【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及肿瘤靶向药物领域，尤其涉及靶向tlr4-md2/myd88信号通路的递送系统、其制备方法及其应用。
技术介绍
1、卵巢上皮性癌，即卵巢癌（eoc），是女性生殖系统三大常见恶性肿瘤之一，且其复发率和病死率高居首位。由于发病隐匿，早期症状不明显，70%的患者确诊时已至临床晚期，错失手术根治机会，因此，卵巢癌也被称为“沉默杀手”。目前对于晚期卵巢癌的初始治疗主要有两种方式：（1）初始肿瘤细胞减灭术（pds）+术后以铂类/紫杉醇为基础的辅助化疗；（2）以铂类/紫杉醇药物为基础的新辅助化疗（nact）+间歇性肿瘤细胞减灭术（ids）+以铂类/紫杉醇为基础的术后辅助化疗。不管是pds还是nact+ids，经过初始治疗后，高达80%卵巢癌患者可获得临床缓解，但是约70%患者会在3年内复发，甚至多次复发，总体5年生存率一直徘徊在30%左右，未见明显提升。卵巢癌患者死亡率至今仍没有实质性的下降。因此，试图改善目前卵巢癌患者的结局，则迫切需要创新性的、疗效确切的和可及性的治疗策略，如免疫引导的联合治疗方法。
2、卵巢癌是一种典型的免疫抑制型肿瘤。近年来，随着免疫治疗的兴起，各种免疫疗法也纷纷涉足卵巢癌，力求控制“沉默杀手”的进展，改变卵巢癌获益不佳的临床治疗格局。免疫检查点抑制剂（ici）—程序性死亡受体1（，pd-1及其配体（pd-l1）抑制剂作为最成功的免疫疗法之一，在多种实体瘤中都表现出超越常规疗法的卓越效果。从目前pd-1/pd-l1抑制剂单药治疗卵巢癌的临床研究结果来看，其治疗疗效并不尽如人意，反应率仅为7-15
3、正如所知，在免疫压力下，肿瘤细胞诱导的免疫抑制的机制是极其复杂的。卵巢癌在发生、发展的过程中，通过基因突变、克隆演化和免疫编辑，表达其免疫抑制表型并分泌多种免疫抑制细胞因子，如：toll样受体4（tlr4）、髓样分化因子 88（myd88）、吲哚胺2,3-双加氧酶1（ido1）、pd-l1/pd-1、白细胞介素（il-）6以及芳香烃受体（ahr），诱导了抑制性表型的免疫细胞上调，从而压制免疫细胞功能和免疫应答。紫杉醇是tlr4/myd88/nf-κb信号通路的激活剂，有研究报道，使用tlr4/myd88信号通路阻断剂联合ido抑制剂一方面可抑制紫杉醇诱导介导的免疫抑制，另一方面也可增加紫杉醇的细胞毒作用。这是与单纯免疫治疗截然不同的免疫治疗联合化疗的策略。
4、阿米替林,化学名：n,n-二甲基-3-〔1o，11-二氢-5h-二苯并[a，d]环庚三烯-5-亚基〕-1-丙胺，是一种三环化合物抗抑郁剂，目前未见将其用于抗肿瘤尤其是卵巢癌的报道。
技术实现思路
1、本专利技术的目的之一，就在于提供一种靶向tlr4-md2/myd88信号通路的递送系统，以解决上述问题。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是这样的：一种靶向tlr4-md2/myd88信号通路的递送系统，所述递送系统为肿瘤细胞外泌体装载抗抑郁药，所述肿瘤细胞为卵巢癌细胞。
3、作为优选的技术方案，所述抗抑郁药为阿米替林。
4、作为优选的技术方案，所述抗抑郁药的包封率为36.6 ± 6.7 %，载药量为915.96± 278.96 pg/μg。
5、本专利技术的目的之二，在于提供一种上述递送系统的制备方法，采用的技术方案为，其步骤为：首先提取小鼠id8卵巢癌细胞上清中的外泌体，然后应用电穿孔法将所述抗抑郁药装载进入所提取的外泌体。
6、作为优选的技术方案，所述外泌体的提取方法为沉淀法。
7、作为进一步优选的技术方案，所述外泌体的提取方法，具体包括下述步骤：
8、（1）将小鼠id8卵巢癌细胞接种于细胞培养皿中，细胞在含有外泌体的完全培养基中培养至细胞密度在60～70%时，去除原有培养基，更换为新的不含外泌体的完全培养基；
9、（2）细胞继续培养，收取细胞上清，离心10 min；吸取上清；
10、（3）细胞上清再次离心，确保将细胞或者细胞碎片去除干净；
11、（4）收集上清并用过滤器进行过滤，去除0.22 μm以上的囊泡及其它杂质，分装离心管中；
12、（5）取出离心管，向离心管中加入相应的exoquick-tc试剂，然后混合；
13、（6）将离心管放置于4 ℃冰箱12 h以上；
14、（7）将含有exoquick-tc 试剂的离心管从冰箱中取出，离心；
15、（8）取出离心管，用移液器吸取上清弃去；
16、（9）将离心管再次离心；
17、（10）取出离心管，用微量移液器吸取剩余上清弃去，留在管底的沉淀即为细胞分泌的外泌体；
18、（11）每管加入无菌磷酸盐缓冲液（pbs）重悬外泌体，混合均匀后分装，放置于-80℃冰箱保存备用。
19、作为优选的技术方案，所述应用电穿孔法将所述抗抑郁药装载进入所提取的外泌体的具体方法为：
20、（1）将抗抑郁药溶于无菌磷酸盐缓冲液（pbs）内，配制成抗抑郁药溶液；
21、（2）取外泌体，解冻；
22、（3）将外泌体内加入步骤（1）配置的抗抑郁药溶液及电穿孔缓冲液，然后混合均匀得到混匀液；
23、（4）将步骤（3）所得混匀液加入到电击杯中，放入电击槽；
24、（5）调节电穿孔仪参数，电压：600 v，脉冲长度：90 μs，脉冲次数：5次，脉冲间隔：1s；
25、（6）确认电击参数，点击电穿孔仪“确认键”，完成电穿孔药物装载；
26、（7）取出电击杯，移液器吸取混合液于无菌ep管内，向ep管中加入相应的exoquick-tc试剂，然后混合；
27、（8）将ep管放置于4 ℃冰箱12 h以上；
28、（9）将ep管缓慢地从冰箱中取出，多次离心、取上清液，留在管底的沉淀即为外泌体装载抗抑郁药产品。
29、本专利技术的目的之三，在于提供一种上述的递送系统在制备治疗卵巢癌的靶向药物中的应用。
30、本申请的专利技术人通过大量研究发现，阿米替林阿米替林可靶向阻断tlr4-md2/myd8信号通路，逆转肿瘤免疫逃逸和紫杉醇介导的生存应答，从而用于卵巢癌的免疫治疗。
31、与现有技术相比，本专利技术的优点在于：本专利技术的外泌体递送载体能够包载抗抑郁药物，是一种同时具有靶向、稳定性好、改善肿瘤免疫微环境的外泌体递药系统，本专利技术将抗抑郁药封装到肿瘤细胞外泌体中，通过细胞摄取内吞机制将载药外泌体有效内在化，靶向增加其在肿瘤中的渗透性和累积量，有效提高生物利用率，降低毒副反应。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种靶向TLR4-MD2/MyD88信号通路的递送系统，其特征在于，所述递送系统为肿瘤细胞外泌体装载抗抑郁药，所述肿瘤细胞为卵巢癌细胞。
2.根据权利要求1所述的递送系统，其特征在于，所述抗抑郁药为阿米替林。
3. 根据权利要求1所述的递送系统，其特征在于，所述抗抑郁药的包封率为36.6 ±6.7 %，载药量为915.96 ± 278.96 pg/μg。
4.权利要求1-3任一项的递送系统的制备方法，其特征在于，其步骤为：首先提取小鼠ID8卵巢癌细胞上清中的外泌体，然后应用电穿孔法将所述抗抑郁药装载进入所提取的外泌体。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述外泌体的提取方法为沉淀法。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述外泌体的提取方法，具体包括下述步骤：
7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述应用电穿孔法将所述抗抑郁药装载进入所提取的外泌体的具体方法为：
8.权利要求1-3任一项的递送系统在制备治疗卵巢癌的靶向药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种靶向tlr4-md2/myd88信号通路的递送系统，其特征在于，所述递送系统为肿瘤细胞外泌体装载抗抑郁药，所述肿瘤细胞为卵巢癌细胞。
2.根据权利要求1所述的递送系统，其特征在于，所述抗抑郁药为阿米替林。
3. 根据权利要求1所述的递送系统，其特征在于，所述抗抑郁药的包封率为36.6 ±6.7 %，载药量为915.96 ± 278.96 pg/μg。
4.权利要求1-3任一项的递送系统的制备方法，其特征在于，其步骤为：首先提取小鼠id...
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。