一种自剪切核酶及其在mRNA疫苗加帽率测定中的应用制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，提供一种自剪切核酶在mRNA疫苗加帽率测定中的应用。本发明专利技术将新型的自剪切核酶手枪状核酶(Pistol ribozyme,PS)经过反式切割形式的改造对mRNA可加帽的5’端区域进行剪切，产生可被变性凝胶电泳便捷检测的5～100nt 5’端酶切产物以指示mRNA加帽反应的效率，并且由于该酶的酶切机制区别于锤头状核酶(Hammerhead ribozyme,HH)，因此表现出了更高的酶活性，使得这类核酶的应用能够成为一种更加高效、便捷、特异地检测mRNA加帽率的方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，提供一种自剪切核酶在mrna疫苗加帽率测定中的应用。

技术介绍

1、自切割核酶有通过内部磷酸酯转移反应在特定位点切割核糖核酸rna的磷酸主链的能力，其酶切速率超过通常rna降解速率的1000万倍。目前已知的几类自切割核酶能够通过使用形成独特催化核心的各种结构来实现这一功能。

2、自切割核酶的常见催化策略是使用广义酸碱催化，广义碱使亲核试剂去质子化，然后攻击临近的磷酸酯键；广义酸作为质子供体实现氧阴离子离去基团质子化，完成核酶的切割反应。不同的核酶使用不同的广义酸、广义碱来实现催化。

3、发夹、vs和扭转核酶均分别使用腺嘌呤或鸟嘌呤核苷碱基作为广义碱。其他潜在充当广义碱角色的基团包括水合金属离子和2’-羟基。广义酸基团包括胞嘧啶等，还有一些特殊例外如glms核酶使用结合的6-磷酸氨基葡萄糖上的胺基作为广义酸。

4、手枪状核酶(pistol ribozyme,ps)是近几年通过使用生物信息学搜索策略发现的一类独特的自我裂解核酶。数百个手枪核酶共有一个共有序列，其中包括10个高度保守的核苷酸和许多其他与特定本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种自剪切核酶，其特征在于，所述自剪切核酶为手枪状核酶，由核糖核苷酸单体有规律的串联形成一段单链RNA序列，该序列具有序列特异性切割靶标RNA的功能，所述自剪切核酶的序列包括：

2.根据权利要求1所述的自剪切核酶，其特征在于，所述自剪切核酶5'端连接有标签M，所述标签M为核酸序列、肽段、荧光小分子和纳米粒子中的一种或多种的组合。

3.根据权利要求1所述的自剪切核酶，其特征在于，S1序列为NNNN，S3序列为NNNN，S1与S3反向互补；S2序列为NNNNNN，S6序列为NNNNNN，S2与S6反向互补；S4序列为NNAAANNN；S5序列为NNNN，S7序列为...

【技术特征摘要】

1.一种自剪切核酶，其特征在于，所述自剪切核酶为手枪状核酶，由核糖核苷酸单体有规律的串联形成一段单链rna序列，该序列具有序列特异性切割靶标rna的功能，所述自剪切核酶的序列包括：

2.根据权利要求1所述的自剪切核酶，其特征在于，所述自剪切核酶5'端连接有标签m，所述标签m为核酸序列、肽段、荧光小分子和纳米粒子中的一种或多种的组合。

3.根据权利要求1所述的自剪切核酶，其特征在于，s1序列为nnnn，s3序列为nnnn，s1与s3反向互补；s2序列为nnnnnn，s6序列为nnnnnn，s2与s6反向互补；s4序列为nnaaannn；s5序列为nnnn，s7序列为(nnnnnnn)n，n为5-30，s5和s7为底物识别区。

4.自剪切核酶靶向切割靶标rna的方法，其特征在于：所述靶标rna中含有一个或多个gn位点，采用权利要求1～3任一项所述的自剪切核酶与靶标rna结合，并在gn位点之间切割断裂靶标rna，n为a、g、c或u。

5.根据权利要求4所述的自剪切核酶靶向切割靶标rna...

【专利技术属性】
技术研发人员：战雪林，杨义力，刘艺锦，翟星晨，
申请(专利权)人：国际遗传工程和生物技术中心泰州区域研究中心，
类型：发明
国别省市：