一种波士顿蕨类种苗组织培养的繁殖方法技术

本发明专利技术公开了一种波士顿蕨类种苗组织培养的繁殖方法，旨在提供一种繁殖速度快、成本低的波士顿蕨类种苗组织培养的繁殖方法。该繁殖方法包括（ａ）芽的诱导和分化步骤；（ｂ）无菌苗的增殖培养步骤；（ｃ）无菌苗的驯化移栽步骤。本发明专利技术将波士顿蕨类根须放入加有３％的白糖水的ＭＳ培养基中培养，不加琼脂，所以可以有效促进波士顿蕨类根须快速分化出圆球茎；又由于本发明专利技术采用０．２５～０．８ｍｇ／Ｌ的６－苄氨基嘌呤（ＢＡ），糖为３％，０．２５～０．８ｍｇ／Ｌ的激动素（ＫＴ）的ＭＳ培养基作为增殖培养基，所以圆球茎能旺盛增殖；最后圆球茎置于０．５～１．５ｍｇ／Ｌ的３－吲哚丁酸（ＩＢＡ），糖３％的ＭＳ培养基中培养，圆球茎四周即可快速生根。本发明专利技术可广泛应用于波士顿蕨类种苗组织培养领域。

Propagation method for tissue culture of Boston fern seedlings

The present invention discloses a propagation method for tissue culture of Boston fern seed and seedling, and aims to provide a propagation method for tissue culture of Boston fern seedlings with fast propagation and low cost. The propagation method comprises the steps of induction and differentiation of (a) buds; (b) multiplication steps of sterile seedlings; (c) domestication and transplanting steps of sterile seedlings. The invention of Boston will put 3% of the fern roots sugar water MS medium without agar, so can effectively promote the rapid differentiation of Boston fern roots round bulb; and because the invention uses 0.25 ~ 0.8mg / L 6 - benzylaminopurine (BA), sugar 3%, 0.25 ~ 0.8mg kinetin (KT / L) MS medium as proliferation medium, so the protocorm to thrive in protocorm proliferation; finally 0.5 ~ 1.5mg / L 3 - IBA (IBA), 3% of the sugar MS medium, protocorm can quickly rooting around. The invention can be widely applied to the tissue culture field of fern seedlings in Boston.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，特别涉及。
技术介绍
波士屯页蕨，学名N印hral印is exaltata cu. Bastaniensis，英文名Boston fern。原产地美国。肾蕨科，株矮，簇生型。波士顿蕨是碎叶肾蕨的突变种，后来声名却凌 驾于碎叶肾蕨之上。此种蕨类的适应力极强，生长容易，因而大受欢迎。不论庭园造景、居 家绿化还是插花艺术，波士顿蕨都被广泛运用，可谓最生活化的蕨类。以前采用的分株进行 繁殖的方法，一棵波士顿蕨类一年只能繁殖出6 8棵，因其繁殖系数低，远不能满足市场 的需要。或者采用孢子繁殖方法，但因采集孢子困难，造成孢子不纯净，由此所造成的波士 顿蕨类种苗变异高，不整齐等原因，不能满足市场的需要。因此，目前波士顿蕨类的繁殖方 法有些品种就采用组织培养法，它是一种利用植物细胞的全能性，离体培养植物组织小块， 进行植物无性快速繁殖的工厂化育苗技术，具体工艺是切下波士顿蕨类的根须，先诱导出 愈伤组织，再分化出不定芽，再培育成可以移栽驯化的壮苗。 一般情况下此过程需要6 8 个月以上，而且需要较高的生产成本(包括培养基成本和培养条件耗费)等，所以现有的波 士顿蕨类种苗繁殖技术仍存在以下缺陷繁殖速度慢，成本较高。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种繁殖速度快、成本 低的波士顿蕨类种苗组织培养的繁殖方法。本专利技术所采用的技术方案是本专利技术包括以下步骤 (a)芽的诱导和分化步骤取波士顿蕨类的根须作为外植体，将所述外植体放入 加有3%的白糖水的MS培养基中培养，分化出圆球茎，培养温度为24 26度，光照强度为 1800 25001ux，光照时间为每天10 14小时； (b)无菌苗的增殖培养步骤取所述圆球茎放入0. 25 0. 8mg/L的6-苄氨基嘌呤 (6BA)、糖为3%、0. 25 0. 8mg/L激动素(KT)的MS培养基中增殖培养，培养温度为24 28度，光照强度为2000 30001ux，光照时间为每天10 14小时； (c)无菌苗的驯化移栽步骤将所述圆球茎放入0. 5 1. 5mg/L的3_吲哚丁酸 (3IBA)、糖3%的MS培养基中培养，培养成可进行移栽驯化的植株，培养温度为18 28度， 弱光条件。 所述波士顿蕨类的根须作为外植体之前需要经过消毒处理，消毒处理是指将所述 根须先用75 %的酒精处理，再用0. 1 %的升汞溶液浸泡后取出，然后用无菌水冲洗4 5 次。 所述酒精处理时间为8 12秒，所述升汞溶液浸泡时间为8 12分钟。 本专利技术的有益效果是由于本专利技术将波士顿蕨类根须放入加有3X的白糖水的MS培养基中培养，不加琼脂，所以可以有效促进波士顿蕨类根须快速分化出圆球茎；又由于本专利技术采用0. 25 0. 8mg/L的6-苄氨基嘌呤(BA)，糖为3%，0. 25 0. 8mg/L的激动素(KT) 的MS培养基作为增殖培养基，所以圆球茎能旺盛增殖；最后圆球茎置于0. 5 1. 5mg/L的 3-吲哚丁酸(IBA)，糖3^的MS培养基中培养，圆球茎四周即可快速生根。本专利技术通过直接 诱导出圆球茎，圆球茎又直接快速增殖减少了愈伤组织的诱导这一步骤，简化培养条件或 培养方式等工艺，可以降低生产成本，提高商品化生产的效率和利润，因此本专利技术的波士顿 蕨类种苗的繁殖方法繁殖速度快，成本低。具体实施方式 实施例一( — )芽的诱导和分化步骤取波士顿蕨类植物的根须作为外植体；将所述根须先 用75%的酒精处理8秒，再在0. 1 %的升汞溶液中浸泡8分钟取出，然后用无菌水冲洗4次； 取经升汞溶液消毒后的所述根须切成lcm的小段，放入加有3%的白糖水的MS培养基中培 养，不加琼脂；培养温度为24 26度，光照18001ux，光照时间每天10小时，培养6周后， 可见根须两端分化出圆球茎。 (二)无菌苗的增殖培养取所述圆球茎切碎后撒铺于加有0. 25mg/L的6_苄氨基嘌呤(BA)，糖为3 %， 0. 25mg/L的激动素(KT)的MS培养基中，培养六周后，每个圆球茎可多分化出5个新的圆球 茎；培养温度要求24 28度，光照20001ux，每天光照10小时。 (三)无菌苗的驯化移栽 再取所述圆球茎切碎后撒铺于0. 5mg/L的3_吲哚丁酸(IBA)，糖3 %的MS培养基 中培养八周后，无菌苗长成lcm的植株，可进行移栽驯化；栽前3天打开瓶盖使无菌苗逐步 适应外界条件；洗净所述无菌苗根部培养基并移栽入泥炭土和珍珠岩比例为4:l的基质 内；保持温度为18 28度，弱光条件，移栽后的第一周用无纺布覆盖，控制湿度85 95% ， 保持叶表面水雾不干。所述MS培养基组成元素包括大量元素、微量元素、有机成分。大量元 素NH4N03 1650mg/L、KN03 1900mg/L、CaC12 *2H20 440mg/L、MgS04 7H20370mg/L、KH2P04 1700mg/L。微量元素KI 0. 83mg/L、H3B03 6. 2mg/L、MnS04 4H20 22. 3mg/L、ZnS04 7H20 8. 6mg/L、 Na2Mn04 2H20 0. 25mg/L、 CuS04 5H20 0. 025mg/L、 CoC12 6H20 0.025mg/L、 F eS04 *7H20(27. 8)+Na2_EDTA *2H20(37. 3)mg/L。有机成分肌醇100mg/L、烟酸0. 5mg/L、盐 酸吡眵醇(维生素B6)0. 5mg/L、盐酸硫胺素(维生素Bl)O. 5mg/L、甘氨酸2mg/L。 实施例二( — )芽的诱导和分化步骤取波士顿蕨类植物的根须作为外植体；将所述根须先 用75%的酒精处理12秒，再在0. 1%的升汞溶液中浸泡12分钟取出，然后用无菌水冲洗5 次；取经升汞溶液消毒后的所述根须切成lcm的小段，放入加有3%的白糖水的MS培养基 中培养，不加琼脂；培养温度为24 26度，光照25001ux，光照时间每天14小时，培养6周 后，可见根须两端分化出圆球茎。 (二)无菌苗的增殖培养 取所述圆球茎切碎后撒铺于加有0.8mg/L的6-苄氨基嘌呤(BA)，糖为3%， 0.8mg/L的激动素(KT)的MS培养基中，培养六周后，每个圆球茎可多分化出6个新的圆球 茎；培养温度要求24 28度，光照30001ux，每天光照14小时。(三)无菌苗的驯化移栽 再取所述圆球茎切碎后撒铺于1. 5mg/L的3_吲哚丁酸(IBA)，糖3%的MS培养 基中培养八周后，无菌苗长成1. 5cm的植株，可进行移栽驯化；栽前4天打开瓶盖使无菌苗 逐步适应外界条件；洗净所述无菌苗根部培养基并移栽入泥炭土和珍珠岩比例为4 : l的 基质内；保持温度为18 28度，弱光条件，移栽后的第一周用无纺布覆盖，控制湿度85 95%，保持叶表面水雾不干。MS培养基的组成元素与实施例一相同。 实施例三( — )芽的诱导和分化步骤取波士顿蕨类植物的根须作为外植体；将所述根须先 用75%的酒精处理IO秒，再在0. 1%的升汞溶液中浸泡10分钟取出，然后用无菌水冲洗4 次；取经升汞溶液消毒后的所述根须切成lcm的小段，放入加有3%的白糖水的MS培养基 中培养，不加琼脂；培养温度为2本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种波士顿蕨类种苗组织培养的繁殖方法，其特征在于：该繁殖方法包括以下步骤：　　　　（ａ）芽的诱导和分化步骤：取波士顿蕨类的根须作为外植体，将所述外植体放入加有３％的白糖水的ＭＳ培养基中培养，分化出圆球茎，培养温度为２４～２６度，光照强度为１８００～２５００ｌｕｘ，光照时间为每天１０～１４小时，培养４～６周后，可见根须两端切分化出圆球茎；　　　　（ｂ）无菌苗的增殖培养步骤：取所述圆球茎放入０．２５～０．８ｍｇ／Ｌ的６－苄氨基嘌呤（６ＢＡ）、糖为３％、０．２５～０．８ｍｇ／Ｌ激动素（ＫＴ）的ＭＳ培养基中增殖培养，培养温度为２４～２８度，光照强度为２０００～３０００ｌｕｘ，光照时间为每天１０～１４小时，培养六周后，每个所述圆球茎可多分化出５～６个新的圆球茎；　　　　（ｃ）无菌苗的驯化移栽步骤：将所述圆球茎放入０．５～１．５ｍｇ／Ｌ的３－吲哚丁酸（３ＩＢＡ）、糖３％的ＭＳ培养基中培养，培养成可进行移栽驯化的植株，培养温度为１８～２８度，弱光条件。

【技术特征摘要】
一种波士顿蕨类种苗组织培养的繁殖方法，其特征在于该繁殖方法包括以下步骤(a)芽的诱导和分化步骤取波士顿蕨类的根须作为外植体，将所述外植体放入加有3％的白糖水的MS培养基中培养，分化出圆球茎，培养温度为24～26度，光照强度为1800～2500lux，光照时间为每天10～14小时，培养4～6周后，可见根须两端切分化出圆球茎；(b)无菌苗的增殖培养步骤取所述圆球茎放入0.25～0.8mg/L的6-苄氨基嘌呤(6BA)、糖为3％、0.25～0.8mg/L激动素(KT)的MS培养基中增殖培养，培养温度为24～28度，光照强度为2000～3000lux，光照时间为每天10～14小时，培养六周后，每个...

【专利技术属性】
技术研发人员：金剑平，文方德，巫仕荣，徐红，黄皑冰，姚慧芬，
申请(专利权)人：珠海市园艺研究所，珠海诺德生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：44[中国|广东]