基于细菌裂解、等温扩增和CRISPR检测的一步法、可视化细菌检测方法及系统技术方案

本发明专利技术公开了一种提供一种基于细菌裂解、等温扩增和CRISPR检测的一步法、可视化细菌检测方法及系统，本发明专利技术将细菌裂解、核酸等温扩增、CRISPR‑Cas12a检测、试纸条信号输出相结合，建立了便捷的检测平台。在本发明专利技术的方法中，将细菌的裂解、特异性基因的恒温扩增和特异性基因的CRISPR‑Cas12a检测整合至同一反应体系内、同一温度下进行，并且通过免疫层析试纸条进行信号输出。本发明专利技术所开发的CRISPR‑免疫层析试纸条检测平台具有特异性强、灵敏度高、效率高、便携性好等优点，在居家检测应用中具有很大的潜力。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物检测，特别涉及一种基于细菌裂解、等温扩增和crispr检测的一步法、可视化细菌检测方法及系统。

技术介绍

1、金黄色葡萄球菌是导致医院和社区获得性感染的重要病原体之一，可引起皮肤脓肿、心内膜炎和败血症等多种感染。其中，与甲氧西林敏感的金葡菌(mssa)相比，由耐甲氧西林金葡菌(mrsa)引起的感染更为复杂，死亡率更高。诊断的延误是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染引起死亡的主要原因，尽快检测出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌可以有效的阻止感染的进一步恶化，因此早期、快速、灵敏的检测手段尤为重要。因此，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的早期诊断作为阻断感染的必要条件，我们迫切需要找到更敏感、特异高且成本较低的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌实验室检测手段，以期通过早发现、早诊断、进一步的针对性的规范化治疗，及早消除由耐甲氧西林金黄色葡萄球菌引发的细菌感染。

2、近年来，crispr技术不仅在识别和切割特定dna和rna序列方面表现出出色的基因编辑能力，而且在核酸检测领域也显示出巨大的潜力。其中，crispr/cas12a与crrna结合形成cas12a-cr本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于细菌裂解、等温扩增和CRISPR检测的一步法、可视化细菌检测方法，该方法用于耐甲氧西林金葡菌的检测，其特征在于，该方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的基于细菌裂解、等温扩增和CRISPR检测的一步法、可视化细菌检测方法，其特征在于，所述第一标志物为6-羧基荧光素FAM，所述第二标志物为生物素Biotin；所述第一特异性捕获体为兔抗5-FAM多克隆抗体，所述第二特异性捕获体为biotin-BSA。

3.根据权利要求2所述的基于细菌裂解、等温扩增和CRISPR检测的一步法、可视化细菌检测方法，其特征在于，所述等温扩增子体系采用ERA等温扩增方法。<...

【技术特征摘要】

1.一种基于细菌裂解、等温扩增和crispr检测的一步法、可视化细菌检测方法，该方法用于耐甲氧西林金葡菌的检测，其特征在于，该方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的基于细菌裂解、等温扩增和crispr检测的一步法、可视化细菌检测方法，其特征在于，所述第一标志物为6-羧基荧光素fam，所述第二标志物为生物素biotin；所述第一特异性捕获体为兔抗5-fam多克隆抗体，所述第二特异性捕获体为biotin-bsa。

3.根据权利要求2所述的基于细菌裂解、等温扩增和crispr检测的一步法、可视化细菌检测方法，其特征在于，所述等温扩增子体系采用era等温扩增方法。

4.根据权利要求3所述的基于细菌裂解、等温扩增和crispr检测的一步法、可视化细菌检测方法，其特征在于，步骤s3中等温扩增的温度为37℃，反应时间为45min。

5.根据权利要求1所述的基于细菌裂解、等温扩增和crispr检测的一步法、可视化细菌检测方法，其特征在于，所述aunp-sa通过以下方法制备得到：

6.根据权利要求5所述的基于细菌裂解、等温扩增和crispr检测的一步法、可视化细菌检测方法，其特征在于，所述aunp-sa通过以下方法制备得到：

7.根据权利要求1所述的基于细菌裂解、等温扩增...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙义祥，张理仁，宋一之，陈虹均，张翀宇，李原，
申请(专利权)人：中国科学院苏州生物医学工程技术研究所，
类型：发明
国别省市：