【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种ii-key杂合体及其在制备肿瘤疫苗中的应用。
技术介绍
1、慢性人乳头瘤病毒(human papillomavirus，hpv)是一种无包膜环状dna病毒，可引起人类的上皮细胞的增值性病变。根据病毒核苷酸序列的变异将人乳头瘤病毒分为100多个型别，不同型别的病毒引起不同的病变。hpv6、hpv11型等为低危型，可引起泌尿生殖道良性病变。hpv16、hpv18、hpv31、hpv33、hpv45、hpv58等为高危型，感染导致多种疾病，如宫颈癌、肛门癌等。宫颈癌是女性发病率和死亡率较高的恶性肿瘤，对女性的健康具有极大的危害。我国女性宫颈癌患者的数量呈逐年上升的趋势，发病率居中国女性恶性肿瘤的第二位。
2、her-2/neu由原癌基因erbb-2/neu表达，是人类表皮生长因子受体家族的成员，是具有内源性蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase,ptk)活性的膜受体，包括信号肽、胞外区、跨膜区、胞内区四个部分，编码一种相对分子质量为185000的跨膜蛋白。目前发现的表皮生长因子受体族包括四个分型：her1(egfr)；her2；her3(erbb-3)；her4(erbb-4)，her1、her2、her4拥有相似的分子结构和结构域，它们不同的配体通过级联传导影响肿瘤的生物学特性，包括细胞增殖、凋亡、迁移和分化。her-2/neu基因位于17q21染色体上，作为癌基因表达在细胞膜上。her-2/neu过度表达时，可引起组织血管生成速度快，进而导致肿瘤的生长迅速，恶性
3、mhcⅱ类分子是由总体结构相似的α链和β链非共价结合的异二聚体，α链略重于β链，只存在于巨噬细胞、树突状细胞、b淋巴细胞等抗原呈递细胞表面以及胸腺上。mhcⅱ类分子的重链和轻链首先在内质网中组装成三聚体，其抗原肽结合区结合约15个氨基酸多肽后蛋白酶水解其γ链，mhcⅱ类分子与抗原肽结合形成稳定的复合物后转运到细胞表面，最后呈递给cd4+t细胞，引发细胞免疫。
4、恒定链(invariant china,ii)分子的结构由三个部分组成，从n段到c段依次为胞浆区(cytoplasmic domain)、跨膜区(transmembrane domain)以及内质网腔区(lumenaldomain)。ii是ⅱ型跨膜蛋白，在内质网中其n端位于细胞质内，而c端在内质网腔中；位于细胞表面时，其n端在细胞质中，c端在细胞膜外。ii是mhcⅱ类分子的重要伴侣蛋白分子，在mhcⅱ类分子的三聚体形成，九聚体组装和参与机体呈递外源性抗原肽，将外源性抗原转运细胞膜表面的过程中发挥着重要作用。在抗原递呈细胞内主要参与主要组织相容性复合体(mhc)ⅱ类分子与抗原肽复合物的装配，其关键活性基团(ii-key)在此过程中发挥重要作用。
技术实现思路
1、本专利技术的术语和声明：
2、1、如本文所用，冠词“一个”“一种”和“所述”：除非以其它方式明确地限定到一个(种)对象，否则包括复数的对象。
3、2、如本文所用，术语“包含”、“包括”、“具有”、“具有”、“可以”、“含有”及其变化形式的意义是不排除另外组成或结构的可能性的开放式连接词语或术语。
4、3、如本文所用，术语“佐剂”指添加至本文所描述的疫苗中的以增强抗原的免疫原性的任何分子、元素、物质。
5、4、如本文所述，术语“抗原”指由接种目标的免疫系统识别且诱导免疫反应的物质。
6、5、如本文所述，术语“抗体”指机体由于抗原的刺激而产生的具有保护作用的蛋白质。
7、6、如本文所述，术语“疫苗”指在药学上可接受的载体中(例如佐剂)包含抗原或免疫原性物质的组合物。
8、7、如本文所用，术语“蛋白质”：是指至少两个共价连接的氨基酸，其包括蛋白质、多肽、寡肽和肽。该术语还包括蛋白质的表达后修饰，如糖基化、乙酰化、磷酸化等。该术语还包括指对天然蛋白质或多肽的氨基酸序列的修饰如缺失、替换、插入后所得的变体。
9、8、如本文所用，术语“氨基酸”：包含天然氨基酸、合成氨基酸、以及以类似于天然氨基酸的方式起作用的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然氨基酸是由遗传密码编码的氨基酸。氨基酸类似物是指具有与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。氨基酸在本文中可以由其通常已知的三字母符号或由iupac-iub生物化学命名法委员会(biochemicalnomenclature commission)所推荐的单字母符号来提及。
10、9、如本文所用，术语“位或位置”：是指蛋白质序列中的位置。在大多数情况下，除非另有说明，位置编号(其在下文中更充分地讨论)是相对于成熟蛋白质或酶(例如，排除信号肽)的第一个氨基酸的。
11、10、如本文所用，术语修饰：是指多肽序列中的氨基酸取代、插入、和/或缺失或对与蛋白质化学连接的部分的改变。
12、11、如本文所用，术语载体：是指可以在宿主细胞中自主复制的载体，其优选为多拷贝载体。此外，载体通常具有用于选择转化体的抗生素抗性基因等标志物。此外，载体可以具有用于表达引入的基因的启动子和/或终止子。载体可以是例如病毒载体，源自细菌质粒的载体，源自酵母质粒的载体，源自噬菌体的载体，粘粒，噬菌粒等。基因工程载体是指使得目的基因能够在细胞中表达的载体，并通常为包括编码蛋白质或多肽的多核苷酸并且可操作地连接至表达控制序列的直链或环状dna分子。
13、12、如本文所用，术语“过表达”是指基因上调表达，即该基因被过度的转录、翻译，终基因表达产物超过正常水平。
14、13、如本文所用，术语“残基”是指在蛋白质的序列中，氨基酸之间的氨基和羧基脱水成键，而剩下的没有脱水成键的基团就叫残基。
15、本专利技术技术方案包括：
16、一方面，本专利技术提供了一种ii-key杂合体。
17、所述ii-key杂合体包括：
18、(1)ii蛋白的lrmk残基；
19、(2)her-2/neu的mhc ii类表位；
20、(3)可选的中间化学结构；
21、所述ii蛋白的lrmk残基的氨基酸序列如seq id no:1所示；
22、所述her-2/neu的mhc ii类表位的氨基酸序列如seq id no:2所示；
23、所述的中间化学结构共价连接her-2/neu的mhc ii类表位的n末端和ii蛋白lrmk残基的c末端元件。
24、可选择的，所述的ii-key杂合体包括：
2本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种Ii-Key杂合体，其特征在于，所述Ii-Key杂合体包括：
2.根据权利要求1所述的Ii-Key杂合体，其特征在于，所述Ii蛋白的LRMK残基与HER-2/neu的MHC II类表位的N末端连接。
3.一种核酸，其特征在于，所述核酸编码权利要求1-2任一项所述的Ii-Key杂合体。
4.一种疫苗，其特征在于，所述的疫苗结构性和/或组成性地包含权利要求1-2任一项所述的Ii-Key杂合体和/或权利要求3所述的核酸。
5.根据权利要求4所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗还包括佐剂。
6.根据权利要求5所述的疫苗，其特征在于，所述佐剂选自DDA、MPL、氢氧化铝、磷酸铝、磷酸铝钾、脂蛋白、IL-12、GM-CSF中的至少一种。
7.根据权利要求6所述的疫苗，其特征在于，所述佐剂为GM-CSF。
8.权利要求1-2任一项所述的Ii-Key杂合体和/或权利要求3所述的核酸在制备预防和/或治疗HER-2/neu过表达癌症的疫苗中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述HER
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述HER-2/neu过表达癌症为宫颈癌。
11.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物中包括权利要求1-2任一项所述的Ii-Key杂合体和/或权利要求3所述的核酸。
12.一种预防和/或治疗宫颈癌的疫苗，其特征在于，所述疫苗中包括权利要求1-2所述的Ii-Key杂合体和/或权利要求3所述的核酸。
...【技术特征摘要】
1.一种ii-key杂合体，其特征在于，所述ii-key杂合体包括：
2.根据权利要求1所述的ii-key杂合体，其特征在于，所述ii蛋白的lrmk残基与her-2/neu的mhc ii类表位的n末端连接。
3.一种核酸，其特征在于，所述核酸编码权利要求1-2任一项所述的ii-key杂合体。
4.一种疫苗，其特征在于，所述的疫苗结构性和/或组成性地包含权利要求1-2任一项所述的ii-key杂合体和/或权利要求3所述的核酸。
5.根据权利要求4所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗还包括佐剂。
6.根据权利要求5所述的疫苗，其特征在于，所述佐剂选自dda、mpl、氢氧化铝、磷酸铝、磷酸铝钾、脂蛋白、il-12、gm-csf中的至少一种。
7.根据权...
【专利技术属性】
技术研发人员：请求不公布姓名，
申请(专利权)人：优峰北京生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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