一种磁珠分离纯化胰岛方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种磁珠分离纯化胰岛方法及应用，涉及胰岛纯化技术领域，该方法包括以下步骤：将消化细胞悬液经过分液漏斗并流经外部具有磁场的连接管，消化细胞悬液经过外部具有磁场的连接管过程中，消化细胞悬液中的胰岛外分泌腺由于磁珠原理被吸附富集于连接管内壁；将流入至收集装置内含胰岛细胞的液体清洗收集，实现胰岛分离纯化。接着分液漏斗入口处进行冲洗工作，将被吸附富集于连接管内壁的胰岛外分泌腺冲洗至收集装置中，脱去偶联磁珠的CD99抗体实现磁珠的重复利用。本发明专利技术克服了离心法的分离纯化难以控制纯度的问题，可控制并提高分离纯化胰岛的时间和纯度，且CD99抗体偶联磁珠可重复利用，还能确保了分离纯化后的胰岛的功能不受影响。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及胰岛纯化，具体涉及一种磁珠分离纯化胰岛方法及应用。

技术介绍

1、胰岛移植中，保证供体胰岛的数量和质量是胰岛移植成功的关键；从事糖尿病研究的实验也常常需要胰岛细胞。因此，早在20世纪60年代就已经开始了小动物胰岛分离方法的探索，hellerstrom等曾直接从有高血糖的肥胖小鼠分离胰岛用于检测酶活性，后来用同样的方法分离正常小鼠、大鼠和豚鼠的胰岛。由于胰岛散在分布于胰腺的外分泌组织中，并与周围组织紧密连接，胰岛的分离过程实际上是将其从富含消化酶的腺泡中分离出来。所以无论使用何种方法，都会不可避免地引起胰腺外分泌部的破坏、释放的多种酶影响胰岛的数量和质量。因此，胰岛分离是组织细胞分离中最困难的，而提取胰岛的方法存在缺欠、胰腺缺血时间过长、损伤和胰岛的纯化方法等，都是影响胰岛得率的重要因素。

2、传统的胰岛纯化是借助于连续/不连续梯度密度离心法，其原理是基于胰岛与外分泌腺组织细胞具有不同的密度，即胰岛的密度小于外分泌腺细胞的密度。它的缺点是纯度难以控制，因为外分泌腺细胞污染的胰岛移植后的效果不佳，因此，我们追求高纯度胰岛；另外，fic本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.磁珠分离纯化胰岛方法，其特征是：所述方法通过定制抗体CD99偶联磁珠和分离纯化装置实现，所述磁珠分离纯化装置包括分离纯化结构和设置于分离纯化结构出口端正下方的收集装置，所述分离纯化结构包括分液漏斗，分液漏斗的底端外部至连接管的底端外部设有磁场装置；

2.如权利要求1所述的磁珠分离纯化胰岛方法，其特征是：所述步骤S1中，消化细胞悬液经过外部具有磁场的连接管过程中，先控制连接管出口封闭，待消化细胞悬液在分离纯化结构静置一段时间，然后打开连接管出口使消化细胞悬液由连接管出口端流出。

3.如权利要求1所述的磁珠分离纯化胰岛方法，其特征是：所述磁场装置为包裹连接管的永磁...

【技术特征摘要】

1.磁珠分离纯化胰岛方法，其特征是：所述方法通过定制抗体cd99偶联磁珠和分离纯化装置实现，所述磁珠分离纯化装置包括分离纯化结构和设置于分离纯化结构出口端正下方的收集装置，所述分离纯化结构包括分液漏斗，分液漏斗的底端外部至连接管的底端外部设有磁场装置；

2.如权利要求1所述的磁珠分离纯化胰岛方法，其特征是：所述步骤s1中，消化细胞悬液经过外部具有磁场的连接管过程中，先控制连接管出口封闭，待消化细胞悬液在分离纯化结构...

【专利技术属性】
技术研发人员：张雷，
申请(专利权)人：连云港市第一人民医院，
类型：发明
国别省市：