【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本申请涉及测序领域。
技术介绍
1、为常用的新一代测序平台构建测序文库通常需要在目标核酸的两端添加接头。这些接头通常包含用于样本或分子识别的条形码。在某些情况下，还需要在单个长基因组dna分子的子片段上添加相同的条形码，以促进全基因组测序。目前构建测序文库的过程通常需要多步程序来添加接头。每个步骤通常在单独的反应或容器中进行，既耗费人力，又效率低下。
技术实现思路
1、在一个方面，本公开提供了一种用于测序的已接头多核苷酸文库的制备方法，包括在单个反应混合物中：(a)将双链目标核酸与一种或多种缺口剂接触，以产生由交错的单链断裂分隔的多个重叠核酸片段；(b)提供多个珠子，每个珠子包括固定在珠子上的多个分支连接接头(b-bla)，并提供在3′末端具有简并序列的l-接头群；以及(c)在连接酶存在的情况下，将b-bla与至少一种核酸片段接触、(d)在有连接酶存在下接触l-接头群，从而将l-接头连接到核酸片段的5′末端，由此获得在5′末端具有l-接头序列和在3′末端具有b-bla接头序列的核酸片段文库。
2、在另一方面，本文公开了一种用于制备测序用多核苷酸文库的方法，该方法包括在单个反应混合物中：
3、(a)将双链目标核酸与一种或多种缺口剂接触，以产生被交错的单链断裂分隔的重叠核酸片段；以及
4、(b)在连接酶存在下，将包含多个部分双链第一接头的珠子与核酸片段接触，其中每个第一接头包括：(i)双链平端，其包括一条链的5′末端和互补链的3′末端；(ii)固定在
5、在另一个方面，本文公开了一种反应混合物，该混合物包含(1)一种或多种缺口剂，(2)一种或多种连接酶，(3)多个被交错单链断裂分开的重叠核酸片段，以及(4)部分双链分支接头，部分双链分支接头包含相互杂交以形成部分双链核酸分子的条形码寡核苷酸和杂交寡核苷酸，其中条形码寡核苷酸连接到珠上并包含条形码，其中杂交寡核苷酸未连接到珠上，其中部分双链核酸分子包括(i)具有5′末端和3′末端的双链平端和(ii)包含条形码并具有单链末端的单链区，其中双链平端的5′末端与至少一个核酸片段的3′末端连接。
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1.一种制备用于测序的已接头多核苷酸文库的方法，其包括在单个反应混合物中：将双链的目标核酸与一种或多种缺口剂接触，以产生由交错单链断裂分隔的多个重叠核酸片段；
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述L-接头的3′末端与至少一个所述核酸片段的5′末端连接。
3.根据权利要求1的方法，其中每个BLA包括(i)双链的平端，其包括一条链的5′末端和互补链的3′末端以及(ii)包括条形码序列的单链区域，
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法还包括向所述反应混合物中添加酶，其中所述酶在连接所述L-接头之前降解过量的b-BLA。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述L-接头在所述3′末端包括1-10个简并碱基。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述L-接头在溶液中，
7.根据权利要求5所述的方法，其中所述b-BLA包含尿嘧啶，所述尿嘧啶可被移除以从所述珠子释放所述b-BLA。
8.根据权利要求5所述的方法，其中每个珠子上固定有多个b-BLA，且所述多个b-BLA中的每个具有相同的条形码序列。
<...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种制备用于测序的已接头多核苷酸文库的方法，其包括在单个反应混合物中：将双链的目标核酸与一种或多种缺口剂接触，以产生由交错单链断裂分隔的多个重叠核酸片段；
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述l-接头的3′末端与至少一个所述核酸片段的5′末端连接。
3.根据权利要求1的方法，其中每个bla包括(i)双链的平端，其包括一条链的5′末端和互补链的3′末端以及(ii)包括条形码序列的单链区域，
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法还包括向所述反应混合物中添加酶，其中所述酶在连接所述l-接头之前降解过量的b-bla。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述l-接头在所述3′末端包括1-10个简并碱基。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述l-接头在溶液中，
7.根据权利要求5所述的方法，其中所述b-bla包含尿嘧啶，所述尿嘧啶可被移除以从所述珠子释放所述b-bla。
8.根据权利要求5所述的方法，其中每个珠子上固定有多个b-bla，且所述多个b-bla中的每个具有相同的条形码序列。
9.根据权利要求1所述的方法，所述方法还包括延伸与所述b-bla和l-接头连接的至少一个所述核酸片段以产生延伸的核酸片段，其中所述延伸的核酸片段包括所述条形码的拷贝。
10.根据权利要求8所述的方法，其中所述方法还包括环化所述延伸的核酸片段。
11.根据权利要求5所述的方法，其中所述方法包括多个珠子，每个珠子包含唯一条形码序列。
12.根据权利要求1所述的方法，其中所述双链区的所述3′末端是双脱氧阻遏核苷酸。
13.根据权利要求1所述的方法，其中所述核酸片段的平均长度在200个核苷酸和10000个核苷酸之间。
14.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(a)中产生的交错单链的断裂的50％以上在步骤(b)中通过连接封闭。
15.根据权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种缺口剂选自由非特异性缺口核酸酶、位点特异性缺口核酸酶和化学缺口剂组成的组。
16.根据权利要求1所述的方法，其中所述非特异性缺口酶选自由vvn、虾dsdna特异性内切酶和dnase i组成的组。
17.根据权利要求1所述的方法，所述连接酶是t4 dna连接酶。
18.一种制备用于测序的多核苷酸文库的方法，其包括在单一反应混合物中：
19.根据权利要求18所述的方法，其中至少一个部分双链的第一接头保持未连接，
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述方法还...
【专利技术属性】
技术研发人员：拉多吉·T·德尔马纳茨，布罗克·A彼得斯，安德烈·亚历克斯埃夫，斯尼泽纳·德尔马纳茨，阿姆拉·纳尼塞蒂，
申请(专利权)人：深圳华大智造科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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