎将虎杖原料粉碎；2)酶解将步骤1)粉碎后的原料中加入原料重量1～2倍量的水和原料重量1‰～10‰的水解酶，拌匀，在35～40℃条件下酶解12～48h，将酶解后的原料干燥；所述水解酶是纤维素酶、植物提取复合酶、淀粉酶、果胶酶或β-葡聚糖苷酶的一种、两种或两种以上的混合酶；3)提取将步骤2)酶解后的干燥原料，用提取溶剂回流或冷浸提取，将提取液浓缩至比重为1.10～1.30，该比重是在60～70℃，常压下测定的，然后加入体积为浓缩液体积1～3倍量的水，放置沉降；4)离心将步骤3)制得的加水浓缩液离心，过滤，得到沉淀；5)柱分离5.1)沉淀溶解拌样取沉淀重量1倍量的体积浓度为60～80％的甲醇或乙醇加入步骤4)的沉淀中溶解，得到溶解液和沉淀，弃沉淀，将溶解液与柱填料拌样，烘干，得到拌样样品，所加柱填料与步骤4)得到的沉淀的质量比为1∶2；所述柱填料为聚丙烯酸树脂CG71、聚丙烯酸树脂RPC40、聚苯乙烯树脂CG161、聚苯乙烯树脂CG300、葡聚糖凝胶Sephadex G-25或葡聚糖凝胶Sephadex LH-20中的一种；5.2)上柱取步骤5.1)制得的拌样样品与柱层析填料上柱，再用洗脱体系进行洗脱，通过薄层层析法检查各流份，收集含有白藜芦醇的流份，浓缩至原体积的1/10～1/3，放置产生结晶；所述拌样样品与柱层析填料的质量比为1∶3～1∶15，所述柱层析填料为聚丙烯酸树脂CG71、聚丙烯酸树脂RPC40、聚苯乙烯树脂CG161、聚苯乙烯树脂CG300、葡聚糖凝胶Sephadex G-25或葡聚糖凝胶Sephadex LH-20；6)重结晶将步骤5.2)产生的结晶用离心机或板框过滤器过滤，得到粗结晶，将此粗结晶用粗结晶重量的1～4倍量的体积浓度为80％-95％的甲醇或乙醇重结晶，得到含量不低于98％的白藜芦醇。2. 根据权利要求1所述的从虎杖中提取分离白藜芦醇的方法，其特征在于所述步骤2) 中加入的水解酶为！3-葡聚糖苷酶和果胶酶的混合酶，用量为原料重量的4%。， |3-葡聚 糖苷酶与果胶酶的质量比为19 : 1，酶解温度为37t:，酶解时间为36h。3. 根据权利要求1或2所述的从虎杖中提取分离白藜芦醇的方法，其特征在于所述 提取溶剂是甲醇、乙醇、乙酸乙酯或丙酮。4. 根据权利要求3所述的从虎杖中提取分离白藜芦醇的方法，其特征在于所述洗脱 体系为甲醇/水、乙醇/水、丙酮/水或石油醚/乙酸乙酯体系。5. 根据权利要求4所述的从虎杖中提取分离白藜芦醇的方法，其特征在于所述步骤3) 中提取溶剂是丙酮，冷浸提取，将提取液浓縮至比重为1.21，该比重是在65t:，常压下测定的，向浓縮液中加入体积为浓縮液体积2倍量的水；所述步骤5. 1)中取沉淀重量1倍量 的体积浓度为70X的甲醇，柱填料为聚苯乙烯树脂CG161 ;所述步骤`5.2)中上柱所用的拌样样品与柱层析填料的质量比为1 : 8;柱层析填料为聚苯乙烯树脂CG161;洗脱体系为石油醚/乙酸乙酯洗脱体系；所述步骤6)中使用离心机过滤，得到粗结晶，将粗结晶用粗结晶 重量的2倍量的体积浓度为95%的甲醇重结晶。6. 从虎杖中提取分离白藜芦醇的方法，包括以下步...

【专利技术属性】
技术研发人员：王春德，高强，邓尚勇，焦珂，王芸珍，
申请(专利权)人：三原润禾植化有限公司，
类型：发明
国别省市：87[中国|西安]