【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因编辑载体，尤其涉及crispr/cas9植物基因组多靶点编辑载体及其在对于植物基因进行编辑的应用，属于crispr/cas9基因编辑载体及其应用领域。
技术介绍
1、紫花苜蓿(medicago sativa)是豆科苜蓿属多年生饲草作物，因其适应性广，产草量高，草质优良，富含粗蛋白，营养丰富，适口性好，被誉为“牧草之王”。除了具有优异的饲用价值，紫花苜蓿栽培对于草地生态的保护和维持也具有重要作用。因此，紫花苜蓿的生理生态研究和遗传育种工作具有重要意义。但是，紫花苜蓿栽培种多为自交不亲和、异花授粉的同源四倍体，基因组庞大而复杂，因此紫花苜蓿的基础研究和育种工作存在很大难度。
2、crispr/cas9基因组编辑技术是一项功能强大的遗传操作工具，主要由向导rna(sgrna)和cas9蛋白组成。融合靶点序列的sgrna能够与基因组序列互补配对，从而将基因编辑器定向地引导到靶点位置，由核酸酶cas9切割dna造成双链断裂，引发机体的dna修复，在修复过程中引入随机突变，从而实现靶标基因的编辑，而编辑效率的高低取决于...
【技术保护点】
1.一种CRISPR/Cas9植物基因组多靶点编辑载体，包括sgRNA表达盒和Cas9表达盒；其特征在于，所述的sgRNA表达盒为2个或2个以上且sgRNA表达盒串联在一起；每个sgRNA表达盒的组成元件包括紫花苜蓿内源U6启动子、靶向植物基因的靶标序列sgRNA和终止子；所述靶向植物基因的靶标序列sgRNA的数量为2个或2个以上且采用tRNA将每个靶标序列sgRNA串联在一起。
2.根据权利要求1所述的CRISPR/Cas9植物基因组多靶点编辑载体，其特征在于，所述的sgRNA表达盒的数量为3个；每个sgRNA表达盒中的靶向植物基因的靶标序列sgRNA的
...【技术特征摘要】
1.一种crispr/cas9植物基因组多靶点编辑载体，包括sgrna表达盒和cas9表达盒；其特征在于，所述的sgrna表达盒为2个或2个以上且sgrna表达盒串联在一起；每个sgrna表达盒的组成元件包括紫花苜蓿内源u6启动子、靶向植物基因的靶标序列sgrna和终止子；所述靶向植物基因的靶标序列sgrna的数量为2个或2个以上且采用trna将每个靶标序列sgrna串联在一起。
2.根据权利要求1所述的crispr/cas9植物基因组多靶点编辑载体，其特征在于，所述的sgrna表达盒的数量为3个；每个sgrna表达盒中的靶向植物基因的靶标序列sgrna的数量为3个。
3.根据权利要求1所述的crispr/cas9植物基因组多靶点编辑载体，其特征在于，所述的紫花苜蓿内源u6启动子选自mtu6-d1启动子、msu6-g1启动子或msu6-d3启动子；
4.根据权利要求1所述的crispr/cas9植物基因组多靶点编辑载体，其特征在于，每个sgrna表达盒中的靶向植物基因的靶标序列sgrna是靶向植物的不同基因或靶向植物的相同基因；优选的，每个sgrna表达盒中的靶向植物基因的靶标序列sgrna是靶向紫花苜宿基因组的不同基因或相同基因；更优选的，每个sgrna表达盒中的靶向植物基因的靶标序列sgrna分别靶向紫花苜蓿基因组中的mstfl1c基因、靶向紫花苜蓿基因组中的mstfl1a基因或靶向紫花苜蓿基因组中的mstfl1b基因；其中，所述mstfl1a基因的核苷酸序列为seq idno.6所示；所述mstfl1b基因的核苷酸序列为seq id no.7所示；所述mstfl1c基因的核苷酸序列为seq id no.8所示。
5.根据权利要求1所述的crispr/cas9植物基因组多靶点编辑载体，其特征在于，所述的采用trna将每个靶标序列sgrna串联在一起的方式包括：每个靶标序列sgrna的5＇端连接一个trna，靶标序列sgrna...
【专利技术属性】
技术研发人员：牛丽芳，夏秀芝，孙轼絮，林浩，张鹏程，祝步拓，
申请(专利权)人：中国农业科学院生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：
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