一种可翻译蛋白的环形RNA表达载体及构建方法和表达方法技术

本发明专利技术属于分子生物学技术领域，具体涉及一种可翻译蛋白的环形RNA表达载体及构建方法和表达方法。本发明专利技术提供了一种环形RNA过表达骨架，包括以下依次连接的结构：上游同源臂序列、上游促环化序列、第一酶切位点、间隔序列、IRES序列、第二酶切位点、下游促环化序列和下游同源臂序列。本发明专利技术所述环形RNA过表达骨架可以使表达的环形RNA具备蛋白翻译能力，将需要环化的基因线性序列通过酶切位点重组至装载有表达骨架的真核表达载体中，然后将重组质粒转染至细胞即可使表达的目标环形RNA分子翻译蛋白。本发明专利技术构建的环形RNA过表达骨架及表达载体提供了一种表达具有蛋白翻译功能环形RNA的工具。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学，具体涉及一种可翻译蛋白的环形rna表达载体及构建方法和表达方法。

技术介绍

1、环形rna(circular rna，circrna)是一类共价闭合的单链环状rna分子，由前信使rna(pre-mrna)经反向剪接形成。目前已证明circrna具有作为微小rna(mirna)海绵调节多种肿瘤组织的发生和转移、转录调节和作为肿瘤的生物标志物等功能。

2、circrna不具有5'帽与3'polya尾结构，所以其通常被认为不具有编码功能。但随着circrna相关研究的深入，越来越多的证据表明某些circrna具有蛋白或小肽编码功能，并通过其翻译的功能性产物参与生命活动调节。circrna的结构特异性导致其不易被核酸外切酶降解，因此其相较于线性rna更稳定，翻译蛋白的能力更加持久，是替代线性rna翻译的一种重要手段。circrna的翻译只能通过非帽依赖式的途径，因此ires序列及其他辅助序列的优化有利于提高circrna的翻译水平。而自然条件下具有翻译潜能的circrna序列中的ires或m6a序列启动翻译的活性一般较弱。...

【技术保护点】

1.环形RNA过表达骨架，其特征在于，包括以下依次连接的结构：上游同源臂序列、上游促环化序列、第一酶切位点、间隔序列、IRES序列、第二酶切位点、下游促环化序列和下游同源臂序列；

2.根据权利要求1所述环形RNA过表达骨架，其特征在于，所述第一酶切位点和第二酶切位点分别选自BamH I和Xho I中的一种。

3.根据权利要求1所述环形RNA过表达骨架，其特征在于，所述IRES序列如SEQ ID No.4所示。

4.根据权利要求1所述环形RNA过表达骨架，其特征在于，所述环形RNA过表达骨架的核苷酸序列包括SEQ ID No.5所示的序列。

...

【技术特征摘要】

1.环形rna过表达骨架，其特征在于，包括以下依次连接的结构：上游同源臂序列、上游促环化序列、第一酶切位点、间隔序列、ires序列、第二酶切位点、下游促环化序列和下游同源臂序列；

2.根据权利要求1所述环形rna过表达骨架，其特征在于，所述第一酶切位点和第二酶切位点分别选自bamh i和xho i中的一种。

3.根据权利要求1所述环形rna过表达骨架，其特征在于，所述ires序列如seq id no.4所示。

4.根据权利要求1所述环形rna过表达骨架，其特征在于，所述环形rna过表达骨架的核苷酸序列包括seq id no.5所示的序列。

5.一种包含权利要求1～4任一项所述环形rna过表达骨架的重组载体。

6.根据权利要求5所述重组载...

【专利技术属性】
技术研发人员：周继勇，杜柳阳，顾金燕，颜焰，金玉兰，董伟仁，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：