【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体为一株表达传染性法氏囊病毒新型变异株vp2基因的重组火鸡疱疹病毒及其应用。
技术介绍
1、传染性法氏囊病(infectious bursal disease，ibd)是由传染性法氏囊病毒(infectious bursal disease virus，ibdv)引起的鸡和火鸡的一种高度接触性传染病。该病主要感染3～8周龄雏鸡，引起法氏囊肿大、出血、坏死及腿肌、胸肌出血等一系列病理变化，并可引起严重的免疫抑制nvaribdv感染spf蛋鸡后，未导致外观临床症状和死亡，但感染鸡法氏囊严重萎缩。nvaribdv感染肉鸡后，生产性能下滑，42日龄肉鸡的体重较对照组体重减少16％，给养殖业造成巨大经济损失。
2、nvaribdv因不引起外观临床症状而未引起足够重视，但其导致法氏囊等中枢免疫器官严重损伤和萎缩，是疫苗免疫失败的重要原因之一。研究显示nvaribdv感染严重破坏了肉鸡的法氏囊以及其中的b淋巴细胞，进而导致了针对新城疫疫苗的hi抗体效价显著降低。在spf蛋鸡中，nvaribdv感染也显著干扰了新城疫疫苗(lasota株)免疫后的抗体产生。此外，nvaribdv感染对禽流感二价苗诱导产生的h5抗体和h7抗体均有显著的干扰。
3、疫苗免疫是预防和控制ibdv感染的有效手段。尤其是在集约化规模养殖场中，几乎所有养鸡场都使用vvibdv疫苗。由于饲养管理水平的不断提高，ibd正在逐步得到控制。然而，近年来nvaribdv导致的非典型ibd，在鸡群中引起了严重的免疫抑制，给养禽业带来了新的威
4、目前ibd疫苗类型主要有灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗以及载体疫苗。研究显示，nvaribdv体外细胞上复制能力和鸡胚繁殖能力弱，减毒活疫苗和灭活疫苗研发困难。区别于亚单位疫苗，活载体疫苗能够承载外源基因在体内进行转录和表达，进而刺激机体产生相应的细胞免疫。vp2蛋白是ibdv的主要结构蛋白和中和抗原，目前以火鸡疱疹病毒(hvt)为载体表达vp2蛋白的重组病毒(hvt-vp2)疫苗在生产上已经得到广泛的应用，并取得良好的免疫保护效果。
5、对比技术1：cn 116970044 a公开了一种传染性法氏囊病毒fj株及fj株vp2蛋白的氨基酸序列(seq id no.1)。
6、对比技术2：cn 110684744 a公开了一种表达鸡传染性法氏囊病病毒vp2基因的重组火鸡疱疹病毒株，是以火鸡疱疹病毒(hvt)fc-126疫苗毒株为载体，以其ul45-ul46的间隔区为插入位点，获得重组病毒rhvt-vvp2株。
7、对比技术3：cn 116139264 a公开了一种rhvt-h9-vp2重组病毒。该技术是将ibdv病毒的vp2基因插入rhvt-h9的us区域，同时公开了cmv-egfp-sv40polya基因。
8、从现有技术可以了解到，在火鸡疱疹病毒或马立克氏病病毒中插入ibdv目的基因来构建重组病毒，表达针对不同病毒株的vp2蛋白，是寻求良好免疫保护的常用方法。现有技术公开了目的基因的启动子和终止子，提供了vp2目标基因的氨基酸序列以及vp2蛋白的氨基酸序列，以及插入载体病毒的位点us2、us10、ul45-ul46区域。
9、针对现有技术存在的不足，本案解决的技术问题是：如何针对nvaribdv的vp2目标基因构建hvt-ibd，在体外能够生长复制并稳定遗传，该重组病毒表达出针对nvaribdv的vp2蛋白，发挥良好的免疫保护效果。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种一株表达传染性法氏囊病毒新型变异株vp2基因的重组火鸡疱疹病毒，在体外能够生长复制并稳定遗传，对nvaribdv提供良好的免疫保护效果。
2、同时，本专利技术还公开了一种vp2基因和蛋白，以及利用该蛋白、重组火鸡疱疹病毒的疫苗和用途。
3、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
4、一种重组火鸡疱疹病毒，于火鸡疱疹病毒的ul区的hvt065位点插入目标基因，所述目标基因为带有启动子和终止子的vp2基因，得到重组火鸡疱疹病毒。
5、优选地，vp2基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。
6、优选地，所述启动子为mcmv启动子，所述终止子为sv40终止子。
7、本专利技术公开了一种vp2基因，其核苷酸序列如seq id no.1所示。
8、本专利技术公开了一种目标基因，包括上述的vp2基因以及连接于vp2基因上的启动子和终止子。
9、优选地，目标基因所含的启动子为mcmv启动子，所述终止子为sv40终止子。
10、本专利技术还公开了一种vp2蛋白，其氨基酸序列如seq id no.2所示。
11、同时，本专利技术还公开了采用如上所述的重组病毒制备用于预防传染性法氏囊新型变异株的疫苗的用途。
12、以及，采用如上所述的vp2基因或vp2蛋白制备用于预防传染性法氏囊新型变异株的疫苗的用途。
13、最后，本专利技术还公开了一种疫苗，含有如上所述的重组火鸡疱疹病毒和/或如vp2蛋白。
14、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
15、1.本专利技术的vp2基因的高变区产生了12个氨基酸突变，其抗原性产生了突变，通过将vp2基因转入火鸡疱疹病毒，验证了其具有极强的保护力；
16、2.本专利技术利用在先专利中已经构建的感染性克隆hvt-bac，成功的解决了nvaribdv的复制能力有限的问题，其复制能力与亲本病毒一致，且能够为ibdv新型变异株提供良好免疫保护，符合疫苗候选株要求；
17、3.通过基于已经构建的感染性克隆hvt-bac，经过反复筛选，确认了插入位点为hvt065位点，通过和ul45和us2区的插入比较，可以确认本专利技术的vp2对于感染性克隆hvt-bac的插入位点的选择具有特异性。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种重组火鸡疱疹病毒，其特征在于，于火鸡疱疹病毒的UL区的HVT065位点插入目标基因，所述目标基因为带有启动子和终止子的VP2基因，得到重组火鸡疱疹病毒；
2.根据权利要求1所述的重组火鸡疱疹病毒，其特征在于，所述启动子为mCMV启动子，所述终止子为SV40终止子。
3.一种VP2基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
4.一种目标基因，其特征在于，包括如权利要求3所述的VP2基因以及连接于VP2基因上的启动子和终止子。
5.根据权利要求4所述的目标基因，其特征在于，所述启动子为mCMV启动子，所述终止子为SV40终止子。
6.一种VP2蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
7.采用如权利要求1或2所述的重组病毒制备用于预防传染性法氏囊新型变异株的疫苗的用途。
8.采用权利要求3所述的VP2基因或如权利要求6所述VP2蛋白制备用于预防传染性法氏囊新型变异株的疫苗的用途。
9.一种疫苗，其特征在于，含有如权利要求如权利要求1或2所述的重
...【技术特征摘要】
1.一种重组火鸡疱疹病毒，其特征在于，于火鸡疱疹病毒的ul区的hvt065位点插入目标基因，所述目标基因为带有启动子和终止子的vp2基因，得到重组火鸡疱疹病毒；
2.根据权利要求1所述的重组火鸡疱疹病毒，其特征在于，所述启动子为mcmv启动子，所述终止子为sv40终止子。
3.一种vp2基因，其特征在于，其核苷酸序列如seq id no.1所示。
4.一种目标基因，其特征在于，包括如权利要求3所述的vp2基因以及连接于vp2基因上的启动子和终止子。
5.根据权利要求4所...
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