一种血浆游离DNA甲基化快速提取转化方法及试剂盒技术

技术编号：41803037 阅读：29 留言：0更新日期：2024-06-24 20:24

本发明专利技术涉及一种血浆游离DNA甲基化一步转化的试剂盒及使用方法，所述试剂盒包括如下组件：蛋白酶k溶液、羟基磁珠溶液、裂解结合液、亚硫酸氢盐转化液、结合液、脱磺液、洗涤液、洗脱液。本发明专利技术所述试剂盒灵活的将游离DNA的提取和转化过程合二为一，先富集转化，再纯化浓缩。如此既节省了转化游离DNA的时间，又可以避免在提取过程中游离DNA的损耗。另外，本发明专利技术所述试剂盒采用超顺磁性纳米磁珠及硅胶离心柱对游离DNA进行富集和回收，操作简单，效果好。综上所述，本发明专利技术所述方法具有成本低、操作简短、转化率及回收率高等优点，为后续的甲基化特异性PCR(MSP)扩增、亚硫酸氢盐测序等实验提供了高纯度的样品。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物，具体涉及到一种用于血浆游离dna甲基化检测的先转化后纯化方法及试剂盒。

技术介绍

1、dna甲基化是人类最早发现的表观遗传现象之一。所谓表观遗传，是指在不改变基因原始序列的情况下，调控基因的表达，使基因发生可遗传的变化，并最终导致个体(细胞)的表型发生改变。也就是说，基因组中含有两类遗传信息，一类是传统意义上的遗传信息，即基因编码的遗传信息；另一类是表观遗传信息，它提供了何时、何地、以何种方式去应用遗传信息的指令。从当前的研究来看，dna甲基化、组蛋白印迹、非编码rna等均属于表观遗传学的范畴。

2、dna甲基化发生在dna甲基转移酶的催化下，5’-cpg-3’位点中的胞嘧啶被选择性的添加上一个甲基，形成5-甲基胞嘧啶。人基因的启动子区及第一个外显子区富含5’-cpg-3’位点，一旦它们发生甲基化，该基因的转录过程就会收到抑制。研究表明，抑癌基因甲基化水平的异常升高是肿瘤发生的早期事件之一，因此近年来，dna甲基化检测在癌症早期筛查领域的研究相当活跃。例如，对septin 9基因进行甲基化检测在201...

【技术保护点】

1.一种血浆游离DNA甲基化一步转化方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的血浆游离DNA甲基化一步转化方法，步骤(1)中裂解结合液为Tris-HCl、聚乙二醇、异丙醇、异硫氰酸胍、盐酸胍、NaCl、曲拉通X-100、EDTA、柠檬酸钠、柠檬酸中的一种或几种组合。

3.根据权利要求1所述的血浆游离DNA甲基化一步转化方法，步骤(1)中蛋白酶k的浓度为15-25mg/ml；步骤(1)和步骤(3)中超顺性纳米磁珠为表面修饰有羟基的二氧化硅包被的Fe3O4颗粒，其粒径为100-1000nm，浓度为20-100mg/ml。