一种引物与探针组合及其方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种引物与探针组合及其方法和应用。本发明专利技术涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种RAA‑LFD检测转基因玉米事件DBN9936的引物与探针组合及其方法和应用。本发明专利技术根据外源插入DNA序列与玉米基因组的连接区域设计大量RAA引物，从中筛选出一对可快速有效检测出转基因玉米中DBN9936成分的引物及探针组合。以转基因玉米DBN9936基因组DNA为模板，利用该对引物和探针进行RAA扩增及免疫层析检测，具有操作简便、速度快、特异性好、灵敏度高的特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学，具体涉及一种raa-lfd检测转基因玉米事件dbn9936的引物与探针组合及其方法和应用。

技术介绍

1、

2、核酸等温扩增(isothermal amplification)技术自上世纪90年代出现以来，基于其核酸体外扩增的迅速和高效，操作简便，可结合多种终点检测形式，且不需要复杂精密仪器等优点，受到研究人员的广泛喜爱，实地应用前景广阔。其中，重组酶介导等温核酸扩增技术(recombinaseaidedamplification,raa)作为一种新型的核酸扩增技术，在重组酶、单链dna结合蛋白、dna聚合酶等协同作用下实现模板dna的扩增，整个反应在37℃～42℃的恒温度条件下，20min左右即可获得检测结果。raa扩增依据是否引物探针或探针修饰的不同，其结果可利用凝胶电泳、荧光素修饰或侧向流免疫层析法检测，其中，侧向流试纸条法(lfd)不需要特定仪器，利用抗原、抗体等特异性交联结合，依靠胶体金纳米颗粒等聚集显色的形式进行检测，具有特异性强、高效便捷、直观等优点。目前尚无利用raa-lfd技术对转基因玉米dbn993本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种RAA-LFD检测转基因玉米事件DBN9936的引物与探针组合，其特征在于，所述正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，所述探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示。

2.根据权利要求1所述的引物与探针组合，其特征在于，所述探针序列的修饰如下：探针的5’端标记荧光素FAM基团，探针的第31位鸟嘌呤(G)替换为dSpacer，探针的3’端添加C3-Spacer。

3.一种检测转基因玉米DBN9936事件的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的引物和探针组合。

4.一...

【技术特征摘要】

1.一种raa-lfd检测转基因玉米事件dbn9936的引物与探针组合，其特征在于，所述正向引物的核苷酸序列如seq id no.4所示，所述反向引物的核苷酸序列如seq id no.7所示，所述探针的核苷酸序列如seq id no.11所示。

2.根据权利要求1所述的引物与探针组合，其特征在于，所述探针序列的修饰如下：探针的5’端标记荧光素fam基团，探针的第31位鸟嘌呤(g)替换为dspacer，探针的3’端添加c3-spacer。

3.一种检测转基因玉米dbn9936事件的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的引物和探针组合。

4.一种raa-lfd检测转基因玉米事件dbn9936的方法，其特征在于，包括如下步骤：

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述raa扩增体系为50μl，其中，再水...

【专利技术属性】
技术研发人员：高艳春，李彦伟，王海燕，宋程，赵少伟，鲍雅萱，宋相阳，兰康，
申请(专利权)人：北京科牧丰生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：