纯化粗发酵液的絮凝方法技术

本发明专利技术涉及在特定pH下在尿素和Triton‑X‑100存在下，从胰岛素和胰岛素类似物或衍生物的粗发酵液中在生产规模上纯化重组蛋白质的絮凝方法。絮凝方法之后至少有一个离心和pH调节步骤，以进一步澄清培养液。这之后进行过滤以最终去除存在的任何絮凝物，并进行色谱步骤以捕获纯蛋白质。使用该方法实现了超过95％的高产品回收率。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】

本文所公开的方法属于下游加工领域。该方法涉及从发酵液中纯化蛋白质。更具体地，提供了用于从含有可溶性组分和不溶性组分的蛋白质悬浮液中纯化蛋白质的絮凝方法。

技术介绍

1、以下背景论述仅用于促进读者对本专利技术的理解，并不应理解为描述或构成本专利技术的现有技术。

2、使用巴斯德毕赤酵母(pichia pastoris)作为宿主细胞生产重组蛋白已成为广泛的工业实践。治疗性重组蛋白如胰岛素、其类似物和衍生物是大小约为5-7kda的肽。这些肽已在巴斯德毕赤酵母中以前体分子的形式表达，并外部分泌到发酵上清液中。发酵收获后，通过连续离心分离细胞。离心后，上清液含有大量的毕赤酵母细胞、细胞碎片、毕赤酵母相关色素和其他培养基相关杂质。该粗品不能直接上样到色谱柱上。不溶性固体以及许多可溶性杂质对纯化柱造成显著损害，并且如果通过捕获一直进行到纯化步骤，则可能严重干扰纯化工艺，导致柱寿命降低和纯化性能受损。

3、首先使用物理分离方法如膜过滤来澄清发酵上清液。微滤是另一种广泛用于澄清具有高固体含量的进料的技术。进行了广泛的开发来发展使用微滤的澄清工艺。开发了本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种纯化发酵液中的重组蛋白的方法，所述方法包括：

2.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述方法还包括：

3.根据权利要求1或2中所述的方法，其中，将尿素添加至浓度为0.1至0.3M。

4.根据权利要求3中所述的方法，其中，将尿素添加至浓度为0.15至0.25M。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中，将所述非离子型去垢剂添加至浓度为0.1至1％(v/v)。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中，通过离心或过滤从所述发酵液和/或所述上清液中分离不溶性物质。

7.根据前述权利要求中任一项...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

1.一种纯化发酵液中的重组蛋白的方法，所述方法包括：

2.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述方法还包括：

3.根据权利要求1或2中所述的方法，其中，将尿素添加至浓度为0.1至0.3m。

4.根据权利要求3中所述的方法，其中，将尿素添加至浓度为0.15至0.25m。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中，将所述非离子型去垢剂添加至浓度为0.1至1％(v/v)。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中，通过离心或过滤从所述发酵液和/或所述上清液中分离不溶性物质。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述重组蛋白是胰岛素或胰岛素类似物或衍生物。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述胰岛素类似物是甘精胰岛素、赖脯胰岛素、门冬胰岛素或口服胰岛素tregopil。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述重组蛋白是已由酵母生产的。

10.根据权利要求9所述的方法，其中，所述酵母是巴斯德毕赤酵母。

11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述非离子型去垢剂选自triton、tween或brij系列。

12.根据权利要求11所述的方法，其中，所述非离子型去垢剂是triton-x-100。

13.根据权利要求12所述的方法，其中，triton-x-100的浓度是0.1至0.4％。

14.根据权利要求13所述的方法，其中，tri...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿齐莫丁·明亚萨卜·沙伊克，帕尔塔·普拉蒂姆·哈扎拉，维巴瓦·舒克拉，卡尔迪克·希瓦帕·甘尼格，
申请(专利权)人：拜康生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：