鸡传染性鼻炎灭活疫苗的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种鸡传染性鼻炎灭活疫苗的制备方法，包括：（１）将副鸡嗜血杆菌菌种稀释接种鸡肉琼脂平板，３７℃培养２２－２４ｈ；选典型菌落接种鸡肉琼脂斜面培养基，培养得到一级斜面菌种；（２）取一级斜面菌种接种于鸡肉汤培养基中３７℃振荡培养１２ｈ，得到二级菌种；（３）将二级菌种接种到半合成培养基中用生物发酵罐培养；灭活，即得。本发明专利技术针对现有的鸡传染性鼻炎灭活疫苗的制备方法所存在的工艺复杂，生产成本高，产量低等缺陷，开展了改进生产工艺的研究工作，最终在培养方法上获得了重大突破。本发明专利技术方法操作简便可行，培养菌数相比于现有的方法有大幅度提高，培养时间也缩短了１０－１２ｈ，有效降低了生产成本。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种灭活疫苗的制备方法，尤其涉及，属于灭活疫苗的制备领域。
技术介绍
鸡传染性鼻炎是由副鸡嗜血杆菌引起的 一种急性呼吸系统传染病，主要特征为眼和鼻粘膜发生不同程度炎症，发病率很高，可以引起幼鸡生长停滞和蛋鸡产蛋量显著下降，8-12周龄的鸡和产蛋母鸡最常发生。此病分布于全世界，由于感染的产蛋鸡产蛋减少10%-40%,生长鸡增重停滞及淘汰鸡数增加，常造成严重经济损失。虽然此病可采用抗生素及磺胺类药物进行治疗，但会造成药物残留，据现地调查卯％以上的大型养鸡场均采用接种疫苗的方式来防治该病。目前，国内一些生物制品生产厂家生产的鸡传染性鼻炎疫苗均为灭活疫苗。这些生产厂家均采用《兽用生物制品规程》工艺进行生产，其主要的工艺方法如下1、 一级菌种制备菌种划线接种鸡肉琼脂平板；在5%-10% C02浓度下37°C培养16-18h;选典型菌落接种5日龄鸡胚卵黄嚢内，37。C继续孵育，收集30h以内死亡鸡胚卵黄液，经纯检确认无菌后待用；2、 二级菌种制备鸡胚卵黄液划线接种鸡肉琼脂平板，5%- 10%CO2 37°C培养16-18h ;选典型菌落接种鸡肉汤培养基中37°C培养16-20h ，纯检确认无菌后待用；3、 菌液培养按2.5%的接种量接入半合成培养基；37。C培养18-20h ,其间摇振培养瓶二次取样活菌计数；纯检确认无菌后，灭活，即得。按照《兽用生物制品规程》进行生产所制备得到的灭活疫苗的培养菌数一般都在30-40亿/ml,按照《兽用生物制品规程》50亿/ml配苗要求，需要对菌液进行浓缩处理。所以，现有的存在工艺复杂，生产成本高，产量低等缺陷，有待改进。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是克服现有的所存在的工艺复杂，生产成本高，产量低等缺陷，提供一种新的，该制备方法具有工艺简捷，生产成本低，产量高等优点；本专利技术所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的一种，包括以下步骤(1) 、制备一级斜面菌种将副鸡嗜血杆菌菌种稀释接种鸡肉琼脂平板，37。C培养22-24h;选典型菌落接种鸡肉琼脂斜面培养基，37°C培养24h ,得到一级斜面菌种；(2) 、制备二级菌种取一级斜面菌种接种于鸡肉汤培养基中(采用全温振荡器)37。C振荡培养12h,得到二级菌种，备用；(3) 、菌液培养将二级菌种接种到半合成培养基中用生物发酵罐培养；确认无菌后，灭活，即得。其中，为了达到更好的技术效果，在步骤(1)中选10-20个典型菌落接种鸡肉琼脂斜面培养基；步骤(3)中，所述的发酵培养条件优选为培养温度为37°C;转速为100-200r/min;培养时间为8h;本专利技术人经过进一步的试验发现，在培养过程中，采用逐渐加大通气量的方法，能够显著提高培养菌数。本专利技术针对现有的所存在的工艺复杂，生产成本高，产量低等缺陷，开展了改进生产工艺的研究工作，最终在培养方法上获得了重大突破。本专利技术方法操作简便可行，培养菌数相比于现有的方法有大幅度提高，培养时间也缩短了 10-12h ，有效降低了生产成本。具体实施例方式下面结合具体实施例来进一步描述本专利技术，本专利技术的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本专利技术的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本专利技术的精神和范围下可以对本专利技术技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本专利技术的保护范围内。1、 副鸡嗜血杆菌菌种购自中国兽医药品监察所。2、 各培养基的具体组成成分(1)鸡肉琼脂平板鸡肉汁100ml、酪蛋白胨lg、氯化钠0.5g、琼脂粉1.5g、辅酶I0.05g、健康鸡血清10ml; (2)鸡肉琼脂斜面培养基成分与鸡肉琼脂平板相同；(3)鸡肉汤培养基鸡肉汁100ml、酪蛋白胨lg、氯化钠0.5g、辅酶l0.05g、健康鸡血清10ml; (4)半合成培养基多蛋白胨5g、酪蛋白胨30g、谷氨酸钠15g、酵母浸粉5g、葡萄糖3g、氯化钠15g、蒸馏水3000ml，调pH7.2-7.4、 115。C灭菌40分钟，使用前加入灭活的健康鸡血清30-60ml和0.5%辅酶I水溶液8-10ml。实施例11、 一级斜面菌种制备副鸡嗜血杆菌菌种稀释接种鸡肉琼脂平板37°C培养22h,选典型菌落10个接种鸡肉琼脂斜面培养基，37°C培养24h,得到一级斜面菌种，放置4。C冰箱待用；2、 二级菌种制备取一级斜面菌种接种于鸡肉汤培养基中全温振荡器37。C培养12h,纯冲会确认无菌后，得到二级菌种，备用；3、 菌液培养将二级菌种接种到半合成培养基中用生物发酵罐进行培养；培养温度37°C,转速100r/min ,培养时间8h ;取样平板活菌计数纯检确认无菌后，灭活,即得。采用《兽用生物制品规程》活菌计数法，鸡肉琼脂平板计数，计算培养菌数，培养菌数的检测结果见表l。实施例21、 一级斜面菌种制备副鸡嗜血杆菌菌种稀释接种鸡肉琼脂平板37°C培养24h，选典型菌落20个接种鸡肉琼脂斜面培养基，37°C培养24h,得到一级斜面菌种，放置4。C冰箱待用；2、 二级菌种制备取一级斜面菌种接种于鸡肉汤培养基中全温振荡器37。C培养12h,纯检确认无菌后，得到二级菌种，备用；3、 菌液培养将二级菌种接种到半合成培养基中用生物发酵罐进行培养；培养温度37°C，转速200r/min ，培养时间8h ;在发酵培养过程中，釆用逐渐加大通气量的方法；取样平板活菌计数纯检确认无菌后，灭活,即得。采用《兽用生物制品规程》活菌计数法，鸡肉琼脂平板计数，计算培养菌数，培养菌数的检测结果见表l。实施例31、 一级斜面菌种制备副鸡嗜血杆菌菌种稀释接种鸡肉琼脂平板37°C培养23h,选典型菌落15个接种鸡肉琼脂斜面培养基，37°C培养24h,得到一级斜面菌种，放置4。C水箱待用；2、 二级菌种制备取一级斜面菌种接种于鸡肉汤培养基中全温振荡器37。C培养12h，纯检确认无菌后，得到二级菌种，备用；3、 菌液培养将二级菌种接种到半合成培养基中用生物发酵罐进行培养；培养温度37°C,转速150r/min,培养时间8h;取样平板活菌计数纯检确认无菌后，灭活,即得。采用《兽用生物制品规程》活菌计数法，鸡肉琼脂平板计数，计算培养菌数，培养菌数的检测结果见表l。实施例41、 一级斜面菌种制备副鸡嗜血杆菌菌种稀释接种鸡肉琼脂平板37°C培养22h，选典型菌落20个接种鸡肉琼脂斜面培养基，37°C培养24h,得到一级斜面菌种，放置4。C水箱待用；2、 二级菌种制备取一级斜面菌种接种于鸡肉汤培养基中全温振荡器37。C培养12h，纯检确认无菌后，得到二级菌种，备用；3、 菌液培养将二级菌种接种到半合成培养基中用生物发酵罐进行培养；培养温度37°C，转速120r/min ,培养时间8h ;取样平板活菌计数，纯检确认无菌后，灭活,即得。采用《兽用生物制品规程》活菌计数法，鸡肉琼脂平板计数，计算培养菌数，培养菌数的检测结果见表l。实施例51、 一级斜面菌种制备副鸡嗜血杆菌菌种稀释接种鸡肉琼脂平板37°C培养20091017007124h，选典型菌落10个接种鸡肉琼脂斜面培养基，37°C培养24h，得到一级斜面菌种，放置4°(3水箱待用；2、 二级菌种制备取一级斜面菌种接种于鸡肉汤培养基中全温振荡器37。C培养12h,纯检确认无菌本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鸡传染性鼻炎灭活疫苗的制备方法，包括以下步骤：　（１）、制备一级斜面菌种：将副鸡嗜血杆菌菌种稀释接种鸡肉琼脂平板，３７℃培养２２－２４ｈ；选典型菌落接种鸡肉琼脂斜面培养基，３７℃培养２４ｈ，得到一级斜面菌种；　（２）、制备二 级菌种：取一级斜面菌种接种于鸡肉汤培养基中３７℃振荡培养１２ｈ，得到二级菌种，备用；　（３）、菌液培养：将二级菌种接种到半合成培养基中用生物发酵罐培养；确认无菌后，灭活，即得。

【技术特征摘要】
1、一种鸡传染性鼻炎灭活疫苗的制备方法，包括以下步骤(1)、制备一级斜面菌种将副鸡嗜血杆菌菌种稀释接种鸡肉琼脂平板，37℃培养22-24h；选典型菌落接种鸡肉琼脂斜面培养基，37℃培养24h，得到一级斜面菌种；(2)、制备二级菌种取一级斜面菌种接种于鸡肉汤培养基中37℃振荡培养12h，得到二级菌种，备用；(3)、菌液培养将二级菌种接种到半合成培养基中用生物发酵罐培养；确认无菌后，灭活，即得。2、 按照权利要求1所述的方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴金，张继东，张明波，付丽杰，尹尧，王华，刘方悦，
申请(专利权)人：哈药集团生物疫苗有限公司，
类型：发明
国别省市：93[]