一种基于CRISPR/Cas12b-LAMP的离心式微流控一体化的肺炎支原体检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种基于CRISPR/Cas12b‑LAMP的离心式微流控一体化的肺炎支原体检测试剂盒及其应用，试剂盒包括检测用组合物和预包埋试剂的离心式微流控芯片；检测用组合物包括针对肺炎支原体MP5设计的LAMP扩增引物、靶向肺炎支原体MP5基因的sgRNA、AapCas12b蛋白、荧光探针、Bst 2.0聚合酶、dNTP试剂和混合缓冲液；LAMP扩增引物F3、B3、FIP、BIP、FLP、BLP的核苷酸序列如SEQ ID NO.1‑6所示；sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。本发明专利技术的试剂盒，基于CRISPR/Cas12b系统结合LAMP等温扩增，通过实时荧光检测与离心式微流控芯片技术相结合的方法，实现肺炎支原体的一步法自动化检测，检测时间短、具有良好的灵敏度和特异性，并通过大量临床样本验证了方法在临床应用中的可行性，为临床肺炎支原体感染的高效检测奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及病原体检测，尤其涉及一种基于crispr/cas12b-lamp的离心式微流控一体化的肺炎支原体检测试剂盒及其应用。

技术介绍

1、肺炎支原体(mycoplasmapneumoniae)是社区获得性肺炎(community-acqu iredpneumonia，cap)患者中最常见的细菌病原体，通常引起下呼吸道感染，潜伏期长，发病率高，容易出现反复感染，常导致严重疾病和肺外并发症。肺炎支原体主要通过呼吸道传播，潜伏期为数周。感染高峰期通常出现在一月至三月，可占封闭环境下社区获得性肺炎病例的70％。然而，由于肺炎支原体感染无症状和非特异性，且缺乏敏感和特异性的诊断方法，尤其在与sars-cov-2等其他呼吸道病原体共感染的情况下，区分肺炎支原体感染与其他呼吸道疾病具有很大的挑战性，这种诊断上的复杂性经常导致对肺炎支原体感染的患病率和真实影响被低估。目前临床常用的定量聚合酶链反应(qpcr)基因检测法具有较低污染风险、提供定量和可靠数据等优点，但qpcr诊断的操作复杂、设备昂贵且结果反馈时间通常需要数小时。此外，肺炎支原体感染后的特异性igm抗体本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于CRISPR/Cas12b-LAMP的离心式微流控一体化的肺炎支原体检测试剂盒，其特征在于，包括检测用组合物，以及预包埋试剂的离心式微流控芯片；

2.根据权利要求1所述的肺炎支原体检测试剂盒，其特征在于，所述检测用组合物预包埋于所述离心式微流控芯片内。

3.根据权利要求2所述的肺炎支原体检测试剂盒，其特征在于，预包埋的方式包括热敏水凝胶预包埋、冻干球预包埋。

4.根据权利要求1所述的肺炎支原体检测试剂盒，其特征在于，所述离心式微流控芯片为利用离心式原理进行核酸等温扩增的微流控芯片。

5.根据权利要求1所述的肺炎支原体检测试剂盒，...

【技术特征摘要】

1.一种基于crispr/cas12b-lamp的离心式微流控一体化的肺炎支原体检测试剂盒，其特征在于，包括检测用组合物，以及预包埋试剂的离心式微流控芯片；

2.根据权利要求1所述的肺炎支原体检测试剂盒，其特征在于，所述检测用组合物预包埋于所述离心式微流控芯片内。

3.根据权利要求2所述的肺炎支原体检测试剂盒，其特征在于，预包埋的方式包括热敏水凝胶预包埋、冻干球预包埋。

4.根据权利要求1所述的肺...

【专利技术属性】
技术研发人员：程训佳，荆雯雯，张童，隋国栋，冯萌，李鑫，刘春草，
申请(专利权)人：上海市重大传染病和生物安全研究院，
类型：发明
国别省市：