【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于土壤微生物量测定，具体涉及一种测定土壤微生物量碳、氮含量的方法。
技术介绍
1、土壤微生物生物量是指体积不小于5×103um3的活体微生物总量。土壤微生物生物量虽然只占土壤有机质的3％左右，但在有机物、氮、磷、硫等转化和循环过程中起着关键作用，不仅是土壤有机质中最活跃的组分，还可作为土壤养分的储存库，是植物生长吸取运用养分的重要来源。微生物对土壤多种环境因子变化极为敏感，因而土壤微生物量的变化常作为土壤肥力、土壤环境污染等其他多种扰动对土壤健康质量影响的敏捷性指标。对土壤微生物生物量进行定量分析，是了解土壤有机质与养分循环和转化的重要措施。
2、土壤微生物生物量的测定方法有底物诱导呼吸法、熏蒸培养法、熏蒸提取法等。底物诱导呼吸法只能测微生物量碳，易受土壤ph值和含量水量影响，对于碱性土壤，co2在土壤液相中发生溶解，使其结果偏低。另底物诱导呼吸法较正系数存在不确定性，故以此方法表征土壤微生物量碳存在很多争议；熏蒸培养法测定周期长，易造成误差；熏蒸提取法相对其他方法，操作简单，检测再现性好，已成为土壤微生物生物量测定的经典方法，在国内外应用较为广泛。但在实际检测批量土壤时发现，熏蒸提取法仍存在一些问题：一是用要有毒试剂氯仿(三氯甲烷)杀死土壤微生物来测定其可提取的活性物质，氯仿对环境与人体有极大危害；二是操作要求高，熏蒸过程易出现密封不严而导致熏蒸失败，需要重新处理，费工费时；三是对适合熏蒸的土壤类型有一定的选择性，粘重或含水量较高土壤熏蒸效果不理想，微生物细胞未充分破损，微生物的活性物质释放不完全，所测
3、中国专利cn101419226b公开一种测定土壤微生物生物量氮的方法，采用熏蒸-浸提的方法对土样进行处理：以不熏蒸土样为对照，将熏蒸和不熏蒸土样分别用4倍重量体积的0.5m硫酸钾溶液振荡浸提，过滤，得浸提液；向消煮管中依次加入5ml浸提液、3g混合加速剂、以及8ml浓硫酸，摇匀。缓慢加热至硫酸发烟，高温消煮3h至溶液澄清，冷却。将消煮产物无损失的转移至蒸馏瓶中，同时加入naoh溶液进行蒸馏，硼酸接收，标准盐酸溶液进行滴定。此方法仍需使用氯仿熏蒸土壤，对熏蒸土和对照土微生物量氮测定提出的方法，操作繁琐，检测效率低。
4、中国专利cn109085322a公开一种测定土壤微生物生物量氮的方法，包括：1)将待测土壤样品进行微波处理，得到微波处理后的土壤样品；2)分别测定微波处理后的土壤样品与未进行微波处理的土壤样品的全氮含量；3)根据公式计算待测土壤样品的微生物生物量氮。该专利提出了一种替代氯仿熏蒸的新方法，即改用微波的方法杀死土壤样品中的微生物，此方法既能杀死微生物，又能避免在操作过程中有吸入毒气的可能性，同时不需要试验中一直维持容器气密性，其最大的改进就是可以大大提高试验效率，处理时间较短，由24h缩短到3min。但此方法只用于微生物量氮的测定，是否可用于微生物量碳测定并不确定。微生物量碳、氮测定多用鲜土，土壤有一定含水量，但用微波处理湿土，微波的热效应引起土壤温度升高，易造成微生物活性物质损失或蛋白变性等问题，影响测定结果。
5、中国专利cn101210882a土壤中微生物生物量碳的测定，具体的说是改进土壤微生物生物量碳的测定方法。该专利改用消煮仪作为消煮加热仪器，消煮管代替消煮瓶盛装试样和试剂溶液，采用梯度升温的方式实现缓慢加热的目的，使用消煮仪对消煮管进行加热时，消煮管上方盖一尾部弯曲的小漏斗，溶液沸腾后开始计时，50min后停止加热，冷却，最后用feso4反滴定剩余的k2cr2o7。此方法仍需用氯仿熏蒸处理，所提出的方法操作繁琐费时，对于微生物量碳含量低的土壤存在检测准确性低的情况。
6、中国专利cn111337587b公开一种高通量测定土壤微生物生物量的方法，该方法包括以下步骤：(1)样品预处理；(2)样品密封培养；(3)建立校准曲线；(4)采用顶空气相色谱(hs-gc)对样品进行检测；(5)结果计算。该专利通过测定密封培养瓶中土壤微生物通过基质诱导呼吸(sir)作用而产生的co2来测定土壤微生物生物量碳(mbc)以量化smb，不仅可以简化操作流程，提高测定结果的准确性，而且无需使用氯仿(有毒的有机溶剂)，符合绿色化学的宗旨。此方法所用基质诱导呼吸产生的co2差异大，影响测定结果的准确性。不同的土壤由于微生物生物量和群落结构上的差异，诱导呼吸率不同，在底物诱导呼吸时有着不同的停滞期，需要的培养时间也不尽相同。以上增加准确测定的难度。
7、中国专利cn109916840a公开一种测定土壤微生物生物量碳氮含量的方法，所述方法包括如下步骤：提取待测土壤样品中土壤微生物dna；利用微量分光光度计测定所提取dna浓度并换算为单位质量土壤微生物dna含量；所测土壤微生物dna含量分别乘以微生物生物量碳含量转化系数和微生物生物量氮含量转化系数，计算出土壤微生物生物量碳含量和土壤微生物生物量氮含量。该专利只需要少量土壤样品提取微生物dna，便能精确估计土壤微生物生物量碳氮含量，而且测定土壤微生物碳氮的方法省略了氯仿熏蒸处理步骤，转化系数准确可靠，提高了土壤微生物生物量碳氮含量的测定效率，且操作相对简单，安全性高。dna提取技术要求高，操作繁琐，所用dna提取试剂包价格昂贵，检测成本高，不适用于批量样品的检测分析。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种同时测定土壤微生物量碳、氮含量的方法，无需使用有毒试剂和抽真空，操作简单，环保安全，成本低，检测结果不易受土壤粘重及人员操作等因素干扰，检测成功率高，能够替代常规熏蒸法进行土壤微生物量碳、氮含量的测定。
2、一种同时测定土壤微生物量碳、氮含量的方法，包括以下步骤：
3、(1)冷冻处理：取土壤，调节含水量，置于冰箱中冷冻，然后超声1～5mi n后于烘箱中放置，取出摇匀，再置于冰箱冷冻，如此反复，然后加入硫酸钾溶液，密封摇匀，振荡，过滤，测定滤液的碳、氮含量；
4、(2)对照处理：另取一份土壤作对照，直接加入硫酸钾溶液，振荡，过滤，测定滤液的碳、氮含量；
5、(3)按照冷冻处理土壤与对照土壤碳、氮之差除以转换系数0.45进行换算，即得微生物量碳、微生物量氮。
6、优选地，步骤(1)中，调节含水量至田间持水量的40～100％。
7、优选地，步骤(1)中，冰箱中冷冻温度为-30～0℃。
8、优选地，步骤(1)中，冷冻时间为10～60min。
9、优选地，步骤(1)中，烘箱中温度为10～40℃。
10、优选地，步骤(1)中，烘箱中放置时间为5～10min。
11、优选地，步骤(1)中，反复次数为6～8次。
12、优选地，步骤(1)中，硫酸钾溶液与土壤的液土比为10:1～2:1。
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【技术保护点】
1.一种同时测定土壤微生物量碳、氮含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的同时测定土壤微生物量碳、氮含量的方法，其特征在于：步骤(1)中，调节含水量至田间持水量的40～100％。
3.根据权利要求1所述的同时测定土壤微生物量碳、氮含量的方法，其特征在于：步骤(1)中，冰箱中冷冻温度为-30℃～0℃。
4.根据权利要求1所述的同时测定土壤微生物量碳、氮含量的方法，其特征在于：步骤(1)中，冷冻时间为10～60min。
5.根据权利要求1所述的同时测定土壤微生物量碳、氮含量的方法，其特征在于：步骤(1)中，烘箱中温度为10～40℃。
6.根据权利要求1所述的同时测定土壤微生物量碳、氮含量的方法，其特征在于：步骤(1)中，烘箱中放置时间为5～10min。
7.根据权利要求1所述的同时测定土壤微生物量碳、氮含量的方法，其特征在于：步骤(1)中，反复次数为6～8次。
8.根据权利要求1所述的同时测定土壤微生物量碳、氮含量的方法，其特征在于：步骤(1)中，硫酸钾与土壤的液土比为10:1
9.根据权利要求1所述的同时测定土壤微生物量碳、氮含量的方法，其特征在于：所述硫酸钾浓度为0.3～0.5mol/L。
10.根据权利要求1所述的同时测定土壤微生物量碳、氮含量的方法，其特征在于：所述振荡时间为0.3～1h。
...【技术特征摘要】
1.一种同时测定土壤微生物量碳、氮含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的同时测定土壤微生物量碳、氮含量的方法，其特征在于：步骤(1)中，调节含水量至田间持水量的40～100％。
3.根据权利要求1所述的同时测定土壤微生物量碳、氮含量的方法，其特征在于：步骤(1)中，冰箱中冷冻温度为-30℃～0℃。
4.根据权利要求1所述的同时测定土壤微生物量碳、氮含量的方法，其特征在于：步骤(1)中，冷冻时间为10～60min。
5.根据权利要求1所述的同时测定土壤微生物量碳、氮含量的方法，其特征在于：步骤(1)中，烘箱中温度为10～40℃。
6.根...
【专利技术属性】
技术研发人员：郑路，郑之卓，孙文胜，李朝英，
申请(专利权)人：中国林业科学研究院热带林业实验中心，
类型：发明
国别省市：
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