【技术实现步骤摘要】
专利
本专利技术涉及与pap相关结构域5(pap associated domain containing 5，papd5)和pap相关结构域7(pap associated domain containing 7，papd7)两者互补的核酸分子，当使用单个寡聚核苷酸时导致抑制papd5和papd7两者的表达。本专利技术还提供了papd5和papd7特异性核酸分子用于治疗和/或预防乙型肝炎病毒(hbv)感染(尤其是慢性hbv感染)。本专利技术还包括用于治疗和/或预防hbv感染的药物组合物。
技术介绍
0、专利技术背景
1、hbv感染仍然是世界范围内的主要健康问题，其涉及估计3.5亿慢性携带者。大约25％的携带者死于慢性肝炎、肝硬化或肝癌。乙型肝炎病毒是仅次于烟草的第二大致癌物质，导致60％至80％的原发性肝癌。hbv的传染性比艾滋病病毒(hiv)高100倍。
2、乙型肝炎病毒(hbv)是包膜的、部分双链的dna病毒。紧凑的3.2kb hbv基因组由四个重叠的开放阅读框(orf)组成，其编码核心、聚合酶(pol)、包膜和x蛋白。pol orf最长，包膜orf位于其中，而x和核心orf与pol orf重叠。hbv的生命周期具有两个主要事件：1)从松弛环状(rc dna)生成闭合环状dna(cccdna)，和2)前基因组rna(pgrna)逆转录产生rc dna。在宿主细胞感染之前，hbv基因组作为rc dna存在于病毒体(virion)内。已经确定hbv病毒体(virion)能够通过非特异性结合存在于人
3、肝细胞和/或肝内免疫细胞响应hbv感染而分泌的抗病毒细胞因子在受感染肝脏的病毒清除中起重要作用。然而，由于病毒采取多种逃逸策略来抵抗宿主细胞识别系统和随后的抗病毒应答，慢性感染的患者仅显示出弱的免疫应答。
4、许多观察表明，几种hbv病毒蛋白可以通过干扰病毒识别信号系统和随后的干扰素(ifn)抗病毒活性来抵抗最初的宿主细胞应答。其中，hbv空亚病毒颗粒(svp,hbsag)的过度分泌被认为参与维持慢性感染患者(chb)中观察到的免疫耐受状态。持续暴露于hbsag和其他病毒抗原可导致hbv-特异性t-细胞缺失或进行性功能损伤(kondo,journal ofimmunology(1993),150,4659–4671；kondo,journal of medical virology(2004),74,425–433；fisicaro,gastroenterology,(2010),138,682-93)。此外，据报道hbsag通过直接相互作用抑制免疫细胞如单核细胞、树突细胞(dc)和自然杀伤(nk)细胞的功能(op denbrouw,immunology,(2009b),126,280-9；woltman,plos one,(2011),6,e15324；shi,jviral hepat.(2012),19,e26-33；kondo,isrn gasteroenterology,(2013),article id935295)。
5、hbsag定量是慢性乙型肝炎预后和治疗反应的重要生物标志物。然而，在慢性感染患者中很少观察到hbsag减少和血清转换的实现，但这仍然是治疗的最终目标之一。目前的疗法如核苷(酸)类似物是抑制hbv dna合成但不针对降低hbsag水平的分子。即使长期使用核苷(酸)类似物治疗，也只表现出与天然观察到的hbsag清除相当的弱的hbsag清除(在-1％-2％之间)(janssen,lancet,(2005),365,123-9；marcellin,n.engl.j.med.,(2004),351,1206-17；buster,hepatology,(2007),46,388-94)。最近的研究显示全部或部分整合的乙型肝炎病毒dna是慢性感染个体中hbsag表达的来源(参见wooddell等2017sci.transl.med.第9卷,第409期,eaan0241)。
6、乙型肝炎e抗原(也称为hbv包膜抗原或hbeag)是由乙型肝炎感染的细胞分泌的病毒蛋白。hbeag与慢性乙型肝炎感染有关，并被用作活动性病毒性疾病和患者传染程度的标志物。
7、乙型肝炎病毒前核心或hbeag的功能尚不完全清楚。然而，众所周知，hbeag在病毒持续感染中起关键作用。hbeag被认为通过作为免疫调节蛋白发挥功能来促进hbv慢性化。特别地，hbeag是分泌的辅助蛋白，其看起来可以减弱宿主对细胞内核衣壳蛋白的免疫应答(walsh,virology,2011,411(1):132-141)。hbeag作为促进hbv持续感染的免疫耐受原发挥作用，并且考虑到可溶性hbeag穿过胎盘，其可能在子宫内发挥功能(walsh,virology,2011,411(1):132-141)。此外，hbeag下调：i)控制细胞内信号传导的细胞基因；和ii)toll-样受体2(tlr-2)，以抑制对病毒感染的先天免疫应答(walsh,virology,2011,411(1):132-141)。在没有hbeag的情况下，hbv复制与tlr2通路的上调相关(walsh,virology,2011,411(1):132-141)。因此，hbeag在调节病毒/宿主相互作用以影响宿主免疫应答中具有显著作用(walsh,virology,2011,411(1):132-141)。因此，降低hbeag阳性患者群中的hbeag可导致hbv特异性免疫功能障碍的逆转(milich,1997,j.viral.hep.4:48–59；milich,1998,j.immunol.160:2013–2021)。此外，分泌的hbeag在引发t-细胞耐受方面比细胞内肝炎核心抗原(hbcag)显著更有效，hbeag和hbcag之间分开的t细胞耐受以及hbc/hbeag特异性t-细胞耐受的克隆异质性可能对天然hbv感染、特别是对于前核心阴性慢性肝炎具有重要意义(chen,2005,journal of virology,79:3016-3027)。
8、因此，与单独抑制hbsag的分泌相比，降低hbeag以及hbsag的分泌将导致改善对慢性hbv感染发展的抑制。此外，已报道在hbeag阳性母亲的母胎和新生儿hbv传播病例中，急性感染转变为慢性的比例最高(>80％)(liaw,lancet,2009,373:582-592；liaw,dig.dis.sci.本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.长度为12至30个核苷酸的反义寡核苷酸，其包含长度为12至20个核苷酸的连续核苷酸序列，能够抑制PAPD5和PAPD7两者的表达。
2.权利要求1的核酸分子，其中连续核苷酸序列与SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2的靶核酸至少93％互补。
3.权利要求1或2的核酸分子，其中连续核苷酸序列与SEQ ID NO:1上的第64669至69429位和SEQ ID NO:2上的第29514至29530位互补。
4.权利要求1或2的核酸分子，其中连续核苷酸序列与SEQ ID NO:11上的第69414至69429位和SEQ ID NO:2上的第30731至30746位互补。
5.权利要求1至3的反义寡核苷酸，其中连续核苷酸序列包含SEQ ID NO:17或18或由其组成。
6.权利要求1至5之任一的反义寡核苷酸，其包含一个或多个2’糖修饰的核苷。
7.权利要求6的反义寡核苷酸，其中一个或多个2’糖修饰的核苷独立地选自2’-O-烷基-RNA、2’-O-甲基-RNA、2’-烷氧基-RNA、2’-O-甲氧基乙基-
8.权利要求6或7的反义寡核苷酸，其中一个或多个2’糖修饰的核苷是LNA核苷。
9.权利要求7或8的反义寡核苷酸，其中LNA核苷是氧基-LNA或cET。
10.权利要求1至9之任一的反义寡核苷酸，其中连续核苷酸序列中至少75％的核苷间连接是硫代磷酸酯核苷间连接。
11.权利要求10的反义寡核苷酸，其中至少一个硫代磷酸酯核苷间连接是立体限定的。
12.权利要求1至10之任一的反义寡核苷酸，其中寡核苷酸是具有结构式5’-F-G-F’-3’的gapmer，其中F和F’翼区独立地包含1至8个根据权利要求7至10的2’糖修饰核苷，且G为能够招募RNaseH的5至16个核苷的gap区。
13.权利要求12的反义寡核苷酸，其中
14.缀合化合物，其包含根据权利要求1至13之任一的反义寡核苷酸，且至少一个缀合物部分与所述反义寡核苷酸共价连接。
15.权利要求14的缀合化合物，其中缀合物部分选自图1中的三价GalNAc部分之一。
16.权利要求14或15的缀合化合物，其中缀合物部分是图1D中的三价GalNAc部分。
17.权利要求14至16之任一的缀合化合物，其包含接头，所述接头位于反义寡核苷酸和缀合物部分之间。
18.权利要求17的缀合化合物，其中接头是生理学不稳定的接头，由2至5个连续的磷酸二酯连接的核苷组成，位于反义化合物的连续核苷酸序列的5’或3’端。
19.根据权利要求1至13之任一的反义寡核苷酸或权利要求14至18之任一的缀合化合物的可药用盐。
20.根据权利要求1至13之任一的反义寡核苷酸或权利要求14至18之任一的缀合化合物的可药用钠盐。
21.根据权利要求1至13之任一的反义寡核苷酸或权利要求14至18之任一的缀合化合物的可药用钾盐。
22.药物组合物，其包含根据权利要求1至13之任一的反义寡核苷酸、或权利要求14至18之任一的缀合化合物或其可药用盐，以及可药用稀释剂、溶剂、载体、盐和/或辅助剂。
23.权利要求22的药物组合物，其中可药用稀释剂是无菌磷酸盐缓冲盐水。
24.用于在表达PAPD5和PAPD7的靶细胞中调节PAPD5和PAPD7表达的体外方法，所述方法包括向所述靶细胞施用有效量的根据权利要求1至13之任一的反义寡核苷酸、或根据权利要求14至18之任一的缀合化合物、或权利要求19至21之任一的可药用盐。
25.根据权利要求1至13之任一的反义寡核苷酸、或权利要求14至18之任一的缀合化合物、权利要求19至21之任一的可药用盐、或权利要求22或23的药物组合物用于治疗个体HBV感染。
26.根据权利要求1至13之任一的反义寡核苷酸、或权利要求14至18之任一的缀合化合物、权利要求19至21之任一的可药用盐、或权利要求22或23的药物组合物用于治疗个体的慢性HBV感染。
27.根据权利要求1至13之任一的反义寡核苷酸、或权利要求14至18之任一的缀合化合物、权利要求19至21之任一的可药用盐、或权利要求22或23的药物组合物用于减轻HBV感染患者的传染性。
28.一种用于在HBV感染个体中治疗HBV感染的方法，所述方法包括将治疗有效量的根据权利要求1至13之任一的反义寡核苷酸、或权利要求14...
【技术特征摘要】
1.长度为12至30个核苷酸的反义寡核苷酸，其包含长度为12至20个核苷酸的连续核苷酸序列，能够抑制papd5和papd7两者的表达。
2.权利要求1的核酸分子，其中连续核苷酸序列与seq id no:1和seq id no:2的靶核酸至少93％互补。
3.权利要求1或2的核酸分子，其中连续核苷酸序列与seq id no:1上的第64669至69429位和seq id no:2上的第29514至29530位互补。
4.权利要求1或2的核酸分子，其中连续核苷酸序列与seq id no:11上的第69414至69429位和seq id no:2上的第30731至30746位互补。
5.权利要求1至3的反义寡核苷酸，其中连续核苷酸序列包含seq id no:17或18或由其组成。
6.权利要求1至5之任一的反义寡核苷酸，其包含一个或多个2’糖修饰的核苷。
7.权利要求6的反义寡核苷酸，其中一个或多个2’糖修饰的核苷独立地选自2’-o-烷基-rna、2’-o-甲基-rna、2’-烷氧基-rna、2’-o-甲氧基乙基-rna、2’-氨基-dna、2’-氟-dna、阿拉伯糖核酸(ana)、2’-氟-ana和lna核苷。
8.权利要求6或7的反义寡核苷酸，其中一个或多个2’糖修饰的核苷是lna核苷。
9.权利要求7或8的反义寡核苷酸，其中lna核苷是氧基-lna或cet。
10.权利要求1至9之任一的反义寡核苷酸，其中连续核苷酸序列中至少75％的核苷间连接是硫代磷酸酯核苷间连接。
11.权利要求10的反义寡核苷酸，其中至少一个硫代磷酸酯核苷间连接是立体限定的。
12.权利要求1至10之任一的反义寡核苷酸，其中寡核苷酸是具有结构式5’-f-g-f’-3’的gapmer，其中f和f’翼区独立地包含1至8个根据权利要求7至10的2’糖修饰核苷，且g为能够招募rnaseh的5至16个核苷的gap区。
13.权利要求12的反义寡核苷酸，其中
14.缀合化合物，其包含根据权利要求1至13之任一的反义寡核苷酸，且至少一个缀合物部分与所述反义寡核苷酸共价连接。
15.权利要求14的缀合化合物，其中缀合物部分选自图1中的三价galnac部分之一。
16.权利要求14或15的缀合化合物，其中缀合物部分是图1d中的三价galnac部分。
17.权利要求14至16之任一的缀合化合物，其包含接头，所述接头位于反义寡核苷酸和缀合物部分之间。
18.权利要求17的缀合化合物，其中接头是生理学不稳定的接头，由2至5个连续的磷酸二酯连接的核苷组成，位于反义化合物的连续核苷酸序列的5’或3’端。
19.根据权利要求1至13之任一的反义寡核苷酸或权利要求14至18之任一的缀合化合物的可药用盐。
20.根据权利要求1至13之任一的反义寡核苷酸或权利要求14至18之任一的缀合化合物的可药用钠盐。
21.根据权利要求1至13之任一的...
【专利技术属性】
技术研发人员：S·卡姆勒，A·洛佩兹，H·米勒，S·奥特森，L·佩德森，
申请(专利权)人：豪夫迈·罗氏有限公司，
类型：发明
国别省市：
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