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一种蚕类绢丝腺单细胞悬液的制备方法技术

技术编号:41568520 阅读:17 留言:0更新日期:2024-06-06 23:49
本发明专利技术公开了一种蚕类绢丝腺单细胞悬液的制备方法,其通过对蚕类个体进行净化处理,解剖完整洁净丝腺组织,采用适用于蚕类绢丝腺特征的单细胞(核)解离技术消化绢丝腺组织并获得高质量和产量的单细胞(核)悬液。本发明专利技术利用蚕类(包括家蚕、野蚕、柞蚕、樗蚕、柳蚕、蓖麻蚕)绢丝腺作为受体,创新采用胶原酶和木瓜蛋白酶联用的组织消化技术,对绢丝腺进行组织消化,获得的单细胞悬液具有较高的细胞活率;创新采用的冷冻裂解法获得的细胞核悬液具有较高得核率。本发明专利技术制备的单细胞(核)悬液的方法低成本、重复性好、成功率高,适用于单细胞(核)转录组测序的样本制备,同时也可以用于探索蚕类绢丝腺细胞系建立及细胞(核)分析。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物,具体涉及一种蚕类绢丝腺单细胞悬液的制备方法,其也为一种蚕类绢丝腺单核悬液的制备方法。


技术介绍

1、单细胞技术能够在单细胞分辨率下解析细胞间的异质性,确定所有类型细胞中基因的表达模式、生理状态、发育轨迹等信息,从而为研究发育和基因表达调控提供前所未有的数据资源。最近几年来,单细胞相关技术蓬勃发展,将生命科学研究推进到前所未有的高分辨率视场。

2、蚕丝业是发端于我国的传统优势农业产业,为推动经济社会发展和世界贸易及人文交流做出了卓越历史贡献。随着蚕丝及其蛋白功能被广泛挖掘和再认识,蚕丝(蛋白)在组织工程、生物医药、食品、日化等诸多领域展现出了广阔应用前景。蚕类绢丝腺作为不同蚕类(桑蚕、大蚕蛾科等物种)专一合成并分泌丝蛋白的产丝器官,其含有大约2000-3000个细胞;蚕类绢丝腺合成分泌丝蛋白的效率关乎蚕丝产量,丝蛋白的组分和结构等决定了蚕丝关键品质(纤度、净度、解舒率、机械性能等),它们均受严格的分子机制调控。现有研究或在先研究从丝蛋白合成与调控的器官基础、基因概貌、表达特征等进行了组织水平的揭示,然而在组织器官层面已难再深入本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种蚕类绢丝腺单细胞悬液的制备方法,其特征在于,其选取家蚕、野蚕、樗蚕、柳蚕、蓖麻蚕绢丝腺为材料,对绢丝腺进行完整解剖和净化处理,采用多酶联用和冷冻裂解技术分别制备出质量和产量高的单细胞和单细胞核悬液。

2.根据权利要求1所述的蚕类绢丝腺单细胞悬液的制备方法,其特征在于,其包括以下步骤:

3.根据权利要求2所述的蚕类绢丝腺单细胞悬液的制备方法,其特征在于,步骤S1中针对蚕卵用1×PBS的缓冲液将其进行充分浸泡,确保蚕卵附着的杂质和蚕连纸充分清洗干净;针对幼虫个体用1×PBS的缓冲液清理表皮附着蚕粪等污渍。

4.根据权利要求2所述的蚕类绢丝腺单细胞悬...

【技术特征摘要】

1.一种蚕类绢丝腺单细胞悬液的制备方法,其特征在于,其选取家蚕、野蚕、樗蚕、柳蚕、蓖麻蚕绢丝腺为材料,对绢丝腺进行完整解剖和净化处理,采用多酶联用和冷冻裂解技术分别制备出质量和产量高的单细胞和单细胞核悬液。

2.根据权利要求1所述的蚕类绢丝腺单细胞悬液的制备方法,其特征在于,其包括以下步骤:

3.根据权利要求2所述的蚕类绢丝腺单细胞悬液的制备方法,其特征在于,步骤s1中针对蚕卵用1×pbs的缓冲液将其进行充分浸泡,确保蚕卵附着的杂质和蚕连纸充分清洗干净;针对幼虫个体用1×pbs的缓冲液清理表皮附着蚕粪等污渍。

4.根据权利要求2所述的蚕类绢丝腺单细胞悬液的制备方法,其特征在于,步骤s1对不同蚕类样本进行洁净处理,其采用多化性家蚕的蚕卵和其他蚕类蚕卵,将选择的蚕卵均置于25℃、相对湿度85%的环境中进行孵化,孵化出蚁蚕。

5.根据权利要求4所述的蚕类绢丝腺单细胞悬液的制备方法,其特征在于,步骤s1进一步包括以下步骤:

6.根据权利要求5所述的蚕类绢丝腺单细胞悬液的制备方法,其特征在于,步骤s3中用镊子将绢丝腺...

【专利技术属性】
技术研发人员:马艳李志伟徐小清唐艺芸李青俊胡杰向仲怀徐汉福
申请(专利权)人:西南大学
类型:发明
国别省市:

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