一种水解酶精纯品的制备方法及其应用技术

本发明专利技术涉及C12N9/14技术领域，具体为一种水解酶精纯品的制备方法及其应用，至少包括以下步骤：将枯草杆菌发酵液干粉溶解后离心，离心后获得上清液1和沉淀物1；向沉淀物1中加入纯化水搅拌沉淀物完全悬浮无结块后离心，离心后获得上清液2和沉淀物2，沉淀物2弃去；将上清液1、2混合后进行再次离心，离心后获得上清液3和沉淀物3，沉淀物3弃去；将上清液3进行抽滤获得料液，边搅拌边向料液中加入沉淀剂，加入完毕继续搅拌，然后密封置于冰箱中过夜；过夜后的料液离心后获得上清液4和沉淀物4，弃去上清液4，将沉淀物4用纯化水溶解后转移至容器中，获得水解酶粗提液，将水解酶粗提液进行脱盐、精纯后即得水解酶精纯品。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及c12n9/14，具体为一种水解酶精纯品的制备方法及其应用。

技术介绍

1、酶解法作为单细胞悬液制备常用方法之一，通过利用特定酶进行相应的化学反应除掉一些特定结构，适合将小块组织消化成为单个细胞。组织解离常见的消化酶主要包括胰蛋白酶、脱氧核糖核酸酶ⅰ、透明质酸酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胶原酶、弹性蛋白酶，不同酶适用于不同的组织类型。中性蛋白酶(dispase)也称分散酶，来源于枯草杆菌，无支原体或其他动物病毒污染，具有比较温和的蛋白水解酶活性，对细胞损伤小且可维持细胞膜完整性，因此非常适合用于分离原代和继代细胞培养，中性蛋白酶还可用于消除悬浮细胞培养过程中发生的细胞聚集，常与胶原酶或其他蛋白酶结合使用。但是目前用于不同组织和器官的细胞分离的高纯度解离酶主要依赖国外进口。如中国专利(授权公告号为cn103757042b)公开了基于自聚集短肽诱导的固定化腈水解酶及制备方法和应用，中国专利(授权公告号为cn114645033b)公开了一种三磷酸核苷水解酶及其纯化方法和应用，中国专利(授权公告号为cn102363775b)公开了一种纯化腈水解酶的方本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种水解酶精纯品的制备方法，其特征在于，至少包括以下步骤：将枯草杆菌发酵液干粉溶解后离心，离心后获得上清液1和沉淀物1；向沉淀物1中加入纯化水搅拌沉淀物完全悬浮无结块后离心，离心后获得上清液2和沉淀物2，沉淀物2弃去；将上清液1、2混合后进行再次离心，离心后获得上清液3和沉淀物3，沉淀物3弃去；将上清液3进行抽滤获得料液，边搅拌边向料液中加入沉淀剂，加入完毕继续搅拌，然后密封置于冰箱中过夜；过夜后的料液离心后获得上清液4和沉淀物4，弃去上清液4，将沉淀物4用纯化水溶解后转移至容器中，获得水解酶粗提液，将水解酶粗提液进行脱盐、精纯后即得水解酶精纯品。

2.根据权利要求1所述...

【技术特征摘要】

1.一种水解酶精纯品的制备方法，其特征在于，至少包括以下步骤：将枯草杆菌发酵液干粉溶解后离心，离心后获得上清液1和沉淀物1；向沉淀物1中加入纯化水搅拌沉淀物完全悬浮无结块后离心，离心后获得上清液2和沉淀物2，沉淀物2弃去；将上清液1、2混合后进行再次离心，离心后获得上清液3和沉淀物3，沉淀物3弃去；将上清液3进行抽滤获得料液，边搅拌边向料液中加入沉淀剂，加入完毕继续搅拌，然后密封置于冰箱中过夜；过夜后的料液离心后获得上清液4和沉淀物4，弃去上清液4，将沉淀物4用纯化水溶解后转移至容器中，获得水解酶粗提液，将水解酶粗提液进行脱盐、精纯后即得水解酶精纯品。

2.根据权利要求1所述的一种水解酶精纯品的制备方法，其特征在于，所述沉淀剂选自硫酸铵、硫酸钠、氯化钠中的一种。

3.根据权利要求2所述的一种水解酶精纯品的制备方法，其特征在于，所述沉淀剂与料液的体积比＞30％。

4.根据权利要求3所述的一种水解酶精纯品的制备方法，其特征在于，所述离心的条件为：6000-10000rpm，2-5℃，20-60min。

5.根据权利要求4所述的一种水解酶精纯品的制备方法，其特征在于，所述脱盐具体为：将g25色谱分离柱连接到aktapure150色谱制备系统上，从2～8℃冰箱中取出水解酶粗...

【专利技术属性】
技术研发人员：敖永琴，谢宇杰，沈星语，郑李君，
申请(专利权)人：上海源培生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：