Xpert MTB/RIF在检测诺卡菌中应用及方法技术

技术编号：41252897 阅读：9 留言：0更新日期：2024-05-10 00:00

本发明专利技术公开Xpert MTB/RIF在检测诺卡菌中应用及方法，将已有的结核分枝杆菌检测的成品试剂盒Xpert MTB/RIF转用于诺卡菌的检测，从而能够尽早明确病原，合理使用抗生素，降低诺卡菌病死亡率。这种Xpert MTB/RIF在检测诺卡菌中应用，采用Xpert MTB/RIF试剂盒检测，当只有C探针扩增阳性时判定为诺卡菌感染。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医学的，尤其涉及xpert mtb/rif在检测诺卡菌中应用，以及检测方法。

技术介绍

1、genexpert mtb/rif（简称xpert mtb/rif）是一种用于结核病和耐药结核病的快速诊断的分子诊断试剂盒。它利用实时聚合酶链反应（pcr）技术，可以在短短几小时内检测结核分枝杆菌（mtb）和利福平（rif）耐药基因。这种快速诊断方法可以帮助医生更快速地确定患者是否感染了结核病，以及该病菌是否对利福平产生了耐药性，从而能够更快速地采取治疗措施。xpert mtb/rif已被世界卫生组织（who）推荐作为结核病诊断的重要工具，尤其适用于资源匮乏地区和急需快速诊断的情况。

2、xpert mtb/rif检测原理为：在rpob基因的81bp长度区域设计5对引物和探针（探针a-e）并进行扩增，当至少两个探针扩增呈阳性时，判断为结核分枝杆菌阳性。

3、诺卡菌属于一类罕见但潜在致命的细菌，可以引起一种称为诺卡菌病（nocardiosis）的感染。诺卡菌通常存在于土壤、水和有机物中，人们可以通过呼吸道、皮肤软组织侵入，导致感染。诺卡菌病的严重后果可能包括：

4、1. 肺部感染：最常见的感染形式是肺部感染，尤其是对免疫系统较弱的个体，如hiv感染者或接受免疫抑制治疗的患者。严重的肺部感染可能导致呼吸困难、肺部脓肿和呼吸衰竭；

5、2. 神经系统感染：诺卡菌也可能侵袭中枢神经系统，导致脑膜炎、脑脓肿和脊髓脓肿等严重并发症。这可能导致头痛、意识障碍、神经功能障碍等症状；

6、3. 皮肤感染：诺卡菌也可能引起皮肤和软组织感染，导致皮肤溃疡、脓肿和组织坏死等症状；

7、4. 全身性播散感染：对于免疫系统受损的患者，诺卡菌可能引起全身性播散感染，影响多个器官系统，导致严重的全身症状和器官功能衰竭。

8、诺卡菌(nocardia sp.)是人致病革兰阳性需氧放线菌，生长缓慢，存在于土壤与环境中，经呼吸道与皮肤软组织侵入，导致呼吸系统感染、皮肤软组织感染，在部分免疫能力低下人群中，可由肺部或软组织等原发病灶经血行播散，引起其他部位感染，如脑组织、骨、心脏、肾脏、关节等。近年来，诺卡菌病(nocardiosis)发病率增多，但因其临床不具特异性，影像学与结核或非结核分枝杆菌感染相似，因此诊断和治疗都面临挑战。仅依靠传统的染色涂片与普通培养，检出率低。而对于免疫系统受损的患者，诺卡菌病的严重后果可能会导致危及生命的情况，因此早期诊断和治疗至关重要。

技术实现思路

1、为克服现有技术的缺陷，本专利技术要解决的技术问题是提供了一种xpert mtb/rif在检测诺卡菌中应用，其将已有的结核分枝杆菌检测的成品试剂盒xpert mtb/rif转用于诺卡菌的检测，从而能够尽早明确病原，合理使用抗生素，降低诺卡菌病死亡率。

2、本专利技术的技术方案是：这种xpert mtb/rif在检测诺卡菌中应用，采用xpert mtb/rif试剂盒检测，当只有c探针扩增阳性时判定为诺卡菌感染。

3、还提供了这种xpert mtb/rif在检测诺卡菌中应用的方法，其包括以下步骤：

4、（1）取2倍体积的处理试剂sr加入到样本，涡旋震荡1分钟左右直至样本充分液化，室温静置15分钟，标本类型包括支气管肺泡灌洗液、痰液、脑脊液、胸水、腹水、胃液、脓液、分泌物、尿液、淋巴结及其他组织、pe石蜡包埋组织；

5、（2）吸取2ml处理样品到反应盒；

6、（3）将反应盒放入检测模块系统内执行如下分步骤：

7、（3.1）标本清洗过滤；

8、（3.2）超声裂解；

9、（3.3）dna提纯；

10、（3.4）dna和pcr反应试剂混合；

11、（3.5）进行半巢式实时荧光定量核酸扩增检测；

12、（3.6）当且仅当c探针扩增阳性时，判定为诺卡菌感染，探针c检测的是管家基因rpob上81bp的利福平耐药核心区的518-523密码子。

13、本专利技术采用xpert mtb/rif试剂盒检测，当只有c探针扩增阳性时判定为诺卡菌感染，因此本专利技术是将已有的结核分枝杆菌检测的成品试剂盒xpert mtb/rif转变用途，用于诺卡菌的检测，从而能够尽早明确病原，合理使用抗生素，降低诺卡菌病死亡率。

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【技术保护点】

1.Xpert MTB/RIF在检测诺卡菌中应用，其特征在于：采用Xpert MTB/RIF试剂盒检测，当只有C探针扩增阳性时判定为诺卡菌感染。

2.根据权利要求1所述的Xpert MTB/RIF在检测诺卡菌中应用，其特征在于：所述诺卡菌为以下病原微生物基因组编码区序列：盖尔森基兴诺卡菌、亚洲诺卡菌。

3.根据权利要求1所述的Xpert MTB/RIF在检测诺卡菌中应用，其特征在于：所述诺卡菌为以下病原微生物基因组编码区序列：脓肿诺卡菌。

4.根据权利要求1所述的Xpert MTB/RIF在检测诺卡菌中应用，其特征在于：所述试剂盒的阳性质控品的序列为：GGCACCAGCCAGCTGAGCCAATTCATGGACCAGAACAACCCGCTGTCGGGGTTGACCCACAAGCGCCGACTGTCGGCGCTG。

5.根据权利要求1-3任一项所述的Xpert MTB/RIF在检测诺卡菌中应用的方法，其特征在于：其包括以下步骤：

6.根据权利要求5所述的Xpert MTB/RIF在检测诺卡菌中应用的方法，其特征在于：所述步

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【技术特征摘要】

1.xpert mtb/rif在检测诺卡菌中应用，其特征在于：采用xpert mtb/rif试剂盒检测，当只有c探针扩增阳性时判定为诺卡菌感染。

2.根据权利要求1所述的xpert mtb/rif在检测诺卡菌中应用，其特征在于：所述诺卡菌为以下病原微生物基因组编码区序列：盖尔森基兴诺卡菌、亚洲诺卡菌。

3.根据权利要求1所述的xpert mtb/rif在检测诺卡菌中应用，其特征在于：所述诺卡菌为以下病原微生物基因组编码区序列：脓肿诺卡菌。

4.根据权利要求1所述的xpert mtb/rif在检测诺卡菌中...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹彬，范艳艳，赵建康，鲁炳怀，
申请(专利权)人：中日友好医院中日友好临床医学研究所，
类型：发明
国别省市：

全部详细技术资料下载我是这个专利的主人