【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于帕金森病诊断产品，具体涉及检测生物标志物的试剂在制备帕金森病诊断产品中的应用。
技术介绍
1、帕金森氏病(pd)，也称为麻痹性震颤，是最常见的神经退行性疾病之一。流行病学显示其患病率为15-250/10万人，发病率为10-21/10万人/年，60岁以上人群发病率约为1.37％[1,2]。pd的病因和发病机制可能与社会、药物和个人生活习惯等因素有关。pd的主要病理改变包括黑质致密部分和蓝斑神经元色素的丢失或变浅，路易小体的出现。pd的生化变化涉及中脑黑质致密区和蓝斑区神经元的丢失，导致上述部位及神经末梢多巴胺(da)减少[3]。当da减少≥70％时，pd临床表现突出，同时乙酰胆碱(acetylcholine,ach)在黑质纹状体系统中拮抗da功能的作用相对活跃，da与ach之间的平衡被破坏[4]。
2、目前，对pd中甲基化变化的研究相对有限。由于pd存活患者的脑组织难以获得，现有的研究主要集中在患者血液粒细胞dna甲基化变化与pd的相关性上。henderson-smith及其同事的全基因组甲基化研究确定了pd的甲基化特异性位点、与pd疾病进展相关的甲基化位点以及与多巴胺替代治疗相关的甲基化变化[5]。其他研究发现了几种与pd相关的甲基化基因标记，如dj-1[6]、snca[7]、drd2[8]和pgc-1α[9]。因此，目前对pd甲基化的研究还很不足。虽然上述研究表明白细胞甲基化与pd的发生相关，但从发病机制上很难解释白细胞甲基化变化与pd的发生之间的关系，这种相关性可能是衰老引起的协同变化，而非pd特异
3、目前帕金森病的诊断是基于患者病史、体格检查和辅助检查的结合。帕金森病的四个典型症状包括静态震颤、高肌张力、缓慢运动、步态和姿势障碍。若患者出现以上四种症状，可初步诊断为pd[11]。对于一些症状不典型的患者，早期诊断极其困难，误诊率高，这些患者常被诊断为良性震颤、焦虑、抑郁、脑血管疾病或阿尔茨海默病[12]。为了做出明确的诊断，专家可能会考虑试探性药物治疗，如左旋多巴。服药后症状改善即可确诊pd[13]。因此，在早期或症状不典型时，需要准确的体外诊断方法来辅助pd的诊断。影像学和电生理检查包括ct、磁共振检查、pet-ct检查(多巴胺转运体)、肌电图、脑电图等神经生理检查，可为诊断和鉴别诊断提供有用信息[14,15]。然而，影像学检查费用昂贵，电生理检查缺乏特异性，因此迫切需要pd的特异性辅助诊断方法。
4、与上述基于临床症状、影像学和电生理的方法相比，目前缺乏有效的pd液体活检标志物。液体活检的优点是样品获取迅速、检测方便、结果快速、可多次重复检测，可获得多种样品类型，包括血液、脑脊液、唾液、尿液等。我们之前研究了pd患者脑脊液cfdna的甲基化特征，发现甲基化特征与患者表型显著相关，可用于pd的辅助诊断[16]。然而，除非pd严重或怀疑合并其他疾病，否则大多数pd患者不会常规接受脑脊液检查。因此，样本来源是限制患者甲基化检测的难点之一。如果甲基化检测可以用更容易获得的样本(如血液)进行，检测的依从性将大大提高。为了寻找pd的特异性血液标志物，本专利技术拟平行检测并比较pd患者脑脊液和血液中cfdna的甲基化改变，旨在发现血液cfdna中与pd相关的特异性甲基化标志物。我们期望本专利技术在血液cfdna中发现的pd甲基化标记物有助于未来pd的早期预警、检测和诊断。
技术实现思路
1、本专利技术要解决的技术问题是，提供了检测生物标志物的试剂在制备帕金森病诊断产品中的应用，同时提供了一种帕金森病的诊断模型和诊断系统。
2、本专利技术通过以下技术方案实现：
3、本专利技术提供了检测生物标志物的试剂在制备帕金森病诊断产品中的应用，其中，生物标志物包括基因apmap、c19orf25、tma16、nit2、ndst2或qpct、tma16、apmap、nit2、dcp2、atp、tnfaip1、znf700。
4、所述试剂用于检测所述生物标志物的甲基化水平。
5、本专利技术提供了一种帕金森病诊断模型，包括患者的表型因子和来自患者样本中所述生物标志物的甲基化水平。所述样本来自血液或脑脊液。
6、所述表型因子包括高海拔地区生活时间、多汗症、帕金森病家族史或饮茶、嗅觉减退。
7、优选的，所述帕金森病诊断模型包括基因apmap、c19orf25、tma16、nit2、ndst2甲基化水平和表型因子高海拔地区生活时间、多汗症、帕金森病家族史。
8、优选的，所述帕金森病诊断模型包括基因qpct、tma16、apmap、nit2、dcp2、atp、tnfaip1、znf700和表型因子饮茶、嗅觉减退。
9、本专利技术还提供了一种帕金森病诊断系统，所述诊断系统包括分析判断模块；所述分析判断模块中含有所述诊断模型，用于输出样本是否患帕金森病的诊断结果。
10、所述分析判断模块是在r语言软件系统中运用cox回归模型算法进行运算，得到患者的模型运算评分；
11、当样本来自血液时，阈值为0.604，灵敏度为0.94，特异性为0.77；当样本来自脑脊液时，阈值为0.606，灵敏度为1，特异性为1；所述模型运算评分高于阈值，则判读为阳性，低于阈值则判读为阴性。
12、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
13、1、本专利技术采用液体活检标志物，与基于临床症状、影像学和电生理的方法相比，目前缺乏有效的pd液体活检标志物。液体活检的优点是样品获取迅速、检测方便、结果快速、可多次重复检测，可获得多种样品类型，包括血液、脑脊液、唾液、尿液等。
14、2、本专利技术的甲基化检测采用更容易获得的血液样本进行，显著提高了检测的依从性。实际情况下，除非pd严重或怀疑合并其他疾病，否则大多数pd患者不会常规接受脑脊液检查。因此，样本来源是限制患者甲基化检测的难点之一，本专利技术通过平行检测并比较pd患者脑脊液和血液中cfdna的甲基化改变，发现了血液cfdna中与pd相关的特异性甲基化标志物，在血液cfdna中发现的pd甲基化标记物有助于未来pd的早期预警、检测和诊断。
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1.一种检测生物标志物的试剂在制备帕金森病诊断产品中的应用，其中，生物标志物包括基因APMAP、C19orf25、TMA16、NIT2、NDST2或QPCT、TMA16、APMAP、NIT2、DCP2、ATP、TNFAIP1、ZNF700。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述试剂用于检测所述生物标志物的甲基化水平。
3.一种帕金森病诊断模型，其特征在于：包括患者的表型因子和来自患者样本中如权利要求1所述的生物标志物的甲基化水平。
4.如权利要求3所述的帕金森病诊断模型，其特征在于：所述表型因子包括高海拔地区生活时间、多汗症、帕金森病家族史或饮茶、嗅觉减退。
5.如权利要求4所述的帕金森病诊断模型，其特征在于：所述帕金森病诊断模型包括基因APMAP、C19orf25、TMA16、NIT2、NDST2甲基化水平和表型因子高海拔地区生活时间、多汗症、帕金森病家族史。
6.如权利要求4所述的帕金森病诊断模型，其特征在于：所述帕金森病诊断模型包括基因QPCT、TMA16、APMAP、NIT2、DCP2、ATP、TNFAI
7.如权利要求3所述的帕金森病诊断模型，其特征在于：所述样本来自血液或脑脊液。
8.一种帕金森病诊断系统，其特征在于：所述诊断系统包括分析判断模块；所述分析判断模块中含有如权利要求3-7任一项所述的诊断模型，用于输出样本是否患帕金森病的诊断结果。
9.如权利要求8所述的帕金森病诊断系统，其特征在于：所述分析判断模块是在R语言软件系统中运用COX回归模型算法进行运算，得到患者的模型运算评分。
10.如权利要求9所述的帕金森病诊断系统，其特征在于：当样本来自血液时，阈值为0.604，灵敏度为0.94，特异性为0.77；当样本来自脑脊液时，阈值为0.606，灵敏度为1，特异性为1；所述模型运算评分高于阈值，则判读为阳性，低于阈值，则判读为阴性。
...【技术特征摘要】
1.一种检测生物标志物的试剂在制备帕金森病诊断产品中的应用，其中，生物标志物包括基因apmap、c19orf25、tma16、nit2、ndst2或qpct、tma16、apmap、nit2、dcp2、atp、tnfaip1、znf700。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述试剂用于检测所述生物标志物的甲基化水平。
3.一种帕金森病诊断模型，其特征在于：包括患者的表型因子和来自患者样本中如权利要求1所述的生物标志物的甲基化水平。
4.如权利要求3所述的帕金森病诊断模型，其特征在于：所述表型因子包括高海拔地区生活时间、多汗症、帕金森病家族史或饮茶、嗅觉减退。
5.如权利要求4所述的帕金森病诊断模型，其特征在于：所述帕金森病诊断模型包括基因apmap、c19orf25、tma16、nit2、ndst2甲基化水平和表型因子高海拔地区生活时间、多汗症、帕金森病家族史。
6.如权利要求4所述的帕金...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱爱琴，宋乐乐，张强，年蔚，钟欣，晁婧媛，高森森，李小桃，梁玉花，朱熠，
申请(专利权)人：青海省人民医院，
类型：发明
国别省市：
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