一种融合蛋白聚集结构域提升毕赤酵母中外源蛋白活性的新策略制造技术

本发明专利技术公开了一种提高毕赤酵母外源蛋白活性的方法，属于生物工程技术领域。本发明专利技术选择了三种与神经退行性疾病有密切联系的并且可发生聚集的蛋白进行截取，通过构建融合质粒提升了烟酰胺单核苷酸补救合成途径中关键酶NAMPT的转录水平与活性。NAMPT含量在RNA水平有不同程度的提升，其中融合了SUP35截取序列的NAMPT在24小时表达量最高提升3.02倍；在表达该重组质粒56小时后，NAMPT的活性均有不同程度提升，其中融合了TIA1截取序列的NAMPT活性最高提升1.68倍。表明融合已知可聚集蛋白序列在毕赤酵母提升外源蛋白的转录与活性中有应用价值，为提高一些微生物中外源蛋白表达提供了新策略。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种提高毕赤酵母外源蛋白转录与活性的方法，具体涉及一种通过连接一些已知可发生聚集的蛋白中截取的特定序列从而提高毕赤酵母外源蛋白转录与活性的方法，属于生物工程。

技术介绍

1、线粒体等细胞内部的细胞器，可籍由以磷脂双分子层为骨架的细胞膜，将各种酶以及代谢产物限制在一定的空间内，从而有效完成物质及能令的代谢过程。近年来发现在原核和真核细胞中存在另一类形式的蛋白聚集，可自发地凝聚在一起促进细胞中某些的代谢反应。起到在混乱的细胞环境中维持秩序，进而发挥特定的生物学功能。这类蛋白的聚集与许多疾病的发生有着密切的联系，特别是参与一些神经退行性疾病的发生。

2、研究发现这类可发生聚集的蛋白，通常富含特定的氨基酸残基和结构域，通过提供分子间/分子内多价的弱相互作用，来驱动蛋白聚集。通过截取可诱导蛋白聚集的特定多肽序列，与感兴趣的蛋白进行融合，我们发现可以提高某些蛋白和酶的活性。基于此，本专利利用毕赤酵母为底盘细胞，建立了一种促进外源蛋白活性的新策略。

3、毕赤酵母作为重要的工业应用菌株，提升其外源蛋白转录与活性一直是研究的热点与难点。本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种通过融合已知可发生聚集蛋白中截取的特定序列来提高毕赤酵母外源蛋白活性的方法。其特征在于，在毕赤酵母中融合了与神经退行性疾病相关并可以发生聚集的三种蛋白FUS、SUP35、TIA1的截取序列，可以提高烟酰胺单核苷酸补救合成途径中的一个关键酶NAMPT的转录水平与活性；所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ IDNO:4所示。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述外源蛋白包括烟酰胺磷酸核糖转移酶，核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述表达载体包括p PIC9K载体...

【技术特征摘要】

1.一种通过融合已知可发生聚集蛋白中截取的特定序列来提高毕赤酵母外源蛋白活性的方法。其特征在于，在毕赤酵母中融合了与神经退行性疾病相关并可以发生聚集的三种蛋白fus、sup35、tia1的截取序列，可以提高烟酰胺单核苷酸补救合成途径中的一个关键酶nampt的转录水平与活性；所述基因的核苷酸序列如s...

【专利技术属性】
技术研发人员：马文建，周飒，刘羿池，穆佳康，陈洪冉，李博阳，宋宇翾，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：