一种SOST基因定点敲入Kozak-Cre-WPRE-pA小鼠模型的构建方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种SOST基因定点敲入Kozak‑Cre‑WPRE‑pA小鼠模型的构建方法及其应用，属于生物工程技术领域。本发明专利技术提供了一种SOST基因定点敲入Kozak‑Cre‑WPRE‑pA小鼠模型的构建方法，包括：利用CRISPR/Cas9技术构建SOST基因定点敲入Kozak‑Cre‑WPRE‑pA实现SOST基因的删除。所述构建方法获得SOST基因定点敲入Kozak‑Cre‑WPRE‑pA小鼠模型，所述小鼠模型外显子区域的编码序列被剪切掉，替换为Kozak‑Cre‑WPRE‑pA序列，SOST在该等位基因中无法正常表达，达到删除SOST的目的。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程，具体涉及一种sost基因定点敲入kozak-cre-wpre-pa小鼠模型的构建方法及其应用。

技术介绍

1、骨硬化蛋白(sclerostin，sost)是一种有着“胱氨酸结”结构的分泌型糖蛋白，它在维持骨微环境的稳态以及调节骨重建中发挥着重要的作用。在生理状态下，sost由骨细胞分泌，结合于成骨细胞表面的lpr5/6受体，从而下调wnt/β-catenin通路活性，达到抑制骨形成的效应。然而在病理状态下，sost的异常升高将会带来一系列不良的影响。有研究表明，在绝经后骨质疏松患者血清中检测到了sost表达的升高，同时与骨密度的下降有着密切的关联，可能是引起骨代谢紊乱的重要原因。sost的人源化中和抗体romosozumab已用于临床上治疗绝经期妇女的骨质疏松。除此之外也有研究表明，在部分肿瘤患者的外周血中也观察到了sost表达的升高，这与患者的不良预后有着紧密的关系。而目前，尚无采用基因编辑系统成功敲除sost基因的相关报道。通过本技术构建的sost删除的小鼠可以探究在不同疾病状态下，如：骨质疏松、肿瘤、免疫相关疾病等，sost表本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种SOST基因定点敲入Kozak-Cre-WPRE-pA小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括：利用CRISPR/Cas9技术构建SOST基因定点敲入Kozak-Cre-WPRE-pA实现SOST基因的删除。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，作为定点敲入工具的同源重组载体上包括如SEQ ID NO.1所示的DNA片段；所述DNA片段自上游到下游依次包括5’同源臂、Kozak-Cre-WPRE-pA和3’同源臂。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括以下步骤：

4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述...

【技术特征摘要】

1.一种sost基因定点敲入kozak-cre-wpre-pa小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括：利用crispr/cas9技术构建sost基因定点敲入kozak-cre-wpre-pa实现sost基因的删除。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，作为定点敲入工具的同源重组载体上包括如seq id no.1所示的dna片段；所述dna片段自上游到下游依次包括5’同源臂、kozak-cre-wpre-pa和3’同源臂。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括以下步骤：

4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述grna包括grna1和grna2；所述grna1的核苷酸序列如seq id no.2所示；所述grna2的核苷酸序列如seq id no.3所示。

5.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱波，贾佳，成佳楠，贾罄竹，
申请(专利权)人：中国人民解放军陆军军医大学第二附属医院，
类型：发明
国别省市：