【技术实现步骤摘要】
本申请涉及分离、制备或纯化dna或rna的方法领域，特别是涉及一种石蜡包埋样本核酸免提取试剂、配制及使用方法。
技术介绍
1、随着分子生物学相关技术的深入研究，针对ffpe(石蜡包埋样本)样本无法获得较高质量基因组dna及rna等方面的难题也逐渐得到解决。为了捕获高质量核酸和使ffpe样本的破坏程度降到最低从而衍生出无毒或低毒型脱蜡试剂，如：中国专利申请cn113957066a将二甲苯替换为无毒的二甲基硅油；中国专利申请cn115322988a将二甲苯替换为十六烷异构体，保证了ffpe样本中的组织和提取效果不受影响，且提高了实验的安全性。
2、同时为了提高核酸得率和缩短提取过程使用的时间，中国专利申请cn113584019a利用脱蜡试剂把ffpe样本进行脱蜡后，经高速离心将组织沉淀，去除液体得到无蜡包埋的组织碎片，再使用裂解液和长时间的高温消化组织，后经磁珠结合、洗涤纯化得到核酸；中国专利申请cn113088515a则是在离心沉淀后将下层液体转移至新容器中在通过磁珠法得到核酸。综合上看，两者目的都是保证磁珠与核酸结合时不受含有石蜡的脱蜡试剂影响，不足之处是面对量少的ffpe样本时易造成组织碎片和核酸的损失。
3、为解决上述问题，中国专利cn111057704b将样本脱蜡、组织裂解和dna结合在一步中完成，操作步骤为在石蜡样本中加入脱蜡裂解结合液，70℃孵育1h以上期间需15min混匀一次，再通过磁珠法及洗涤后得到纯化后的核酸，其解决了脱蜡液存在时磁珠对核酸吸附的影响。不足之处在于磁珠不能完全将溶液中的核酸
4、通过上述可知，现有技术在提取核酸时往往是在脱蜡、组织消化后，弃置脱蜡液或保留组织消化液的方式保留核酸，再经过磁珠法并反复洗涤对核酸进行纯化，过程中导致核酸丢失。因此，为解决上述问题亟需一种用于穿刺活检ffpe样本中核酸极大程度减少损失和操作简单的快速释放核酸免提取试剂。
技术实现思路
1、本专利技术提出一种用以免除磁珠提取法的、无需多次洗涤纯化即可获取组织核酸的石蜡包埋样本核酸免提取试剂，基于所述试剂，本专利技术还公开了一种石蜡包埋样本核酸免提取试剂配制方法及使用方法。
2、本专利技术通过以下技术方案实现的：
3、一种石蜡包埋样本核酸免提取试剂，包括：脱蜡溶液和组织消化液；
4、所述脱蜡溶液包括：石蜡油、中级脂肪酸脂；
5、所述组织消化液包括：离子型表面活性剂、糖醇、酸碱平衡溶液；
6、所述脱蜡溶液包括：石蜡油20～70v/v％，中级脂肪酸脂30～80v/v％；
7、所述离子型表面活性剂为脱氧胆酸钠和/或十二烷基硫酸钠中的一种或组合。
8、进一步的，所述中级脂肪酸脂为：癸酸乙酯。
9、进一步的，所述脱蜡溶液包括：所述石蜡油含量为40～50v/v％；所述癸酸乙酯含量为50～60v/v％。
10、进一步的，所以组织消化液包括：
11、脱氧胆酸钠含量为0.2～4w/v％；十二烷基硫酸钠含量为0.0.5～0.8w/v％；糖醇含量为5～30w/v％；所述酸碱平衡溶液的ph值为8.0～9.0。
12、进一步的，所述糖醇为l-树胶糖醇；所述酸碱平衡溶液为tris-decp水溶液。
13、进一步的，所述组织消化液包括：
14、脱氧胆酸钠含量为0.2～0.8w/v％；十二烷基硫酸钠含量为0.05～0.4w/v％；糖醇含量为5～20w/v％，；tris含量为0.2w/v％；余量为decp水。
15、进一步的，所述脱蜡溶液与所述组织消化液的容积比为1.8：1～3.5：1。
16、一种石蜡包埋样本核酸免提取试剂配制方法，包括以下步骤：
17、将石蜡油与癸酸乙酯搅拌混合，形成脱蜡溶液；
18、称取指定质量的脱氧胆酸钠、十二烷基硫酸钠、l-树胶糖醇、tris溶解于decp水中，搅拌均匀，滴定溶液至目标ph值后定容至指定容量，形成组织消化液。
19、一种石蜡包埋样本核酸免提取试剂使用方法，包括以下步骤：
20、将石蜡包埋样本置于试管内，并加入脱蜡溶液，震荡试管至样本外层石蜡溶解至脱蜡溶液中，静置至样本沉淀至脱蜡溶液底部；
21、向试管中加入组织消化液，旋涡混匀，至样本完全消化于下层的组织消化液内；
22、温育组织消化液。
23、进一步的，所述温育包括以下步骤：
24、恒温70℃温育30分钟后，恒温100℃温育5分钟，静置直至溶液温度为15℃～30℃
25、本专利技术的有益效果在于：
26、本专利技术公开的石蜡包埋样本免提取试剂中的脱蜡溶液通过石蜡油和、癸酸乙酯对石蜡包埋样本进行脱蜡，且能有效地溶解样本的蜡层；
27、组织消化液通过脱氧胆酸钠、十二烷基硫酸钠破坏样本的细胞结构、分离dna与蛋白质；糖醇保护组织消化液，减少组织消化液的蒸发、保证液体在100摄氏度及以上时液体的稳定性；其中，组织消化液中低含量的十二烷基硫酸钠能增加组织消化能力，使样本中各种抑制物充分变性、降低抑制物干扰能力，提升了测试结果的准确性；
28、样本脱蜡后无需单独转移组织消化液即可将组织中的细胞裂解释放核酸，也无需通过磁珠法提取核酸，避免了现有技术中通过转移液体、反复离心或洗涤的操作造成核酸丢失、污染的问题，降低核酸损耗量；
29、本专利技术公开的所述试剂配制、使用方法简单，操作成本低，反应耗时短，能有效节省实验成本。
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1.一种石蜡包埋样本核酸免提取试剂，其特征在于，包括：脱蜡溶液和组织消化液；
2.根据权利要求1所述的石蜡包埋样本核酸免提取试剂，其特征在于，所述中级脂肪酸脂为：癸酸乙酯。
3.根据权利要求2所述的石蜡包埋样本核酸免提取试剂，其特征在于，所述脱蜡溶液包括：所述石蜡油含量为40～50v/v％；所述癸酸乙酯含量为50～60v/v％。
4.根据权利要求1所述的石蜡包埋样本核酸免提取试剂，其特征在于，所以组织消化液包括：
5.根据权利要求4所述的石蜡包埋样本核酸免提取试剂，其特征在于，所述糖醇为L-树胶糖醇；所述酸碱平衡溶液为Tris-DECP水溶液。
6.根据权利要求5所述的石蜡包埋样本核酸免提取试剂，其特征在于，所述组织消化液包括：
7.根据权利要求1所述的石蜡包埋样本核酸免提取试剂，其特征在于，所述脱蜡溶液与所述组织消化液的容积比为1.8：1～3.5：1。
8.一种石蜡包埋样本核酸免提取试剂配制方法，其特征在于，包括以下步骤：
9.一种石蜡包埋样本核酸免提取试剂使用方法，其特征在于，包括
10.根据权利要求9所述的石蜡包埋样本核酸免提取试剂使用方法，其特征在于，所述温育包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种石蜡包埋样本核酸免提取试剂，其特征在于，包括：脱蜡溶液和组织消化液；
2.根据权利要求1所述的石蜡包埋样本核酸免提取试剂，其特征在于，所述中级脂肪酸脂为：癸酸乙酯。
3.根据权利要求2所述的石蜡包埋样本核酸免提取试剂，其特征在于，所述脱蜡溶液包括：所述石蜡油含量为40～50v/v％；所述癸酸乙酯含量为50～60v/v％。
4.根据权利要求1所述的石蜡包埋样本核酸免提取试剂，其特征在于，所以组织消化液包括：
5.根据权利要求4所述的石蜡包埋样本核酸免提取试剂，其特征在于，所述糖醇为l-树胶糖醇；所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：操利超，史招伟，巴颖，张核子，卢晓萍，陆世家，
申请(专利权)人：深圳核子华曦医学检验实验室，
类型：发明
国别省市：
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