一种β-葡萄糖醛酸苷酶及其重组表达载体、工程菌、发酵剂和量产甘草次酸的方法技术

本发明专利技术一种β‑葡萄糖醛酸苷酶及其重组表达载体、工程菌、发酵剂和量产甘草次酸的方法属于酶工程和微生物技术领域。所述β‑葡萄糖醛酸苷酶选自：β‑葡萄糖醛酸苷酶AcGUS、AcGUS1、AcGUS2、AcGUS3、AcGUS3突变体；AcGUS为GenBank登录号为AEK69352.1的氨基酸序列的第1位氨基酸缺失、第7位丙氨酸突变为甘氨酸、第66位精氨酸突变为赖氨酸、第256位丙氨酸突变为缬氨酸、第270位苏氨酸突变为丙氨酸、第332位缬氨酸突变为苯丙氨酸、第363位天冬氨酸突变为谷氨酸、第506位甲硫氨酸突变为缬氨酸所得的酶。本发明专利技术简单高效、可工业化规模制备18α‑GA和18β‑GA。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于酶工程和微生物，具体涉及一种β-葡萄糖醛酸苷酶及其重组表达载体、工程菌、发酵剂和量产甘草次酸的方法。

技术介绍

1、甘草作为一种传统的药食同源植物，被广泛应用于医药、食品和化妆品等行业。据史料记载，甘草入药已逾四千年历史，可谓“朝中国老，药中甘草”。甘草不仅有清热解毒、补脾益气、润肺止咳、调和诸药等功效，还能用于咽喉肿痛、脾胃虚寒、消化性溃疡等症状，在抗炎、保肝、抗氧化、抗病毒、抗肿瘤和抗利尿等方面具有广泛的应用。在许多现代中药的复方配伍中都加入了甘草或其有效成分。

2、甘草酸（glycyrrhizic acid, gl）和甘草次酸（glycyrrhetinic acid, ga）分别是甘草的主要成分和活性成分。目前，已报道的甘草次酸的生产主要有化学法和生物转化法，cn101817867a报道了以甘草酸盐为原料，在硫酸和高浓度醋酸的催化下生成乙酰甘草次酸，然后进一步去乙酰化得到甘草次酸，反应需要使用大量强酸、强碱和有机溶剂，存在耗能高、收率低且环保压力大等问题。而生物转化法不仅具有条件温和、收率高和环保等优点，而且能够为制备不同衍本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种β-葡萄糖醛酸苷酶，其特征在于，其选自：β-葡萄糖醛酸苷酶AcGUS、和/或β-葡萄糖醛酸苷酶AcGUS1、和/或β-葡萄糖醛酸苷酶AcGUS2、和/或β-葡萄糖醛酸苷酶AcGUS3、和/或β-葡萄糖醛酸苷酶AcGUS3突变体；

2. 根据权利要求1所述的一种β-葡萄糖醛酸苷酶，其特征在于，所述β-葡萄糖醛酸苷酶AcGUS的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；

3.一种重组表达载体，其特征在于，连接有权利要求1或2所述的一种β-葡萄糖醛酸苷酶的基因序列的表达载体。

4.根据权利要求3所述的一种重组表达载体，其特征在于，所述表达载体选自pET...

【技术特征摘要】

1.一种β-葡萄糖醛酸苷酶，其特征在于，其选自：β-葡萄糖醛酸苷酶acgus、和/或β-葡萄糖醛酸苷酶acgus1、和/或β-葡萄糖醛酸苷酶acgus2、和/或β-葡萄糖醛酸苷酶acgus3、和/或β-葡萄糖醛酸苷酶acgus3突变体；

2. 根据权利要求1所述的一种β-葡萄糖醛酸苷酶，其特征在于，所述β-葡萄糖醛酸苷酶acgus的氨基酸序列如seq id no.1所示；

3.一种重组表达载体，其特征在于，连接有权利要求1或2所述的一种β-葡萄糖醛酸苷酶的基因序列的表达载体。

4.根据权利要求3所述的一种重组表达载体，其特征在于，所述表达载体选自pet28a、pgapzαa、ppic9k、ppiczα；

5.一种工程菌，其特征在于，选自毕赤酵母菌株acgus、和/或毕赤酵母菌株acgus3、和/或毕赤酵母菌株acgus3m1...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕波，陈林浩，赖俊杰，李春，
申请(专利权)人：北京理工大学，
类型：发明
国别省市：