【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及蛋白质亚单位疫苗，其包含来自严重急性呼吸综合征冠状病毒2(sars-cov-2)的至少一种变体的至少一种抗原，以及可选的至少一种佐剂和至少一种免疫刺激剂。本专利技术还涉及所述疫苗用于产生针对sars-cov-2的至少一种变体的免疫原性和/或保护性免疫应答的用途，以及包含一剂或多剂所述疫苗的试剂盒。
技术介绍
1、sars-cov-2是一种携带单链正义rna基因组(约30kb)的包膜病毒，属于冠状病毒科乙型冠状病毒属。病毒rna编码4种结构蛋白(包括刺突蛋白(s)、包膜蛋白(e)、膜蛋白(m)和核衣壳蛋白(n))、16种非结构蛋白和9种辅助蛋白。s糖蛋白由胞外结构域(可加工成s1和s2亚单位)、跨膜结构域和胞内结构域组成。与sars-cov类似，sars-cov-2通过s1亚单位内的受体结合结构域(rbd)与人血管紧张素转换酶2(ace2)结合，以促进进入宿主细胞，然后通过s2亚单位介导膜融合。
2、开发安全有效的covid-19疫苗并不容易，但疫苗的制造、分销和管理也可能面临巨大的挑战，特别是在发展中国家以及如果必须注射疫苗的情况下，因为需要冷链来保持其稳定性和活性。针对covid-19的多种疫苗策略也在深入研究中，其中刺突蛋白是主要目标。这些疫苗由不同的平台生产：rna、dna、重组蛋白、基于病毒运载体、病毒样颗粒(vlp)、减毒活病毒和灭活病毒。这些不同类型的候选疫苗面临着与开发、制造、储存和分销进行大规模疫苗接种相关的各种挑战。
3、亚单位疫苗或重组蛋白疫苗使用完整蛋白(例如刺突蛋白)
4、然而，亚单位疫苗的主要缺点是用于引发免疫应答的抗原可能缺乏某类病原体所共有的称为病原体相关分子模式的分子结构。这些结构可以被免疫细胞读取并识别为危险信号，因此它们的缺失可能会导致免疫应答较弱。此外，由于这些类型的抗原不感染细胞，因此亚单位疫苗主要专门触发抗体介导的免疫应答。同样，这意味着该免疫应答可能弱于其他类型的疫苗。为了克服这个问题，亚单位疫苗有时与佐剂一起递送。因此，亚单位疫苗在制剂中往往需要佐剂以增加免疫原性。
5、已经开发或研究了若干种佐剂和免疫刺激剂，例如铝盐、水包油乳剂(mf59、as03和af03)、病毒体和as04作为佐剂，以及qs-21或其他皂苷、单磷酰脂a(mpla)、cpg(odn)作为免疫刺激剂。然而，选择合适的佐剂有助于在先天水平和适应性水平上促进针对目标病原体的适当免疫应答，从而在保持安全性的同时引发保护性免疫，这一点至关重要，但并不简单。选择错误的佐剂可能会导致特定的疫苗抗原不能胜任。因此，疫苗抗原的选择必须考虑佐剂的选择，以避免丢弃潜在有效的候选疫苗抗原。开发安全的疫苗同时获得适当的功效仍然是最重要的需求。
6、因此，需要针对sars-cov-2的安全且有效的新的疫苗，特别是使免疫原性增强的疫苗。
技术实现思路
1、一般定义
2、必须注意的是，除非上下文另有明文说明，否则如本文所使用的单数形式“一”，“一个”和“该”包括复数指代。此外，除非另有说明，否则一系列元素之前的术语“至少”应理解为指该系列中的每个元素。本领域技术人员将认识到或能够仅使用常规实验来确定本文描述的专利技术的具体实施方式的许多等同物。这样的等同物旨在涵盖在本专利技术中。
3、当涉及给定的量或数量时，术语“约”表示数字可以在其指定值附近±20％之间变化。优选地，“约”意指其值附近±15％，更优选地，“约”意指其值附近±10％、8％、6％、5％、4％、3％、2％，甚至“约”意指其值附近±1％，按照该优先顺序。
4、如本文所使用的，多个引用的元素之间的连接术语“和/或”被理解为涵盖单独的和组合的选项。例如，当两个元素通过“和/或”连接时，第一选项指的是在没有第二元素的情况下第一元素适用。第二选项是指在没有第一元素的情况下第二元素适用。第三选项是指第一元素和第二元素一起适用。这些选项中的任何一个都被理解为落入该含义内，并且因此满足如本文所使用的术语“和/或”的要求。多于一个选项同时适用也被理解为落入该含义内，并且因此满足术语“和/或”的要求。
5、在通篇说明书以及权利要求中，除非上下文另有要求，否则词语“包含(comprise、comprises和comprising)”及变形将被理解为暗示包括所称的整体或步骤、或整体或步骤的组，但不排除任何其他整体或步骤、或整体或步骤的组。当在本文中使用时，术语“包含”可以被术语“含有”或“包括”替代，或者有时当在本文中使用时被术语“具有”替代。任何前述术语(包含、含有、包括、具有)，无论何时在本专利技术的方面或实施方式的上下文中使用时，都可以用术语“由......组成”替代，尽管是次优选的。
6、当本文使用“由......组成”时，排除权利要求元素中未指定的任何元素、步骤或成分。当在本文中使用时，“基本上由......组成”并不排除不会实质上影响权利要求的基本特征和新颖特征的材料或步骤。
7、本文中的术语“亚型”可以替换为“物种”。它包括任何严重急性呼吸综合征冠状病毒(即sars-cov-2)的株、分离株、进化枝、谱系(lineage)、系(linage)和/或变体。术语“株”、“进化枝”、“谱系或系”、“分离株”和/或“变体”是本领域技术人员熟知的技术术语，涉及微生物的分类学，即，涉及所有表征为科、属、种、株的等级顺序的微生物。科成员的标准是其系统发育关系，属包括具有共同特征的所有成员，而种则被定义为构成复制谱系并占据特定生态位的多原则分类。术语“株”或“进化枝”描述了与其他微生物具有共同特征(如基本形态或基因组结构和组织)但在生物学特性(如宿主范围、组织嗜性、地理分布、减毒或致病性)上有所不同的一种微生物(在本专利技术中即病毒)。在本专利技术中，术语“变体”描述了复制并将一个或多个新突变引入其基因组中从而导致与原始病毒的差异的微生物(在本专利技术中即病毒)。术语“谱系”或“系”描述了衍生自共同祖先的一组病毒序列，这些序列与流行病学事件相关，例如，病毒被引入到不同的地理区域，并有进一步传播的证据。谱系旨在捕捉大流行的即将来临，并具有适合基因组流行病学监测和暴发调查的细粒度分辨率。例如，rambaut a.et al.a dynamic nomenclature proposal for sars-cov-2lineages toassist genomic epidemiology.nat microbiol.2020；5(11):1403-1407中描述了sars-cov-2谱系命名法。因此，“严重急性呼吸综合征冠状病毒2(sars-cov-2)的至少一种变体”是指sars-cov-2病毒的至少一种变体、毒株、分离株、谱系或系、和/或进化枝。优选地，术语“变体”与之前的定义一致，本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种蛋白质亚单位疫苗，包含至少一种由两个单体组成的抗原，其中两个单体均包含来自严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)的刺突蛋白的受体结合结构域(RBD)，其中所述两个单体是单个多肽的一部分，并且彼此化学结合，可选地通过接头彼此化学结合，从而形成融合二聚体，其中第一RBD单体衍生自第一SARS-CoV-2系，第二RBD单体衍生自不同的第二SARS-CoV-2系。
2.根据权利要求1所述的蛋白质亚单位疫苗，其中所述严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)系选自由以下组成的组：Wuhan-Hu-1肺炎病毒分离株(GenBank登录号：MN908947)、Linage B.1.1.28(巴西变体)、Linage B.1.351(南非变体)、Linage B.1.427或Linage B.1.429(加利福尼亚变体)、Linage B.1.617(印度变体)、Linage B.1.1.7(英国变体)、Linage B.1.617.2或G/478K.V1(德尔塔变体)或Linage B.1.1.529或GR/484A(奥密克戎变体)或其任意组合。p>
3.根据权利要求1或2所述的蛋白质亚单位疫苗，其中所述融合二聚体的第一单体衍生自Linage B.1.351(南非SARS-CoV-2变体)，所述融合二聚体的第二单体衍生自LinageB.1.1.7(英国SARS-CoV-2变体)。
4.根据权利要求3所述的蛋白质亚单位疫苗，其中所述融合二聚体由SEQ ID NO：5组成。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的蛋白质亚单位疫苗，其中所述蛋白质亚单位疫苗包含每剂总量为5至50μg的抗原。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的蛋白质亚单位疫苗，其进一步至少包含佐剂。
7.根据权利要求6所述的蛋白质亚单位疫苗，其中所述佐剂包含约10至60mg/ml角鲨烯、1至6mg/ml聚山梨酯80、1至6mg/ml脱水山梨糖醇三油酸酯、0.5至6mg/ml柠檬酸钠和0.01至0.5mg/ml柠檬酸。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的蛋白质亚单位疫苗，其中所述蛋白质亚单位疫苗还包含单磷酰脂A(MPLA)和/或C92O46H148(QS-21)作为免疫刺激剂。
9.用于在有需要的对象中产生针对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)病毒的至少一个系的免疫原性和/或保护性免疫应答的根据权利要求1至8中任一项所述的蛋白质亚单位疫苗。
10.根据权利要求9所述的用途的蛋白质亚单位疫苗，其中所述蛋白质亚单位疫苗以单剂量或多剂量、优选以两剂量施用于所述有需要的对象。
11.根据权利要求9或10所述的用途的蛋白质亚单位疫苗，其中所述蛋白质亚单位疫苗作为加强剂施用于所述对象。
12.一种试剂盒，包含至少一剂、优选两剂或更多剂根据权利要求1至8中任一项所述的蛋白质亚单位疫苗。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种蛋白质亚单位疫苗，包含至少一种由两个单体组成的抗原，其中两个单体均包含来自严重急性呼吸综合征冠状病毒2(sars-cov-2)的刺突蛋白的受体结合结构域(rbd)，其中所述两个单体是单个多肽的一部分，并且彼此化学结合，可选地通过接头彼此化学结合，从而形成融合二聚体，其中第一rbd单体衍生自第一sars-cov-2系，第二rbd单体衍生自不同的第二sars-cov-2系。
2.根据权利要求1所述的蛋白质亚单位疫苗，其中所述严重急性呼吸综合征冠状病毒2(sars-cov-2)系选自由以下组成的组：wuhan-hu-1肺炎病毒分离株(genbank登录号：mn908947)、linage b.1.1.28(巴西变体)、linage b.1.351(南非变体)、linage b.1.427或linage b.1.429(加利福尼亚变体)、linage b.1.617(印度变体)、linage b.1.1.7(英国变体)、linage b.1.617.2或g/478k.v1(德尔塔变体)或linage b.1.1.529或gr/484a(奥密克戎变体)或其任意组合。
3.根据权利要求1或2所述的蛋白质亚单位疫苗，其中所述融合二聚体的第一单体衍生自linage b.1.351(南非sars-cov-2变体)，所述融合二聚体的第二单体衍生自linageb.1.1.7(英国sars-cov-2变体)。
4.根据权利要求3...
【专利技术属性】
技术研发人员：安东尼奥·巴雷罗·巴斯克斯，安东尼奥·普雷那菲塔·阿马戈斯，劳拉·费雷尔·索勒，路易斯·冈萨雷斯·冈萨雷斯，艾斯特·普伊格维特·莫拉斯，乔迪·帕尔马达·科洛默，玛利亚·特蕾莎·普拉特·卡巴尼亚斯，卡门·加里加·阿尔西纳，
申请(专利权)人：海博莱科学有限公司，
类型：发明
国别省市：
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