【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物检测，特别是涉及一种rna g-四链体/tht荧光传感反应体系及其在生物检测中应用。
技术介绍
1、鸟嘌呤(g)四链体(g4)是由富含鸟嘌呤序列形成的非典型核酸二级构象，可分为dna型或rna型。g-四链体结构广泛存在于人类基因组和转录组中，与许多生理过程和疾病进展密切相关。近年来，研究者通过对g4结构的深入探究表明，g-四链体可与小分子配体以高亲和力相互结合，而特定分子结构配体结合后可产生诸如类酶催化、共轭荧光等不同化学信号。这一现象引起研究者的高度关注，g4/小分子配体所构成的信号元件在生物检测领域得到了广泛应用。
2、经典的g4/小分子配体体系，如dna g4/硫黄素t(thioflavin t,tht)等，利用tht与g4结合时，其分子片段的内旋被抑制，可导致tht荧光信号强度增强数百倍。利用g4/tht特殊的“结合即发光”特性，已被广泛用于疾病突变基因、蛋白、激素等生物标志物检测。然而，传统的dna g4/tht荧光传感体系仍面临信号输出效率低、结合稳定性不足以及高离子依赖等局限。如何从结合特性、分子结构等方面入手，开发新型g4/tht结合构型，是提升g4传感应用性能，拓宽其生物应用领域的关键问题，具有重要的临床价值和转化前景。
3、rna g4是g4结构中的重要分支。近年来研究者大多关注到rna g4与dna g4在与氯化血红素(hemin)结合后作为类酶催化元件，在性能上存在差异，鲜有研究进一步关注rnag4与dna g4在与小分子tht结合后的荧光输出性能。例如，现有公开
技术实现思路
1、为进一步提高g四链体结构在生物检测领域的应用性能，本专利技术的目的在于提供一种rna g-四链体/tht荧光传感反应体系及其在生物检测中应用，该体系具备高效荧光输出性能、稳定环境耐受能力以及低离子强度依赖，可作为新型传感信号输出元件，进一步应用于生物标志物传感检测，原位分子成像等。
2、为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术第一方面提供一种rna g-四链体/tht荧光传感反应体系，包括rna g-四链体(rna g4)和配体硫黄素t(tht)，所述rna g-四链体的序列如seq id no.1或seq id no.2所示。
3、进一步，所述rna g-四链体与硫黄素t呈二聚化结合状态，形成双分子嵌合模式。
4、进一步，所述反应体系中，所述rna g-四链体与所述配体硫黄素t的摩尔比为0.25-3:5-25，例如0.25:5、0.5:5、1:5、1.25:5、1.5:5、2:5、2.5:5、3:5、0.25:10、0.5:10、1:10、1.25:10、1.5:10、2:10、2.5:10、3:10、0.25:25、0.5:25、1:25、1.25:25、1.5:25、2:25、2.5:25、3:25等，但不局限于此。
5、进一步，所述反应体系还包括缓冲液，所述缓冲液包括但不局限于t-na缓冲液、t-10k缓冲液、tk缓冲液、th缓冲液等。其中，所述t-na缓冲液包括以下浓度的组分：50mmtris,100mm nacl,ph＝7.4；所述t-10k缓冲液包括以下浓度的组分：50mm tris,10mm kcl,ph＝7.4；所述tk缓冲液包括以下浓度的组分：50mm tris,100mm kcl,ph＝7.4；所述th缓冲液包括以下浓度的组分：50mm tris,ph＝7.4。
6、进一步，所述rna g-四链体tm值为54-57℃，例如非修饰情况下rna g-四链体为54℃、腺嘌呤修饰rna g-四链体为57℃。
7、进一步，所述rna g-四链体由引物对与靶标在聚合酶作用下扩增反应产生，所述引物对能特异性识别杂交所述靶标。
8、进一步，所述引物对包括第一引物和第二引物，所述第一引物和第二引物的序列分别如seq id no.6和seq id no.7所示；所述靶标为bcr-abl融合基因。
9、进一步，所述聚合酶包括kf dna聚合酶和t7 rna聚合酶。
10、本专利技术第二方面提供根据第一方面所述的rna g-四链体/tht荧光传感反应体系的构建方法，包括如下步骤：将所述rna g-四链体与配体结合组装形成反应体系。
11、进一步，所述构建方法包括如下步骤：将所述rna g-四链体与配体在缓冲液中结合组装形成反应体系。
12、进一步，所述rna g-四链体的序列浓度为0.25-3μm，例如0.25、0.5、1、1.25、1.5、1.75、2、2.25、2.5、2.75、3μm等，但不局限于此。
13、进一步，所述配体的反应浓度为5-25μm，例如5、10、15、20、25μm等，但不局限于此。
14、进一步，反应温度为37℃，但不局限于此。
15、进一步，反应时间为10-120min，例如10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120min等，但不局限于此。
16、进一步，在避光条件下进行反应。
17、本专利技术第三方面提供根据第一方面所述的rna g-四链体/tht荧光传感反应体系和/或根据第二方面所述的的方法构建得到的rna g-四链体/tht荧光传感反应体系在制备生物检测试剂中的应用。
18、进一步，所述生物检测试剂用于检测bcr/abl融合基因。
19、本专利技术第四方面提供一种检测体系，基于第一方面所述的rna g-四链体/tht荧光传感反应体系构建而成，所述检测体系包括引物对、聚合酶和硫黄素t，所述引物对能特异性识别杂交靶标，所述引物对与靶标在聚合酶作用下扩增反应产生所述rna g-四链体，所述rna g-四链体与硫黄素t结合产生荧光信号。
20、进一步，所述引物对包括第一引物和第二引物，所述第一引物和第二引物的序列分别如seq id no.6和seq id no.7所示；所述靶标为bcr/abl融合基因。
21、进一步，所述聚合酶包括kf dna聚合酶和t7 rna聚合酶。
22、进一步，所述检测体系包括扩增反应体系，所述扩增反应体系包括引物对、聚合酶，还包括rna酶抑制剂(rnase抑制剂)、脱氧核苷三磷酸(dntp)、核苷三磷酸(ntp)。
23、进一步，所述扩增反应体系还包括缓冲液，所述缓冲液包括但不局限于kf(exo-)缓冲液等。其中，所述kf(exo-)缓冲液包括以下浓度的组分：50mm nacl，10mm tris-hcl，10mm mgc本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种RNA G-四链体/ThT荧光传感反应体系，其特征在于，包括RNA G-四链体和配体硫黄素T，所述RNA G-四链体的序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。
2.根据权利要求1所述的RNA G-四链体/ThT荧光传感反应体系，其特征在于：所述RNAG-四链体与硫黄素T呈二聚化结合状态，形成双分子嵌合模式。
3.根据权利要求1所述的RNA G-四链体/ThT荧光传感反应体系，其特征在于：所述反应体系还包括缓冲液。
4.根据权利要求1所述的RNA G-四链体/ThT荧光传感反应体系，其特征在于：所述RNAG-四链体Tm值为54-57℃。
5.根据权利要求1-4任一项所述的RNA G-四链体/ThT荧光传感反应体系的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：将所述RNA G-四链体与配体结合组装形成反应体系。
6.根据权利要求1-4任一项所述的RNA G-四链体/ThT荧光传感反应体系和/或根据权利要求5所述的方法构建得到的RNA G-四链体/ThT荧光传感反应体系在制备生物检测试剂中的应用。
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