【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及药物化学领域，特别涉及一种新型抗体偶联药物的合成及应用。
技术介绍
1、抗体偶联药物(antibody-drug conjugate，adc)是由抗体、连接子和小分子通过共价连接组成的治疗剂。抗体偶联药物结合了抗体的高特异性和小分子的高效性，使其在癌症的治疗上取得了巨大的突破。但是由于小分子修饰的局限性，使得抗体偶联药物连接的小分子局限在少数的几个分子上。这不仅限制了偶联的小分子的种类，也限制了抗体偶联药物的治疗范围。核酸类似物是一类天然核苷酸的衍生物，通过对其中部分原子或基团进行生物电子等排体的替换，从而产生化学结构相似的化合物。这些核苷酸类似物可以参与到天然核苷酸在生命体内的合成和代谢过程，从而发挥抗病毒或者抗肿瘤的作用。另外，很多临床应用的化疗药物可以与双链的核酸产生牢固的结合作用，主要包括插入或共价结合两种方式，但核苷酸类似物和与核酸结合的小分子药，由于缺少靶向性，常常引起严重的毒副作用。由于核苷酸类似物和与核酸结合的小分子药缺少适合抗体偶联的基团，无法与抗体连接提高自身靶向性和治疗作用。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于，解决本领域长期存在的，核苷酸类似物和与核酸结合的小分子药普遍缺少适合抗体偶联的基团，导致缺乏靶向性，进一步导致治疗作用较弱且会引起较多副作用的问题，例如，以吉西他滨为代表的核苷酸类似物，由于缺乏靶向性，通常造成严重的血液毒性和骨髓抑制，导致化疗失败；而多柔比星等化疗药除了骨髓抑制的毒性，通常还具有心脏毒性。通过抗体偶联药物的方式提高这
2、为了解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案：
3、一种新型抗体偶联药物，包括核酸与化疗药通过组装形成的核酸纳米结构，以及与所述核酸纳米结构偶联的靶向药。
4、本专利技术设计的新型抗体偶联药物可以不依赖偶联的化学基团搭载上述药物，dar值至少可以达到20(现有技术的极限dar值为8)，极大地提高了药效，降低了制造成本。
5、dna纳米技术利用watson-crick碱基配对的方式将不同的核酸单链组装成纳米结构。这可以为核苷酸类似物和与核酸结合的小分子药的搭载提供广阔的平台。这种纳米结构可以通过磷酸二酯键将多个核苷酸类似物连接到纳米结构中，也可以直接通过能结合核酸的小分子相互结合，并利用纳米结构易于修饰的特点，将其与抗体偶联，制备成一种新型的抗体偶联药物，克服核苷酸类似物和与核酸结合的小分子药不易于修饰和毒副作用的问题。
6、优选的，所述核酸与所述化疗药组装形成所述核酸纳米结构包括插入、共价结合中的一种或多种。
7、优选的，所述化疗药包括核苷酸类似物，和/或具有插入结合双链核酸结构的药物；所述靶向药包括特异性抗体。
8、优选的，所述化疗药包括阿糖胞苷、吉西他滨、曲氟尿苷、碘苷、氟尿嘧啶、氟达拉滨、6-硫基鸟嘌呤、氯法拉滨、克拉屈滨、依托泊苷、多柔比星、米托蒽醌、顺铂、丝裂霉素、长春新碱、博来霉素中的一种或多种；所述靶向药包括西妥昔单抗、曲妥珠单抗、莫罗单抗、利妥昔单抗、阿替利珠单抗、阿维鲁单抗、伊沙妥昔单抗、tafasitamab、polatuzumab、吉妥珠单抗中的一种或多种。
9、其中，所述核苷酸类似物包括阿糖胞苷、吉西他滨、曲氟尿苷、碘苷、氟尿嘧啶、氟达拉滨、6-硫基鸟嘌呤、氯法拉滨、克拉屈滨中的一种或多种；所述具有插入结合双链核酸结构的药物包括依托泊苷、多柔比星、米托蒽醌、顺铂、丝裂霉素、长春新碱、博来霉素中的一种或多种。
10、在本专利技术一个较佳的实施例中，利用了吉西他滨是天然胞嘧啶衍生物的特点，通过亚磷酰胺合成法，将寡核苷酸链中的胞嘧啶替换为吉西他滨。
11、进一步地，将吉西他滨以磷酸二酯键与其他天然核苷酸共价连接，并将其组装成为正四面体纳米结构。
12、进一步地，将纳米结构与西妥昔单抗偶联，使吉西他滨产生的抗egfr阳性细胞系增殖能力优于普通的吉西他滨与抗体的混合物。
13、进一步地，该抗体偶联药物能抵抗吉西他滨耐药的细胞模型。
14、进一步地，该抗体偶联药物能明显靶向富集egfr阳性的肿瘤部位。
15、在本专利技术另一个较佳的实施例中，利用了阿糖胞苷是天然胞嘧啶衍生物的特点，通过亚磷酰胺合成法，将寡核苷酸链中的胞嘧啶替换为阿糖胞苷。
16、进一步地，将阿糖胞苷以磷酸二酯键与其他天然核苷酸共价连接，并将其组装成为正四面体纳米结构。
17、进一步地，将纳米结构与曲妥珠单抗偶联，使阿糖胞苷产生的抗her2阳性细胞系增殖能力优于普通的阿糖胞苷与抗体的混合物。
18、在本专利技术一个较佳的实施例中，利用了多柔比星有插入结合双链核酸的特点，通过常温孵育，将多柔比星搭载到合成的正四面体核酸纳米结构中。
19、进一步地，将该结合物与利妥昔单抗偶联，增强多柔比星抑制cd20阳性肿瘤细胞的能力。
20、在本专利技术另一个较佳的实施例中，利用了米托蒽醌有插入结合双链核酸的特点，通过常温孵育，将米托蒽醌搭载到合成的正四面体核酸纳米结构中。
21、进一步地，将该结合物与吉妥珠单抗偶联，增强米托蒽醌抑制cd33阳性肿瘤细胞的能力。
22、优选的，所述核酸纳米结构包括含有叠氮基团的dna四面体。
23、由寡核苷酸链通过碱基互补配对组装，得到直径小于等于50nm的正四面体结构。
24、一种如权利要求1所述新型抗体偶联药物的制备方法，包括如下步骤：
25、a、靶向药的纯化与偶联：将所述靶向药超滤洗脱和纯化，之后与偶联剂共孵育，获得产物a；
26、b、核酸纳米结构的合成：通过共价结合时，将所述化疗药与所述核酸投入到组装液中，通过加热退火反应，获得产物b；通过插入结合时，将所述核酸投入到组装液中，通过加热退火反应，获得产物b1，之后将所述产物b1与所述化疗药共孵育，获得产物b；
27、c、新型抗体偶联药物的合成：将所述产物a与所述产物b等摩尔浓度进行混合，进行孵育，获得所述新型抗体偶联药物。
28、优选的，包括如下步骤：
29、a、靶向药的纯化与偶联：将所述靶向药用50kd的超滤管进行杂质的洗脱和纯化，然后与偶联剂dbco-nhs在37℃下共孵育2h，通过50kd的超滤管将反应液浓缩并去除多余试剂，用pbs进行清洗，获得所述产物a；
30、b、核酸纳米结构的合成：通过共价结合时，按照所述核酸纳米结构的核酸序列计量所述化疗药与所述核酸，投入到组装液中，分别在95℃、65℃、50℃、42℃、37℃、22℃和4℃下保持5分钟进行加热退火反应，获得产物b；通过插入结合时，将所述核酸投入到组装液中，分别在95℃、65℃、50℃、42℃、37℃本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种新型抗体偶联药物，其特征在于，包括核酸与化疗药通过组装形成的核酸纳米结构，以及与所述核酸纳米结构偶联的靶向药。
2.如权利要求1所述新型抗体偶联药物，其特征在于，所述核酸与所述化疗药组装形成所述核酸纳米结构包括插入、共价结合中的一种或多种。
3.如权利要求1所述新型抗体偶联药物，其特征在于，所述化疗药包括核苷酸类似物，和/或具有插入结合双链核酸结构的药物；所述靶向药包括特异性抗体。
4.如权利要求1所述新型抗体偶联药物，其特征在于，所述化疗药包括阿糖胞苷、吉西他滨、曲氟尿苷、碘苷、氟尿嘧啶、氟达拉滨、6-硫基鸟嘌呤、氯法拉滨、克拉屈滨、依托泊苷、多柔比星、米托蒽醌、顺铂、丝裂霉素、长春新碱、博来霉素中的一种或多种；所述靶向药包括西妥昔单抗、曲妥珠单抗、莫罗单抗、利妥昔单抗、阿替利珠单抗、阿维鲁单抗、伊沙妥昔单抗、Tafasitamab、Polatuzumab、吉妥珠单抗中的一种或多种。
5.如权利要求1所述新型抗体偶联药物，其特征在于，所述核酸纳米结构包括含有叠氮基团的DNA四面体。
6.一种如权利要求1所述新型
7.如权利要求6所述新型抗体偶联药物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
8.如权利要求6所述新型抗体偶联药物的制备方法，其特征在于，步骤B中，所述组装液包括如下浓度的组分：25mM HEPES，140mM氯化钾，10mM氯化镁；所述组装液的pH＝7。
9.一种如权利要求1所述新型抗体偶联药物的应用，其特征在于，用于制备治疗癌症的药物。
10.如权利要求9所述新型抗体偶联药物的应用，其特征在于，所述癌症包括非小细胞肺癌、弥漫性大B淋巴瘤、胰腺癌、结直肠癌中的一种或多种。
...【技术特征摘要】
1.一种新型抗体偶联药物，其特征在于，包括核酸与化疗药通过组装形成的核酸纳米结构，以及与所述核酸纳米结构偶联的靶向药。
2.如权利要求1所述新型抗体偶联药物，其特征在于，所述核酸与所述化疗药组装形成所述核酸纳米结构包括插入、共价结合中的一种或多种。
3.如权利要求1所述新型抗体偶联药物，其特征在于，所述化疗药包括核苷酸类似物，和/或具有插入结合双链核酸结构的药物；所述靶向药包括特异性抗体。
4.如权利要求1所述新型抗体偶联药物，其特征在于，所述化疗药包括阿糖胞苷、吉西他滨、曲氟尿苷、碘苷、氟尿嘧啶、氟达拉滨、6-硫基鸟嘌呤、氯法拉滨、克拉屈滨、依托泊苷、多柔比星、米托蒽醌、顺铂、丝裂霉素、长春新碱、博来霉素中的一种或多种；所述靶向药包括西妥昔单抗、曲妥珠单抗、莫罗单抗、利妥昔单抗、阿替利珠单抗、阿维鲁单抗、伊沙妥昔单抗、tafasitama...
【专利技术属性】
技术研发人员：夏祖光，李成勋，李圣杰，
申请(专利权)人：上海美得诺瓦生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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