一种重组人源角蛋白的分离纯化方法技术

本发明专利技术属于角蛋白分离纯化技术领域，具体涉及一种重组人源角蛋白K31全长序列的分离纯化方法。本发明专利技术提供的重组人源角蛋白的分离纯化方法是一种由大肠杆菌表达纯化获得高纯度全长重组人源角蛋白的方法，经过基因合成、载体构建、IPTG诱导表达、包涵体富集、包涵体清洗、亲和层析、柱上复性、蛋白洗脱等步骤。该重组人源角蛋白的分离纯化方法可以获得结构完整的重组人源角蛋白，同时还具有纯度高和回收率高的优点，是一种较为理想的重组人源角蛋白的分离纯化方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于角蛋白分离纯化，具体涉及一种重组人源角蛋白k31全长序列的分离纯化方法。

技术介绍

1、角蛋白(keratin)属于中间纤维蛋白(intermediateprotein，ip)家族，是构成头发、角、爪和人体皮肤外层的主要蛋白质，其具有较高含量的半胱氨酸，并能与邻近的蛋白质或多肽链通过二硫键进行交联，进而形成稳固的纤维结构，具有一定的机械性能，可以保护上皮组织细胞免受损伤或压力。同时，半胱氨酸的交联是角蛋白的主要交联结构，角蛋白的物理和化学性质主要与该交联结构相关，角蛋白具有较高的疏水性，一般不溶于水、盐液、稀酸或稀碱，严重限制了天然角蛋白材料的开发和利用。

2、人类头发中有两种角蛋白复合物，分别称为i型(酸性)角蛋白和ⅱ型(碱性)角蛋白，i型角蛋白分为10组，即角蛋白k31-k40，分子量在46至55之间kda，含有大量半胱氨酸和脯氨酸残基。ii型角蛋白分为6组，角蛋白k81-k86，分子量在54至57之间kda。i型和ii型角蛋白表达后组装形成异二聚体螺旋，二聚体螺旋又会反复交联形成四聚体，如此循环直至形成10nm盘绕线圈结构的本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种重组人源角蛋白的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的重组人源角蛋白的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤S1中菌泥的裂解、洗涤和溶解处理步骤为：将菌泥溶解于非变性缓冲液，液氮-37℃反复冻融裂解2～3次，离心去除上清液，得包涵体沉淀；接着使用洗涤缓冲液洗涤包涵体沉淀，离心去除上清液，得洗涤后包涵体沉淀；接着使用变性缓冲液溶解洗涤后包涵体沉淀，在温度为4～37℃，转速为150rpm的条件下摇床孵育0.5～1h，离心收集上清液。

3.如权利要求2所述的重组人源角蛋白的分离纯化方法，其特征在于，所述非变性缓冲液的添加量是菌泥体积的5～1...

【技术特征摘要】

1.一种重组人源角蛋白的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的重组人源角蛋白的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤s1中菌泥的裂解、洗涤和溶解处理步骤为：将菌泥溶解于非变性缓冲液，液氮-37℃反复冻融裂解2～3次，离心去除上清液，得包涵体沉淀；接着使用洗涤缓冲液洗涤包涵体沉淀，离心去除上清液，得洗涤后包涵体沉淀；接着使用变性缓冲液溶解洗涤后包涵体沉淀，在温度为4～37℃，转速为150rpm的条件下摇床孵育0.5～1h，离心收集上清液。

3.如权利要求2所述的重组人源角蛋白的分离纯化方法，其特征在于，所述非变性缓冲液的添加量是菌泥体积的5～10倍，所述非变性缓冲液为20mmol/ltris-hcl、150mmol/lnacl、5mmol/l edta，ph8.0；所述洗涤缓冲液的添加量是菌泥体积的5～10倍，所述洗涤缓冲液为20mmol/ltris-hcl、2mol/lnacl，ph8.0；所述变性缓冲液的添加量是菌泥体积的5～10倍，所述变性缓冲液为20mmol/ltris-hcl、150mmol/lnacl、6～8mol/l尿素、5％甘油，ph8.0。

4.如权利要求1所述的重组人源角蛋白的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤s1中离心条件为：在转速为10000～12000rpm，温度为4℃的条件下离心10min。

5.如权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：邵秋云，郭之彬，梁聪，李标，
申请(专利权)人：广州市普森生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：