一种检测呼吸道病原体多重荧光PCR试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种检测呼吸道病原体多重荧光PCR试剂盒及其应用，病原体包括新型冠状病毒、冠状病毒229E、冠状病毒HKU1、冠状病毒NL63、冠状病毒OC43、甲型流感、H1N1/2009、甲型流感H1分型、甲型流感H3分型、乙型流感、丙型流感、副流感病毒1、副流感病毒2、副流感病毒3、副流感病毒4、呼吸道合胞病毒、人偏肺病毒、腺病毒、鼻病毒、博卡病毒、肺炎支原体和嗜肺军团杆菌，试剂盒中包括检测所述病原体的正向引物、反向引物和探针。本发明专利技术结合多重PCR技术、多荧光通道数字PCR系统及多色荧光编码技术可以实现单个样本中多种呼吸道病原体核酸的同时检测，从而精准锁定单或多病原体感染类型，本发明专利技术的方法检测速度快、灵敏度高，能区分至少4重呼吸道病原体感染。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于核酸扩增，具体涉及一种检测呼吸道病原体多重荧光pcr试剂盒及其应用。

技术介绍

1、当前病原体核酸的检测主要依赖于荧光定量pcr、数字pcr和ngs技术。其中ngs技术检测周期较长，成本较高，不利于快速诊断和大范围筛查。而荧光定量pcr技术检测精度和灵敏度相对较低。数字pcr是全新一代pcr技术，可以将反应液分散至成千上万个独立的反应单元中，被称为第三代pcr技术。相较于普通pcr(第一代pcr)和荧光定量pcr(第二代)，数字pcr具有更明显的优势，如：无需标准曲线的绝对定量功能、更强的抗干扰能力、单分子pcr分析等。目前数字pcr技术已广泛应用于肿瘤突变、优生优育、病原体等检测领域。

2、然而，常规荧光定量pcr和数字pcr检测技术的一个荧光通道仅能区分一种或一类病原体，无法实现多重靶点的有效区分。中国专利cn1936019 b开发了一种用于多重实时核酸扩增检测的探针编码方法，其结合ct值、荧光强度和种类，能在单个荧光定量pcr反应中区分出10种以上的靶点。然而其区分能力依赖于ct值和信号强度，分析难度较大，且无法准确区分多重本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种检测呼吸道病原体多重荧光PCR试剂盒，其特征在于：所述呼吸道病原体包括新型冠状病毒、冠状病毒229E、冠状病毒HKU1、冠状病毒NL63、冠状病毒OC43、甲型流感、H1N1/2009、甲型流感H1分型、甲型流感H3分型、乙型流感、丙型流感、副流感病毒1、副流感病毒2、副流感病毒3、副流感病毒4、呼吸道合胞病毒、人偏肺病毒、腺病毒、鼻病毒、博卡病毒、肺炎支原体和嗜肺军团杆菌，所述试剂盒中包括检测所述呼吸道病原体的正向引物、反向引物和探针。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：

3.如权利要求1-2任一项所述的试剂盒，其特征在于：所述探针采用多重荧光编...

【技术特征摘要】

1.一种检测呼吸道病原体多重荧光pcr试剂盒，其特征在于：所述呼吸道病原体包括新型冠状病毒、冠状病毒229e、冠状病毒hku1、冠状病毒nl63、冠状病毒oc43、甲型流感、h1n1/2009、甲型流感h1分型、甲型流感h3分型、乙型流感、丙型流感、副流感病毒1、副流感病毒2、副流感病毒3、副流感病毒4、呼吸道合胞病毒、人偏肺病毒、腺病毒、鼻病毒、博卡病毒、肺炎支原体和嗜肺军团杆菌，所述试剂盒中包括检测所述呼吸道病原体的正向引物、反向引物和探针。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：

3.如权利要求1-2任一项所述的试剂盒，其特征在于：所述探针采用多重荧光编码技术进行标记，具体方法为：将核酸扩增检测仪所能检测到的不同荧光染料作为荧光探针标记的基本元素，称其为荧光基本元素，以荧光基本元素或荧光基本元素之间的相互组合来标记所述探针；其中，所述荧光基本元素包括fam、hex、rox、vic、cy5、cy5.5、tamra、cy3和texas red。

4.如权利要求1-3任一项所述的试剂盒，其特征在于：所述探针还含...

【专利技术属性】
技术研发人员：张文宏，吴晶，吴东平，王昀，
申请(专利权)人：复旦大学附属华山医院，
类型：发明
国别省市：