【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于核酸扩增，具体涉及一种检测呼吸道病原体多重荧光pcr试剂盒及其应用。
技术介绍
1、当前病原体核酸的检测主要依赖于荧光定量pcr、数字pcr和ngs技术。其中ngs技术检测周期较长，成本较高，不利于快速诊断和大范围筛查。而荧光定量pcr技术检测精度和灵敏度相对较低。数字pcr是全新一代pcr技术，可以将反应液分散至成千上万个独立的反应单元中，被称为第三代pcr技术。相较于普通pcr(第一代pcr)和荧光定量pcr(第二代)，数字pcr具有更明显的优势，如：无需标准曲线的绝对定量功能、更强的抗干扰能力、单分子pcr分析等。目前数字pcr技术已广泛应用于肿瘤突变、优生优育、病原体等检测领域。
2、然而，常规荧光定量pcr和数字pcr检测技术的一个荧光通道仅能区分一种或一类病原体，无法实现多重靶点的有效区分。中国专利cn1936019 b开发了一种用于多重实时核酸扩增检测的探针编码方法，其结合ct值、荧光强度和种类，能在单个荧光定量pcr反应中区分出10种以上的靶点。然而其区分能力依赖于ct值和信号强度，分析难度较大，且无法准确区分多重感染的情况(例如存在两种单色编码靶点，且浓度相近，此时该技术无法准确区分两个目标靶点和双色编码靶点的区别)。
3、基于上述问题，开发出更简单、低廉，同时具有高精度和灵敏度，并且可以实现定量检测及多重感染分型的检测技术是病原体检测新的需求。
技术实现思路
1、本专利技术提供一种检测呼吸道病原体多重荧光pcr试剂盒，解决当
2、本专利技术为实现上述目的采用的技术方案是：一种检测呼吸道病原体多重荧光pcr试剂盒，所述呼吸道病原体包括新型冠状病毒、冠状病毒229e、冠状病毒hku1、冠状病毒nl63、冠状病毒oc43、甲型流感、h1n1/2009、甲型流感h1分型、甲型流感h3分型、乙型流感、丙型流感、副流感病毒1、副流感病毒2、副流感病毒3、副流感病毒4、呼吸道合胞病毒、人偏肺病毒、腺病毒、鼻病毒、博卡病毒、肺炎支原体和嗜肺军团杆菌，所述试剂盒中包括检测所述呼吸道病原体的正向引物、反向引物和探针。
3、优选地，所述新型冠状病毒的正向引物和反向引物序列分别如seq id no.1和seqid no.2所示，探针序列如seq id no.3所示；
4、所述冠状病毒229e的正向引物和反向引物序列分别如seq id no.4和seq idno.5所示，探针序列如seq id no.6所示；
5、所述冠状病毒hku1的正向引物和反向引物序列分别如seq id no.7和seq idno.8所示，探针序列如seq id no.9所示；
6、所述冠状病毒nl63的正向引物和反向引物序列分别如seq id no.10和seq idno.11所示，探针序列如seq id no.12所示；
7、所述冠状病毒oc43的正向引物和反向引物序列分别如seq id no.13和seq idno.14所示，探针序列如seq id no.15所示；
8、所述甲型流感的正向引物和反向引物序列分别如seq id no.16和seq id no.17所示，探针序列如seq id no.18所示；
9、所述h1n1/2009的正向引物和反向引物序列分别如seq id no.19和seq id no.20所示，探针序列如seq id no.21所示；
10、所述甲型流感h1分型的正向引物和反向引物序列分别如seq id no.22和seq idno.23所示，探针序列如seq id no.24所示；
11、所述甲型流感h3分型的正向引物和反向引物序列分别如seq id no.25和seq idno.26所示，探针序列如seq id no.27所示；
12、所述乙型流感的正向引物和反向引物序列分别如seq id no.28和seq id no.29所示，探针序列如seq id no.30所示；
13、所述丙型流感的正向引物和反向引物序列分别如seq id no.31和seq id no.32所示，探针序列如seq id no.33所示；
14、所述副流感病毒1的正向引物和反向引物序列分别如seq id no.34和seq idno.35所示，探针序列如seq id no.36所示；
15、所述副流感病毒2的正向引物和反向引物序列分别如seq id no.37和seq idno.38所示，探针序列如seq id no.39所示；
16、所述副流感病毒3的正向引物和反向引物序列分别如seq id no.40和seq idno.41所示，探针序列如seq id no.42所示；
17、所述副流感病毒4的正向引物和反向引物序列分别如seq id no.43和seq idno.44所示，探针序列如seq id no.45所示；
18、所述呼吸道合胞病毒的正向引物分别如seq id no.46、seq id no.47、seq idno.48和seq id no.49所示，反向引物序列分别如seq id no.50、seq id no.51和seq idno.52所示，探针序列如seq id no.53所示；
19、所述人偏肺病毒的正向引物和反向引物序列分别如seq id no.54和seq idno.55所示，探针序列如seq id no.56所示；
20、所述腺病毒的正向引物序列分别如seq id no.57、seq id no.58、seq id no.59、seq id no.60和seq id no.61所示，反向引物序列分别如seq id no.62和seq id no.63所示，探针序列分别如seq id no.64和seq id no.65所示；
21、所述鼻病毒的正向引物序列如seq id no.66所示，反向引物序列分别如seq idno.67和seq id no.68所示，探针序列如seq id no.69所示；
22、所述博卡病毒的正向引物和反向引物序列分别如seq id no.70和seq id no.71所示，探针序列如seq id no.72所示；
23、所述肺炎支原体的正向引物和反向引物序列分别如seq id no.73和seq idno.74所示，探针序列如seq id no.75所示；
24、所述嗜肺军团杆菌的正向引物和反向引物序列分别如seq id no.76和seq idno.77所示，探针序列如seq id no.78所示。
25、优选地，所述探针采用多重荧光编码技术进行标记，具体方法为：将核酸扩增检测仪所能检测到的不同荧光染料作为荧光探针标记的基本元素，称其为荧光基本元素，以荧光基本元素或荧光基本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种检测呼吸道病原体多重荧光PCR试剂盒，其特征在于：所述呼吸道病原体包括新型冠状病毒、冠状病毒229E、冠状病毒HKU1、冠状病毒NL63、冠状病毒OC43、甲型流感、H1N1/2009、甲型流感H1分型、甲型流感H3分型、乙型流感、丙型流感、副流感病毒1、副流感病毒2、副流感病毒3、副流感病毒4、呼吸道合胞病毒、人偏肺病毒、腺病毒、鼻病毒、博卡病毒、肺炎支原体和嗜肺军团杆菌，所述试剂盒中包括检测所述呼吸道病原体的正向引物、反向引物和探针。
2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：
3.如权利要求1-2任一项所述的试剂盒，其特征在于：所述探针采用多重荧光编码技术进行标记，具体方法为：将核酸扩增检测仪所能检测到的不同荧光染料作为荧光探针标记的基本元素，称其为荧光基本元素，以荧光基本元素或荧光基本元素之间的相互组合来标记所述探针；其中，所述荧光基本元素包括FAM、HEX、ROX、VIC、CY5、CY5.5、TAMRA、CY3和Texas RED。
4.如权利要求1-3任一项所述的试剂盒，其特征在于：所述探针还含有淬灭基团，所述淬灭基团包括D
5.如权利要求1-4任一项所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括内参，所述内参的引物对序列分别如SEQ ID NO.79和SEQ ID NO.80所示，探针序列如SEQ ID NO.81所示。
6.如权利要求1-5任一项所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括反应混合液和反应酶。
7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：所述反应混合液包括Tris-HCl、氯化镁、氯化钾和dNTP；所述反应酶包括Taq酶、逆转录酶和RNA酶抑制剂。
8.一种如权利要求1-7任一项所述的试剂盒用于检测新型冠状病毒、冠状病毒229E、冠状病毒HKU1、冠状病毒NL63、冠状病毒OC43、甲型流感、H1N1/2009、甲型流感H1分型、甲型流感H3分型、乙型流感、丙型流感、副流感病毒1、副流感病毒2、副流感病毒3、副流感病毒4、呼吸道合胞病毒、人偏肺病毒、腺病毒、鼻病毒、博卡病毒、肺炎支原体和嗜肺军团杆菌中的一种或多种病原体。
...【技术特征摘要】
1.一种检测呼吸道病原体多重荧光pcr试剂盒，其特征在于：所述呼吸道病原体包括新型冠状病毒、冠状病毒229e、冠状病毒hku1、冠状病毒nl63、冠状病毒oc43、甲型流感、h1n1/2009、甲型流感h1分型、甲型流感h3分型、乙型流感、丙型流感、副流感病毒1、副流感病毒2、副流感病毒3、副流感病毒4、呼吸道合胞病毒、人偏肺病毒、腺病毒、鼻病毒、博卡病毒、肺炎支原体和嗜肺军团杆菌，所述试剂盒中包括检测所述呼吸道病原体的正向引物、反向引物和探针。
2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：
3.如权利要求1-2任一项所述的试剂盒，其特征在于：所述探针采用多重荧光编码技术进行标记，具体方法为：将核酸扩增检测仪所能检测到的不同荧光染料作为荧光探针标记的基本元素，称其为荧光基本元素，以荧光基本元素或荧光基本元素之间的相互组合来标记所述探针；其中，所述荧光基本元素包括fam、hex、rox、vic、cy5、cy5.5、tamra、cy3和texas red。
4.如权利要求1-3任一项所述的试剂盒，其特征在于：所述探针还含...
【专利技术属性】
技术研发人员：张文宏，吴晶，吴东平，王昀，
申请(专利权)人：复旦大学附属华山医院，
类型：发明
国别省市：
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