基于主客体相互作用和无标定量的细胞表面蛋白质组原位分析方法技术

本发明专利技术涉及一种新型的细胞表面蛋白质组原位分析方法。在该方法中，将主体基团修饰到基质载体上，制备富集分离材料。将客体基团与标记基团连接，制备双功能客体标记探针分子。将探针与细胞共孵育，利用探针的不透膜性原位共价标记细胞表面蛋白，进行细胞全蛋白质的提取，随后将蛋白质混合物与固载有主体分子的富集材料共孵育，随后对富集到的蛋白进行酶解处理；结合液质联用技术和定量蛋白质组方法，对细胞表面蛋白质组进行原位分析。这一方法对于解析细胞间通讯、离子和其他分子的运输以及信号级联的传递，理解疾病、免疫、耐药以及细胞功能分化等涉及的通路，寻找新的疾病标志物以及药物开发中的新作用靶点具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种新型的细胞表面蛋白质组原位分析方法，属于生物分析。

技术介绍

1、细胞表面蛋白质是指暴露在细胞表面的蛋白，包括并充当活细胞的第一屏障，并负责执行许多关键功能，包括细胞间相互作用、信号转导和分子运输等。细胞表面蛋白表达的差异不但是区分不同类型细胞的重要标志物更是正常细胞和患病细胞间表型和功能差异的基础，因此近2/3的药物靶蛋白都属于细胞表面蛋白。鉴定细胞表面蛋白质组并研究这些蛋白的性质是理解基本生物学过程和寻找药物开发中新作用靶点的关键步骤(expertreview of proteomics,2010,7(1),141-154；j.sep.sci.,2020,43,292–312)。

2、由于低丰度、高疏水性和高异质性的特点限制了细胞表面蛋白的分离和提取效率，因此获得细胞表面蛋白质组的全局谱图一直是蛋白质组学的一大挑战。近些年化学蛋白质组学的兴起，为细胞表面蛋白的鉴定提供了新的工具，即通过化学标记表面暴露的蛋白质或糖链的侧链基团(例如伯胺、羧基、聚糖侧链)，随后利用亲和纯化将标记的表面蛋白分离，如糖捕获、代谢标记和细胞表面生物本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于主客体相互作用和无标定量的细胞表面蛋白质组的原位分析方法，其特征在于：包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的细胞表面蛋白质组原位分析方法，其特征在于：步骤(1)中所述的主体基团包括：葫芦[n]脲(n＝5-8,10,14)、环糊精、杯芳烃、柱[n]芳烃(n＝5、6)中的一种或两种以上；

3.如权利要求1所述的细胞表面蛋白质组原位分析方法，其特征在于：步骤(2)中所述的客体基团包括：二茂铁、金刚烷、二聚金刚烷、多面体硼簇、铵盐、咪唑鎓盐和吡啶鎓盐中的一种或二种以上；

4.如权利要求1所述的细胞表面蛋白质组原位分析方法，其特征在于：步骤(3)中所...

【技术特征摘要】

1.一种基于主客体相互作用和无标定量的细胞表面蛋白质组的原位分析方法，其特征在于：包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的细胞表面蛋白质组原位分析方法，其特征在于：步骤(1)中所述的主体基团包括：葫芦[n]脲(n＝5-8,10,14)、环糊精、杯芳烃、柱[n]芳烃(n＝5、6)中的一种或两种以上；

3.如权利要求1所述的细胞表面蛋白质组原位分析方法，其特征在于：步骤(2)中所述的客体基团包括：二茂铁、金刚烷、二聚金刚烷、多面体硼簇、铵盐、咪唑鎓盐和吡啶鎓盐中的一种或二种以上；

4.如权利要求1所述的细胞表面蛋白质组原位分析方法，其特征在于：步骤(3)中所述客体标记探针分子与细胞共孵育为：探针与细胞在无血清细胞培养基中，5％co2条件、4-37℃下共孵育5分钟-12小时，并收集细胞。

5.如权利要求1所述的细胞表面蛋白质组原位分析方法，其特征在于：步...

【专利技术属性】
技术研发人员：张丽华，乔子淳，侯宇桐，蒋倩倩，江波，梁振，随志刚，张玉奎，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：