一种引物与探针组合及其方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种引物与探针组合及其方法和应用。本发明专利技术涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种RAA‑LFD检测转基因玉米事件DBN9858的引物与探针组合及其方法和应用。本发明专利技术根据外源插入DNA序列与玉米基因组的连接区域设计大量RAA引物，从中筛选出一对可快速有效检测出转基因玉米中DB N9858成分的引物及探针组合。以转基因玉米DBN9858基因组DNA为模板，利用该对引物和探针进行RAA扩增及免疫层析检测，具有操作简便、速度快、特异性好、灵敏度高的特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学，具体涉及一种raa-lfd检测转基因玉米事件dbn9858的引物与探针组合及其方法和应用。

技术介绍

1、转基因玉米中dbn9858是由北京大北农生物技术有限公司开发的转epsps基因和pat基因耐除草剂玉米品种。该品系已于2020年7月获得中国农业转基因生物安全证书(生产应用)(农基安证字(2020)第195号)，产业化应用前景广阔。伴随我国转基因产业化进程的不断推进，转基因监管的任务将越来越重。目前已报道的对转基因玉米dbn9858的检测方法主要是利用pcr等常规实验室检测技术，这些技术对人员专业素质要求较高，且需要昂贵的pcr仪、凝胶成像系统等专业设备，扩增和产物检测时间较长(约2～3h)，难以达到田间快速检测目的，因此，亟需开发一种操作简便、准确快速、低成本、且适用于现地即时检测新技术。

2、目前核酸等温扩增(isothermal amplification)技术研究较多，与传统pcr核酸扩增技术相比较，等温扩增技术具有敏感性高、特异性强、简单方便、反应快速、不需要复杂精密仪器等优点。其中，重组酶介导等温核酸扩本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种RAA-LFD检测转基因玉米事件DBN9858的引物与探针组合，其特征在于，所述正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，所述探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示。

2.根据权利要求1所述的引物与探针组合，其特征在于，所述探针序列的修饰如下：探针的5’端标记荧光素FAM基团，探针的第31位腺嘌呤(A)替换为dSpacer，探针的3’端添加C3-Spacer。

3.一种检测转基因玉米DBN9858事件的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的引物和探针组合。

4.一...

【技术特征摘要】

1.一种raa-lfd检测转基因玉米事件dbn9858的引物与探针组合，其特征在于，所述正向引物的核苷酸序列如seq id no.1所示，所述反向引物的核苷酸序列如seq id no.9所示，所述探针的核苷酸序列如seq id no.10所示。

2.根据权利要求1所述的引物与探针组合，其特征在于，所述探针序列的修饰如下：探针的5’端标记荧光素fam基团，探针的第31位腺嘌呤(a)替换为dspacer，探针的3’端添加c3-spacer。

3.一种检测转基因玉米dbn9858事件的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的引物和探针组合。

4.一种raa-lfd检测转基因玉米事件dbn9858的方法，其特征在于，包括如下步骤：

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述raa扩增体系为50μl，其中，再...

【专利技术属性】
技术研发人员：高艳春，李彦伟，王海燕，宋程，赵少伟，冯会贤，孙盼盼，
申请(专利权)人：北京科牧丰生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：