分泌性白细胞蛋白酶抑制剂基因敲除小鼠模型的构建方法技术

本发明专利技术公开了一种分泌性白细胞蛋白酶抑制剂基因敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于包括以下步骤：（a）由上游引物SLPI‑sgRNA‑1、SLPI‑sgRNA‑2，SLPI‑sgRNA‑3和SLPI‑sgRNA‑4，以及下游引物sgRNA scaffold经混合扩增、退火和延伸后，通过体外转录得到sgRNA；（b）向雌性C57BL/6小鼠的原核胚内显微注射Cas9重组蛋白和sgRNA，将其植入受体，得到SLPI基因敲除小鼠。本发明专利技术构建的模型，能更真实地复制因为中性粒细胞功能紊乱导致的系统性红斑狼疮或狼疮性肾炎模型机制；模型构建时间短，变异性小，一次构建可长期使用，模型饲养简单、操作方便。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种基因敲除小鼠模型及其构建方法，属于动物模型及其应用领域。

技术介绍

1、系统性红斑狼疮（sle）是一种自身免疫介导的，以免疫性炎症为突出表现的，累及多系统、多器官、多组织损害的慢性全身性疾病。狼疮性肾炎（ln）是sle累及肾脏的并发症，患者肾脏病理表现为肾小球硬化、间质纤维化、肾小球免疫复合物沉积，临床表现为尿蛋白和血尿阳性，血肌酐升高。尽管在临床上sle作为一种独立疾病已经有过百年的历史，但其发病原因仍不是很清楚，目前医疗手段无法根治，只能通过长期应用激素和免疫抑制剂控制病情。寻找特定的致病机制、开发针对性的干预措施以及更具潜力的治疗药物过程中选择合适的动物模型就显得极为重要。

2、目前全球范围内常常使用的系统性红斑狼疮动物模型包括nzbwe1/j小鼠，当雌性nzb/binj与雄性nzw/lacj杂交，产生的f1代（nzbwe1/j小鼠）具有明显的自身免疫性疾病表型，类似人的sle。此外，还有bxsb/mpj小鼠，其是由c57bl/6雌鼠和sb/ie雄鼠杂交后培育的重组近交系，产生类似人sle样病理改变，是重症sle模型。但本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.分泌性白细胞蛋白酶抑制剂基因敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在步骤（b）中，包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于在步骤（b2）中，向原核胚内显微注射90-110ng/μl 的Cas9 重组蛋白和40-60 ng/μl 的sgRNA。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于在步骤（b2）中，向原核胚内显微注射95-105ng/μl 的Cas9 重组蛋白和45-55ng/μl 的sgRNA。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在步骤（b）中，包括步骤（b4...

【技术特征摘要】

1.分泌性白细胞蛋白酶抑制剂基因敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在步骤（b）中，包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于在步骤（b2）中，向原核胚内显微注射90-110ng/μl 的cas9 重组蛋白和40-60 ng/μl 的sgrna。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于在步骤（b2）中，向原核胚内显微注射95-105ng/μl 的cas9 重组蛋白和45-55ng/μl 的sgrna。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在步骤（b）中，包括步骤（b4）：提取f0代slpi基因敲除小鼠的基因组dna，用pcr验证基因敲除情况，两对验证引物的序列如下：slpi-check-1f的dna序列如seq no. 6所示，slpi-check-1r的dna序列如seq no. 7所示，slpi-check-2f的dna序列如seq no. 8所示，slpi-check-2r的dna序列如seq no. 9所示；其中check 1引物检测ko，check 2引物检测wt。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在步骤（b）中，包括步骤（b5）：将f0代slpi基因敲除小鼠与野生型小鼠交配获得后代f1，对f1代小鼠进行突变分析；选择突变的f1代...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋松，侯庆，
申请(专利权)人：中国人民解放军东部战区总医院，
类型：发明
国别省市：