一种慢病毒载体制备方法技术

本发明专利技术涉及CAR慢病毒载体系统及制备方法，属于生物技术领域。包括pELNS‑CAR质粒、2个包装质粒pRSV‑rev和pGAG‑Pol，包膜蛋白质粒pVSV‑G。将载体系统中的pELNS‑CAR质粒、2个包装质粒pRSV‑rev和pGAG‑Pol，包膜蛋白质粒pVSV‑G共同转染293T细胞后，即可获得慢病毒上清。本发明专利技术具有以下特点：1)成本低，以转染5个T150的细胞为例，推荐使用的脂质体2000体积为1350μl(270μl×5)价格约为2000元，而使用本方法的成本可降至50元，成本可大幅降低；2)转染效率高；3)病毒滴度高，可达到8.4×10<supgt;8</supgt;TU/ml。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于慢病毒载体构建，具体涉及一种含有car基因的慢病毒载体及其构建方法。

技术介绍

1、在以病毒为载体对细胞进行感染，将外源性基因导入细胞内，以达到基因干扰，对靶基因进行操作方面，目前最常用的有腺病毒，逆转录病毒和慢病毒三种，但这三种病毒各有其利弊。早期使用的腺病毒系统，不能整合至靶细胞的基因组，只能瞬时表达，更为致命的是腺病毒的某些抗原表达，也很容易引起人体的免疫反应，所以在使用上有一定的局限性。反转录病毒载体是常用的病毒载体之一，是由具有感染性的小鼠的白血病病毒改造而来，能将非病毒基因导入细胞体内或体外进行有丝分裂。这些载体能产生病毒基因组的单一拷贝并高效准确地整和到宿主染色体的感染，但逆转录病毒只能感染分裂细胞，而且还存在有致癌的危险。相比之下，慢病毒(lentivirus)载体是以hiv-1(人类免疫缺陷i型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体，区别于一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。

2、慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种含有CAR(Chimeric antigen receptor，嵌合抗原实体)基因的慢病毒载体，其特征在于所述慢病毒载体包括CAR基因序列、慢病毒载体pELNS的基本序列、Nhe I酶切位点、Xho I酶切位点。

2.根据权利要求1所述含有CAR基因的慢病毒载体的制备方法，其特征在于，首先获得CAR基因，将CAR基因亚克隆到pELNS慢病毒质粒载体上，制备获得pELNS-CAR慢病毒载体。

3.根据权利要求2所述含有CAR基因的慢病毒载体的制备方法，其特征在于，通过CAR全基因合成，获得pUC57-CAR载体。

4.根据权利要求3所述含有CAR...

【技术特征摘要】

1.一种含有car(chimeric antigen receptor，嵌合抗原实体)基因的慢病毒载体，其特征在于所述慢病毒载体包括car基因序列、慢病毒载体pelns的基本序列、nhe i酶切位点、xho i酶切位点。

2.根据权利要求1所述含有car基因的慢病毒载体的制备方法，其特征在于，首先获得car基因，将car基因亚克隆到pelns慢病毒质粒载体上，制备获得pelns-car慢病毒载体。

3.根据权利要求2...

【专利技术属性】
技术研发人员：王恩秀，汪晨，
申请(专利权)人：南京卡提医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：