【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及溶血磷脂酶突变体及其应用。
技术介绍
1、cn202011434650公开了从黑曲霉gim 3.24(an02)中获得溶血磷脂酶an02-lpl，并发现an02-lpl具有非常高的磷脂酶a1活力，可以用于油脂脱胶，在不添加碱的条件下，能将毛油的含磷量降低至5ppm，还可以用于酶法脱胶，并且由于不需要加碱可以减少脱胶时皂脚的形成。另外，an02-lpl还具有极高的溶血磷脂酶活力，可以与磷脂酶a2合用，利用大豆磷脂酶为原料制备甘油磷酸酰胆碱(gpc)用于医药及保健品中，具有健脑防衰老的作用。
2、本领域仍然需要具有更高酶活的溶血磷脂酶。
技术实现思路
1、本专利技术第一方面提供一种分离的多肽，所述多肽选自：(1)含有如seq id no：9所示氨基酸序列的多肽；和(2)在(1)所述的多肽中在seq id no：9第111位以外的位置上经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸，同时保留seq id no：9的磷脂酶酶活的由(1)衍生的多肽。
2、在一个或多个实施方案中，seq id no：9所示的氨基酸序列中，第111位氨基酸残基为脂肪族氨基酸；优选地，第111位氨基酸残基为疏水氨基酸或中性氨基酸；优选地，第111位氨基酸残基为甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、丝氨酸或苏氨酸，更优选为丝氨酸、甘氨酸或丙氨酸。
3、在一个或多个实施方案中，(1)所述的多肽含有seq id no：3、4或5所示的氨基酸序列。
4、在一个或多个
5、在一个或多个实施方案中，所述的多肽还含有用于促进(1)或(2)所述多肽表达、分泌和/或纯化的氨基酸序列；优选地，所述用于促进seq id no：9所示氨基酸序列表达、分泌和/或纯化的氨基酸序列选自接头肽、信号肽、末端延伸、gst、麦芽糖e结合蛋白、蛋白a、标签序列、xa因子的蛋白酶水解位点、凝血酶的蛋白水解酶位点和肠激酶的蛋白水解酶位点中的一条或多条序列。
6、本专利技术第二方面提供一种多核苷酸分子，所述多核苷酸分子的多核苷酸序列选自：(1)编码本专利技术第一方面任一实施方案所述多肽的多核苷酸序列；和(2)(1)所述的多核苷酸序列互补的多核苷酸序列。
7、在一个或多个实施方案中，所述多核苷酸序列如seq id no：6或7或8所示。
8、本专利技术第三方面提供一种多核苷酸构建物，所述多核苷酸构建物含有本文任一实施方案所述的多核苷酸，优选地，所述多核苷酸构建物是表达载体或克隆载体。
9、本专利技术第五方面提供一种遗传工程化的宿主细胞，所述宿主细胞：(1)表达本文任一实施方案所述的多肽；和/或(2)含有本文任一实施方案所述的多核苷酸分子或多核苷酸构建物。
10、在一个或多个实施方案中，所述宿主细胞为黑曲霉、米曲霉、毕赤酵母、酿酒酵母或里氏木霉。
11、本专利技术第四方面提供一种多肽的制备方法，所述方法包括：在有助于生产本文任一实施方案所述多肽的条件下培养本文任一实施方案所述的宿主细胞，以及回收所述多肽。
12、本专利技术第五方面提供本文任一实施方案所述的多肽、多核苷酸分子、多核苷酸构建物或遗传工程化的宿主细胞在油脂精炼、磷脂改性、饲料改良剂、食品工业和医药工业中的应用。
13、本专利技术第六方面提供一种脱胶方法，所述方法包括在脱胶过程中将本文任一实施方案所述的多肽作为脱胶介质加入到待脱胶油中进行脱胶的步骤。
14、在一个或多个实施方案中，直接将所述多肽添加到待脱胶油中进行脱胶，或先在55～75℃、优选60～70℃的温度下孵育所述多肽，然后再将其添加到待脱胶油中进行脱胶。
15、在一个或多个实施方案中，所述多肽以水溶液的形式加入；优选地，以待脱胶油重量计，多肽的添加量为20～1000ppm，优选为20～200ppm，更优选为20～100ppm。
16、在一个或多个实施方案中，所述脱胶包括：在50～60℃下搅拌1～5小时。
17、在一个或多个实施方案中，所述待脱胶油选自大豆油、葵花籽油、花生油、菜籽油、米糠油、玉米油、橄榄油、棕榈油、棕榈仁油、棕榈软脂、卡诺拉油、蓖麻油、椰子油、芫荽油、棉籽油、榛子油、大麻籽油、亚麻籽油、芒果仁油、白芒花油、牛蹄油、红花油、山茶花油、妥尔油和椿油中的一种或多种。
18、本专利技术第七方面提供一种制备溶血磷脂酶突变体的方法，所述方法包括在出发溶血磷脂酶的对应于seq id no：1所示氨基酸序列的第111位的氨基酸位置中引入突变，优选地，所述突变序列的第111位氨基酸残基为甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、丝氨酸或苏氨酸，更优选为丝氨酸、甘氨酸或丙氨酸。
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1.一种分离的多肽，其特征在于，所述多肽选自：
2.如权利要求1所述的分离的多肽，其特征在于：
3.如权利要求1-2中任一项所述的多肽，其特征在于，所述的多肽还含有用于促进(1)或(2)SEQ ID NO：9所述多肽表达、分泌和/或纯化的氨基酸序列；优选地，所述用于促进SEQID NO：9所示氨基酸序列表达、分泌和/或纯化的氨基酸序列选自接头肽、信号肽、末端延伸、GST、麦芽糖E结合蛋白、蛋白A、标签序列、Xa因子的蛋白酶水解位点、凝血酶的蛋白水解酶位点和肠激酶的蛋白水解酶位点中的一条或多条序列。
4.一种多核苷酸分子，其特征在于，所述多核苷酸分子的多核苷酸序列选自：
5.一种多核苷酸构建物，其特征在于，所述多核苷酸构建物含有权利要求4所述的多核苷酸，优选地，所述多核苷酸构建物是表达载体或克隆载体。
6.一种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞：
7.一种多肽的制备方法，其特征在于，所述方法包括：在有助于生产权利要求1-3中任一项所述多肽的条件下培养权利要求6所述的宿主细胞，以及回收所述多肽。>
8.权利要求1-3中任一项所述的多肽、权利要求4所述的多核苷酸分子、权利要求5所述的多核苷酸构建物或权利要求6所述的遗传工程化的宿主细胞在油脂精炼、磷脂改性、饲料改良剂、食品工业和医药工业中的应用。
9.一种脱胶方法，其特征在于，所述方法包括在脱胶过程中将权利要求1-3中任一项所述的多肽作为脱胶介质加入到待脱胶油中进行脱胶的步骤；
10.一种制备溶血磷脂酶突变体的方法，其特征在于，所述方法包括在出发溶血磷脂酶的对应于SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第111位的氨基酸位置中引入突变；优选地，所述突变序列的第111位氨基酸残基为甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、丝氨酸或苏氨酸，更优选为丝氨酸、甘氨酸或丙氨酸。
...【技术特征摘要】
1.一种分离的多肽，其特征在于，所述多肽选自：
2.如权利要求1所述的分离的多肽，其特征在于：
3.如权利要求1-2中任一项所述的多肽，其特征在于，所述的多肽还含有用于促进(1)或(2)seq id no：9所述多肽表达、分泌和/或纯化的氨基酸序列；优选地，所述用于促进seqid no：9所示氨基酸序列表达、分泌和/或纯化的氨基酸序列选自接头肽、信号肽、末端延伸、gst、麦芽糖e结合蛋白、蛋白a、标签序列、xa因子的蛋白酶水解位点、凝血酶的蛋白水解酶位点和肠激酶的蛋白水解酶位点中的一条或多条序列。
4.一种多核苷酸分子，其特征在于，所述多核苷酸分子的多核苷酸序列选自：
5.一种多核苷酸构建物，其特征在于，所述多核苷酸构建物含有权利要求4所述的多核苷酸，优选地，所述多核苷酸构建物是表达载体或克隆载体。
6.一种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞：...
【专利技术属性】
技术研发人员：宣姚吉，刘国瑞，王圣南，戴小军，
申请(专利权)人：丰益上海生物技术研发中心有限公司，
类型：发明
国别省市：
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