一种狂犬病疫苗原液生产Vero细胞DNA去除工艺的方法技术

本发明专利技术涉及一种狂犬病疫苗原液生产Vero细胞DNA去除工艺的方法。相对现有技术，本发明专利技术去除了阴离子层析操作，直接对病毒浓缩液进行灭活处理后，进行DNA消化和分子筛层析处理后得到病毒原液。用本发明专利技术制备狂犬病疫苗原液有很高的抗原回收率及杂质去除率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物制品，具体涉及一种狂犬病疫苗原液生产vero细胞dna去除工艺的方法。

技术介绍

1、狂犬病是一种由狂犬病病毒引起的人畜共患疾病，在全球分布广泛，每年死于狂犬病的人数超过5.5万人，其中约95％发生在亚洲和非洲。大多数死亡事件均是被狂犬病毒感染的狗咬伤所致，受害者中30％～60％为15岁以下儿童。狂犬病的预防和治疗通常采用狂犬病疫苗。

2、目前，狂犬疫苗所必需的狂犬病病毒的生产主要是通过培养vero细胞，并在vero细胞上增殖狂犬病病毒的工艺来进行。vero细胞dna残留量影响着疫苗的产品安全性，国内目前主要采用多步层析工艺来去除产品中的vero细胞dna。

3、与传统纯化工艺相比，将狂犬病病毒浓缩液直接灭活后使用benzonase酶进行dna消化后再进行分子筛层析制备原液的工艺可以缩短原液制备工艺周期，提高抗原回收率，增加原液产量，提高产品质量。并且减少工艺步骤可以节约空间和成本，同时降低生产过程带来的无菌风险。

技术实现思路

1、本专利技术要解决的技术问题是：克服本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种狂犬病疫苗原液生产Vero细胞DNA去除工艺的方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1具体包括：对病毒收获液进行0.6μm滤芯预过滤，使用多块1000KD的超滤膜包进行超滤浓缩，超滤浓缩过程控制跨膜压为5～10PSI，当病毒液体积到达1/33倍浓缩体积时开始加入洗滤液进行洗滤，洗滤液总用量为洗滤前病毒液体积的10倍，共分3次进行病毒液的洗滤，洗滤结束后定容至最终体积，确保浓缩倍数满足15～30倍。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2灭活条件为：终浓度0.025％的β-丙内酯于2～8℃条件下振摇...

【技术特征摘要】

1.一种狂犬病疫苗原液生产vero细胞dna去除工艺的方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1具体包括：对病毒收获液进行0.6μm滤芯预过滤，使用多块1000kd的超滤膜包进行超滤浓缩，超滤浓缩过程控制跨膜压为5～10psi，当病毒液体积到达1/33倍浓缩体积时开始加入洗滤液进行洗滤，洗滤液总用量为洗滤前病毒液体积的10倍，共分3次进行病毒液的洗滤，洗滤结束后定容至最终体积，确保浓缩倍数满足15～30倍。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2灭活条件为：终浓度0.025％的β-丙内酯于2～8℃条件下振摇灭活24±1h，振摇频率90±10转/分钟，灭活前蛋白质含量不超过15mg/ml。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2灭活后包括：37±1℃水浴条件下振摇水解3～4h，振摇频率40±10转/分钟后调节病毒液ph至7.3～7...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄明，何荣，严冬美，尹鸿佳，
申请(专利权)人：江苏康润生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：