【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、可转座元件是在基因功能和进化中起关键作用的可移动dna序列。虽然在几乎所有形式的生命中都发现可转座元件，但其流行率在生物体之间变化，其中大部分真核基因组编码可转座元件(在人类中至少45％)。
技术实现思路
1、虽然在20世纪40年代对可转座元件进行了基础研究，但其在dna操纵和基因编辑应用中的潜在效用直到最近几年才被认识到。
2、在一些方面，本公开提供了一种经工程化的逆转录转座酶系统，所述经工程化的逆转录转座酶系统包括：(a)双链核酸，所述双链核酸包括货物核苷酸序列，其中所述货物核苷酸序列被配置成与逆转录转座酶相互作用；以及(b)逆转录转座酶，其中：(i)所述逆转录转座酶被配置成将所述货物核苷酸序列转座至靶核酸基因座；并且(ii)所述逆转录转座酶源自未培养的微生物。在一些实施例中，所述逆转录转座酶包括与seq id no:1-16中的任一者具有至少75％序列同一性的序列。在一些实施例中，所述逆转录转座酶包括逆转录酶结构域。在一些实施例中，所述逆转录转座酶进一步包...
【技术保护点】
1.一种经工程化的逆转录转座酶系统，其包括：
2.根据权利要求1所述的经工程化的逆转录转座酶系统，其中所述逆转录转座酶包括与SEQ ID NO:1-16中的任一者具有至少75％序列同一性的序列。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的经工程化的逆转录转座酶系统，其中所述逆转录转座酶包括逆转录酶结构域。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的经工程化的逆转录转座酶系统，其中所述逆转录转座酶进一步包括一个或多个锌指结构域。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的经工程化的逆转录转座酶系统，其中所述逆转录转座酶进一步包括核酸内切酶结
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【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种经工程化的逆转录转座酶系统，其包括：
2.根据权利要求1所述的经工程化的逆转录转座酶系统，其中所述逆转录转座酶包括与seq id no:1-16中的任一者具有至少75％序列同一性的序列。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的经工程化的逆转录转座酶系统，其中所述逆转录转座酶包括逆转录酶结构域。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的经工程化的逆转录转座酶系统，其中所述逆转录转座酶进一步包括一个或多个锌指结构域。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的经工程化的逆转录转座酶系统，其中所述逆转录转座酶进一步包括核酸内切酶结构域。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的经工程化的逆转录转座酶系统，其中所述逆转录转座酶与已知逆转录转座酶具有小于80％序列同一性。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的经工程化的逆转录转座酶系统，其中所述货物核苷酸序列侧接3'非翻译区(utr)和5'非翻译区(utr)。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的经工程化的逆转录转座酶系统，其中所述逆转录转座酶被配置成通过核糖核酸多核苷酸中间体转座所述货物核苷酸序列。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的经工程化的逆转录转座酶系统，其中所述逆转录转座酶包括邻近所述逆转录转座酶的n末端或c末端的一个或多个核定位序列(nls)。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的经工程化的逆转录转座酶系统，其中所述nls包括与来自由seq id no:17-32组成的组的序列至少80％相同的序列。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的经工程化的逆转录转座酶系统，其中所述序列同一性是通过blastp、clustalw、muscle、mafft或clustalw使用史密斯-沃特曼同源性搜索算法(smith-waterman homology search algorithm)的参数来确定的。
12.根据权利要求11所述的经工程化的逆转录转座酶系统，其中所述序列同一性是通过所述blastp同源性搜索算法使用字长(w)为3、期望值(e)为10的参数以及blosum62评分矩阵将空位罚分设置为存在11，扩展为1并且使用条件组成评分矩阵调整来确定的。
13.一种经工程化的逆转录转座酶系统，其包括：
14.根据权利要求13所述的经工程化的逆转录转座酶系统，其中所述逆转录转座酶源自未培养的微生物。
15.根据权利要求13或权利要求14所述的经工程化的逆转录转座酶系统，其中所述逆转录转座酶包括逆转录酶结构域。
16.根据权利要求13至15中任一项所述的经工程化的逆转录转座酶系统，其中所述逆转录转座酶进一步包括一个或多个锌指结构域。
17.根据权利要求13至16中任一项所述的经工程化的逆转录转座酶系统，其中所述逆转录转座酶进一步包括核酸内切酶结构域。
18.根据权利要求13至17中任一项所述的经工程化的逆转录转座酶系统，其中所述逆转录转座酶与已知逆转录转座酶具有小于80％序列同一性。
19.根据权利要求13至18中任一项所述的经工程化的逆转录转座酶系统，其中所述货物核苷酸序列侧接3'非翻译区(utr)和5'非翻译区(utr)。
20.根据权利要求13至19中任一项所述的经工程化的逆转录转座酶系统，其中所述逆转录转座酶被配置成通过核糖核酸多核苷酸中间体转座所述货物核苷酸序列。
21.根据权利要求13至20中任一项所述的经工程化的逆转录转座酶系统，其中所述序列同一性是通过blastp、clustalw、muscle、mafft或clustalw使用史密斯-沃特曼同源性搜索算法的参数来确定的。
22.根据权利要求21所述的经工程化的逆转录转座酶系统，其中所述序列同一性是通过所述blastp同源性搜索算法使用字长(w)为3、期望值(e)为10的参数以及blosum62评分矩阵将空位罚分设置为存在11，扩展为1并且使用条件组成评分矩阵调整来确定的。
23.一种脱氧核糖核酸多核苷酸，其编码根据权利要求1至22中任一项所述的经工程化的逆转录转座酶系统。
24.一种核酸，其包括为在生物体中表达而优化的经工程化的核酸序列，其中所述核酸编码逆转录转座酶，并且其中所述逆转录转座酶源自未培养的微生物，其中所述生物体不是所述未培养的微生物。
25.根据权利要求24所述的核酸，其中所述逆转录转座酶包括与seq id no:1-16中的任一者具有至少75％序列同一性的变体。
26.根据权利要求24或权利要求25所述的核酸，其中所述逆转录转座酶包括编码邻近所述逆转录转座酶的n末端或c末端的一个或多个核定位序列(nls)的序列。
27.根据权利要求26所述的核酸，其中所述nls包括选自seq id no:17-32的序列。
28.根据权利要求26或27所述的核酸，其中所述nls包括seq id no:18。
29.根据权利要求28所述的核酸，其中所述nls邻近所述逆转录转座酶的所述n末端。
30.根据权利要求26或27所述的核酸，其中所述nls包括seq id no:17。
31.根据权利要求30所述的核酸，其中所述nls邻近所述逆转录转座酶的所述c末端。
32.根据权利要求24至31中任一项所述的核酸，其中所述生物体是原核生物、细菌、真核生物、真菌、植物、哺乳动物、啮齿动物或人。
33.一种载体，其包括根据权利要求24至32中任一项所述的核酸。
34.根据权利要求33所述的载体，其进一步包括编码货物核苷酸序列的核酸，所述货物核苷酸序列被配置成与所述逆转录转座酶形成复合物。
35.根据权利要求33或权利要求34所述的载体，其中所述载体是质粒、微环、celid、腺相关病毒(aav)源性病毒体或慢病毒。
36.一种细胞，其包括根据权利要求33至35中任一项中任一项所述的载体。
37.一种产生逆转录转座酶的方法，所述方法包括培养根据权利要求36所述的细胞。
38.一种用于结合、切刻、切割、标记、修饰或转座双链脱氧核糖核酸多核苷酸的方法，所述方法包括：
39.根据权利要求38所述的方法，其中所述逆转录转座酶源自未培养的微生物。
40.根据权利要求38或权利要求39所述的经工程化的逆转录转座酶系统，其中所述逆转录转座酶包括逆转录酶结构域。
41.根据权利要求38至40中任一项所述的经工程化的逆转录转座酶系统，其中所述逆转录转座酶进一步包括一个或多个锌指结构域。
42.根据权利要求38至41中任一项所述的经工程化的逆转录转座酶系统，其中所述逆转录转座酶进一步包括核酸内切酶结构域。
43.根据权利要求38至42中任一项所述的方法，其中所述逆转录转座酶与已知逆转录转座酶具有小于80％序列同一性。
44.根据权利要求38至43中任一项所述的经工程化的逆转录转座酶系统，其中所述货物核苷酸序列侧接3'非翻译区(utr)和5'非翻译区(utr)。
45.根据权利要求38至44中任一项所述的方法，其中所述双链脱氧核糖核酸多核苷酸通过核糖核酸多核苷酸中间体转座。
46.根据权利要求38至45中任一项所述的方法，其中所述双链脱氧核糖核酸多核苷酸是真核生物...
【专利技术属性】
技术研发人员：布莱恩·C·托马斯，克利斯多佛·布朗，丹妮拉·S·A·戈尔茨曼，莎拉·拉佩里埃，辛迪·卡斯泰勒，利萨·亚历山大，玛丽·凯特琳·赵，莫拉伊玛·特莫彻迪亚兹，安努·托马斯，
申请(专利权)人：宏基因组学公司，
类型：发明
国别省市：
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