【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、溶酶体贮积症是由细胞鞘糖脂、糖原或粘多糖的积累(由于有缺陷的水解酶)引起的一组常染色体隐性疾病。庞贝病是由酶酸性α-葡糖苷酶(gaa)的缺乏引起的几种溶酶体贮积症之一。gaa将糖原(一种用于能量的糖的储存形式)代谢为葡萄糖。糖原的积累导致遍及全身的进行性肌病变，其影响各种身体组织，特别是心脏、骨骼肌、肝脏和神经系统。
2、庞贝病有三种公认的类型—婴儿发作型、青少年发作型和成人发作型。婴儿型是最严重的，并且表现出包括肌肉张力的严重缺乏、虚弱、肝脏和心脏肿大以及心肌病变的症状。吞咽可能变得困难，并且舌可能突出并变大。大多数儿童在两岁之前死于呼吸或心脏并发症。青少年发作型庞贝病首先出现在儿童早期到晚期，并且包括躯干、隔膜和下肢中呼吸肌的进行性衰弱以及运动不耐受。大多数青少年发作型庞贝病患者生活不超过第二或第三个十年的寿命。成人发作型症状涉及全身肌肉乏力以及躯干、下肢和膈膜中的呼吸肌萎缩。一些成年患者没有主要症状或运动限制。
3、酶替代疗法(ert)是目前唯一批准的可用于所有庞贝病患者的治疗。其涉及重组人...
【技术保护点】
1.一种分离的重组腺相关病毒(rAAV)颗粒，其包含AAV衣壳蛋白和核酸，其中所述衣壳蛋白包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列或与其至少85％相同的氨基酸序列，所述核酸包含编码α-葡糖苷酶(GAA)蛋白的转基因。
2.根据权利要求1所述的分离的rAAV颗粒，其中编码所述衣壳蛋白的核酸包含SEQ IDNO:145的核苷酸序列或与其至少85％相同的核苷酸序列。
3.根据权利要求1或2所述的分离的rAAV颗粒，其中编码的GAA蛋白包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列或与其至少85％相同的氨基酸序列。
4.根据权利要求1至3中任一项所...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种分离的重组腺相关病毒(raav)颗粒，其包含aav衣壳蛋白和核酸，其中所述衣壳蛋白包含seq id no:45的氨基酸序列或与其至少85％相同的氨基酸序列，所述核酸包含编码α-葡糖苷酶(gaa)蛋白的转基因。
2.根据权利要求1所述的分离的raav颗粒，其中编码所述衣壳蛋白的核酸包含seq idno:145的核苷酸序列或与其至少85％相同的核苷酸序列。
3.根据权利要求1或2所述的分离的raav颗粒，其中编码的gaa蛋白包含seq id no:1的氨基酸序列或与其至少85％相同的氨基酸序列。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的分离的raav颗粒，其中编码所述gaa蛋白的所述转基因包含seq id no:2的核苷酸序列或与其至少85％相同的核苷酸序列。
5.根据权利要求1至3中任一项所述的分离的raav颗粒，其中编码所述gaa蛋白的所述转基因是密码子优化的。
6.根据权利要求5所述的分离的raav颗粒，其中编码所述gaa蛋白的所述转基因包含seq id no:3-6和57-59中任一者的核苷酸序列或与其至少85％相同的核苷酸序列。
7.根据权利要求1或2所述的分离的raav颗粒，其中所述编码的gaa蛋白包含seq idno:38的氨基酸序列或与其至少85％相同的氨基酸序列。
8.根据权利要求7所述的分离的raav颗粒，其中编码所述gaa蛋白的所述转基因包含seq id no:39的核苷酸序列或与其至少85％相同的核苷酸序列。
9.根据权利要求7所述的分离的raav颗粒，其中编码所述gaa蛋白的所述转基因是密码子优化的。
10.根据权利要求9所述的分离的raav颗粒，其中编码所述gaa蛋白的所述转基因包含seq id no:40的核苷酸序列或与其至少85％相同的核苷酸序列。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的分离的raav颗粒，其中编码所述gaa蛋白的所述转基因进一步编码非糖基化作用依赖型溶酶体靶向(gilt)肽。
12.根据权利要求11所述的分离的raav颗粒，其中编码的gilt肽包含seq id no:46的氨基酸序列或与其至少70％相同的氨基酸序列。
13.根据权利要求11或12所述的分离的raav颗粒，其中所述编码的gilt肽由包含seqid no:47-49和80-82中任一者的核苷酸序列或与其至少70％相同的核苷酸序列的核酸编码。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的分离的raav颗粒，其中编码所述gaa蛋白的所述转基因进一步编码药代动力学延伸结构域(pked)。
15.根据权利要求14所述的分离的raav颗粒，其中编码的pked包含seq id no:16、18、20或22中任一者的氨基酸序列或与其至少70％相同的氨基酸序列。
16.根据权利要求14或15所述的分离的raav颗粒，其中所述编码的pked由包含seq idno:17、19、21或23中任一者的核苷酸序列或与其至少70％相同的核苷酸序列的核酸编码。
17.根据权利要求14所述的分离的raav颗粒，其中所述编码的pked包含seq id no:22的氨基酸序列或与其至少70％相同的氨基酸序列。
18.根据权利要求14或17所述的分离的raav颗粒，其中编码的pked由包含seq id no:23的核苷酸序列或与其至少70％相同的核苷酸序列的核酸编码。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的分离的raav颗粒，其中编码所述gaa蛋白的所述转基因进一步编码信号序列。
20.根据权利要求19所述的分离的raav颗粒，其中编码的信号序列包含seq id no:9的氨基酸序列或与其至少70％相同的氨基酸序列。
21.根据权利要求19或20所述的分离的raav颗粒，其中所述编码的信号序列由包含seqid no:10的核苷酸序列或与其至少70％相同的核苷酸序列的核酸编码。
22.根据权利要求21所述的分离的raav颗粒，其中所述编码的信号序列由密码子优化的核酸编码。
23.根据权利要求22所述的分离的raav颗粒，其中所述密码子优化的核酸包含seq idno:11-13和83中任一者的核苷酸序列或与其至少70％相同的核苷酸序列。
24.根据权利要求19所述的分离的raav颗粒，其中所述编码的信号序列包含seq idno:14的氨基酸序列或与其至少70％相同的氨基酸序列。
25.根据权利要求19或24所述的分离的raav颗粒，其中所述编码的信号序列由包含seqid no:15的核苷酸序列或与其至少70％相同的核苷酸序列的核酸编码。
26.根据权利要求19所述的分离的raav颗粒，其中所述编码的信号序列包含seq idno:43的氨基酸序列或与其至少70％相同的氨基酸序列。
27.根据权利要求19或26所述的分离的raav颗粒，其中所述编码的信号序列由包含seqid no:44的核苷酸序列或与其至少70％相同的核苷酸序列的核酸编码。
28.根据权利要求1至27中任一项所述的分离的raav颗粒，其中编码所述gaa蛋白的所述转基因进一步编码接头。
29.根据权利要求28所述的分离的raav颗粒，其中编码的接头包括包含seq id no:24的氨基酸序列的(gly3ser)n接头，其中n为1、2、3或4。
30.根据权利要求28或29所述的分离的raav颗粒，其中所述编码的接头由包含seq idno:25的核苷酸序列或与其至少85％相同的核苷酸序列的核酸编码。
31.根据权利要求28所述的分离的raav颗粒，其中所述编码的接头包括包含seq idno:26的氨基酸序列的(gly4ser)n接头，其中n为1、2、3或4。
32.根据权利要求28或31所述的分离的raav颗粒，其中所述编码的接头由包含seq idno:27的核苷酸序列或与其至少85％相同的核苷酸序列的核酸编码。
33.根据权利要求1至32中任一项所述的分离的raav颗粒，其中所述信号肽在没有接头的情况下直接与所述编码的gaa蛋白、所述编码的gilt肽和所述编码的pked中的任一者连接。
34.根据权利要求1至33中任一项所述的分离的raav颗粒，其中所述编码的gaa蛋白、所述编码的pked和所述编码的gilt肽中的任意两者或全部三者经由所述编码的接头连接。
35.根据权利要求1至30中任一项所述的分离的raav颗粒，其中编码所述gaa蛋白的所述转基因以5'至3'顺序包含：
36.根据权利要求1至27中任一项所述的分离的raav颗粒，其中编码所述gaa蛋白的所述转基因以5'至3'顺序编码：
37.根据权利要求1至36中任一项所述的分离的raav颗粒，其还包含与所述核酸可操作地连接的启动子，所述核酸包含编码所述gaa蛋白的所述转基因。
38.根据权利要求37所述的分离的raav颗粒，其中所述启动子包括组织特异性启动子或泛素启动子。
39.根据权利要求37至38中任一项所述的分离的raav颗粒，其中所述启动子包括：
40.根据权利要求1至39中任一项所述的分离的raav颗粒，其还包含反向末端重复(itr)序列。
41.根据权利要求40所述的分离的raav颗粒，其中所述itr序列相对于包含编码所述gaa蛋白的所述转基因的所述核酸位于5'位置。
42.根据权利要求40所述的分离的raav颗粒，其中所述itr序列相对于包含编码所述gaa蛋白的所述转基因的所述核酸位于3'位置。
43.根据权利要求40所述的分离的raav颗粒，其包含：相对于包含编码所述gaa蛋白的所述转基因的所述核酸位于5'位置的itr序列和相对于包含编码所述gaa蛋白的所述转基因的所述核酸位于3'位置的itr序列。
44.根据权利要求40至43中任一项所述的分离的raav颗粒，其中所述itr序列包含seqid no:28、29和/或60的核苷酸序列或与其至少85％相同的核苷酸序列。
45.根据权利要求1至44中任一项所述的分离的raav颗粒，其还包含增强子。
46.根据权利要求45所述的分离的raav颗粒，其中所述增强子包含seq id no:30的核苷酸序列或与其至少85％相同的核苷酸序列。
47.根据权利要求1至46中任一项所述的分离的raav颗粒，其还包含内含子。
48.根据权利要求47所述的分离的raav颗粒，其中所述内含子包含seq id no:32或41的核苷酸序列或与其至少85％相同的核苷酸序列。
49.根据权利要求1至48中任一项所述的分离的raav颗粒，其还包含kozak序列。
50.根据权利要求49所述的分离的raav颗粒，其中所述kozak序列包含seq id no:33的核苷酸序列或与其至少85％相同的核苷酸序列。
51.根据权利要求1至50中任一项所述的分离的raav颗粒，其还包含多腺苷酸化(polya)信号区。
52.根据权利要求51所述的分离的raav颗粒，其中所述polya信号区包含seq id no:3435、61或84中任一者的核苷酸序列或与其至少85％相同的核苷酸序列。
53.根据权利要求1至52中任一项所述的分离的raav颗粒，其还包含土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(wpre)序列。
54.根据权利要求53所述的分离的raav颗粒，其中所述wpre序列包含seq id no:36或37的核苷酸序列或与其至少85％相同的核苷酸序列。
55.根据权利要求1至54中任一项所述的分离的raav颗粒，其以5'至3'顺序包含以下中的一者或多者：5'itr序列、增强子、启动子序列、kozak序列、编码信号序列的核苷酸序列、编码gaa蛋白的核苷酸序列、wpre序列、polya信号区和3'itr序列或其组合。
56.根据权利要求1至55中任一项所述的分离的raav颗粒，其以5'至3'顺序包含：
57.根据权利要求1至55中任一项所述的分离的raav颗粒，其以5'至3'顺序包含：
58.根据权利要求1至55中任一项所述的分离的raav颗粒，其以5'至3'顺序包含：
59.根据权利要求1至55中任一项所述的分离的raav颗粒，其以5'至3'顺序包含：
60.根据权利要求1至55中任一项所述的分离的raav颗粒，其以5'至3'顺序包含：
61.根据权利要求1至55中任一项所述的分离的raav颗粒，其以5'至3'顺序包含：
62.根据权利要求1至55中任一项所述的分离的raav颗粒，其以...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱云祥，P·佩钱，A·班加，
申请(专利权)人：北海康成制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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