牛基因组假attP位点及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一个新的牛基因组中链霉菌噬菌体ΦＣ３１整合酶可识别的假ａｔｔＰ位点，本发明专利技术还提供一种利用该假ａｔｔＰ位点的旁侧序列构建的定向整合载体及其构建方法。本发明专利技术首先从牛基因组中分离了一个能被高频率整合并高效表达外源基因的假ａｔｔＰ位点，该位点位于牛４号染色体。在此基础上，构建含有该假ａｔｔＰ位点旁侧序列的特异定向整合载体，使外源基因以９０％以上的概率整合于该假ａｔｔＰ位点上，并且外源目的基因也能获得高效表达。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程
，具体地说，是关于牛基因组中能被链霉菌噬菌体cDC31整合酶识别的假attP位点及其应用。
技术介绍
哺乳动物细胞中导入外源基因的方法有很多种，物理方法主要有受精卵原核显微注射法、电穿孔法；化学方法主要有磷酸钙-DNA共沉淀法、DEAE-葡聚糖法、脂质体介导法及生物学的病毒介导方法等等，但所有的外源基因导入方法均涉及到外源基因的随机整合及表达的问题，外源基因整合位点的随机性将给目的基因及宿主细胞带来不可预知的后果1、外源基因的随机整合可能会造成位置效应影响，导致目的基因表达水平的不稳定甚至不表达；2、对宿主细胞的基因组而言，外源基因的随机性插入可能激活或抑制某些内源基因，改变其原先正常有序的基因表达调控模式，致使细胞癌变甚至死亡。位点特异性重组是自然界中实现遗传物质重组的另一种形式，指在噬菌体整合酶的作用下，噬菌体基因组与细菌基因组在约几十个特定的碱基之间发生的重组反应。人们利用这一特定的整合方式而实现外源基因在哺乳动物基因组中进行定点修饰。Cre酶及Flp酶是目前在哺乳动物基因组修饰中较为常用的两种酶。尽管存在着一些局限如外源基因在整合后还可能解离反本文档来自技高网...

【技术保护点】
一个牛基因组中假ａｔｔＰ位点，其特征在于，所述假ａｔｔＰ位点位于牛基因组的第４号染色体上，其核心序列具有如ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．１所示的ＤＮＡ序列。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：曾溢滔，欧海龙，黄淑帧，黄英，
申请(专利权)人：上海市儿童医院，上海滔滔转基因工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]