【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体涉及一种胍丁胺在植物体内定位及结合蛋白鉴定的方法。
技术介绍
1、在我们前期的一个专利技术中，发现胍丁胺可作为一种植物的抗旱增产剂(专利授权号：zl202110868836.3)。研究表明，胍丁胺能通过上调aba信号途径中关键基因的表达，进而通过提高干旱胁迫下小麦的抗旱性抑制小麦衰老，增加植株鲜重，最终提高小麦生物学产量以及籽粒产量，而且其抗旱效果明显好于当前市场上常见的抗旱剂，因此可作为植物抗旱增产剂广泛应用于粮食作物、经济作物、园林作物等植物的抗旱增产。
2、为了深入研究胍丁胺促进植物抗旱、增产的分子机理；我们需要分析胍丁胺在植物体内的定位、上下游的调控元件。但由于胍丁胺属于小分子氨基酸衍生物，难以通过传统过表达带荧光标签的融合蛋白的方法实现其定位及结合蛋白的分析。
技术实现思路
1、针对现有技术问题，本专利技术提供了一种胍丁胺在植物体内定位及结合蛋白鉴定的方法。通过小麦根部施加异硫氰酸荧光素(fitc)-胍丁胺化学交联物，然后利用fitc抗体免疫沉淀-质谱检测的方法可快速、准确对胍丁胺进行体内定位及结合蛋白的鉴定；进而为研究胍丁胺的抗旱增产机理提供方法学基础。
2、为实现上述技术效果，本专利技术技术方案如下：
3、一种胍丁胺在植物体内定位及结合蛋白鉴定的方法，具体步骤包括：
4、(1)fitc与胍丁胺化学交联：采用固相化学合成法(具体方法详见“异硫氰酸荧光素标记膀胱癌靶向肽nyzl1的体外特异性鉴定，中国
5、
6、(2)胍丁胺植物体内定位
7、取待测植物种子发芽后，挑选生长状态一致的幼苗放入发芽盒中继续培养，分实验组和对照组，实验组施加fitc-胍丁胺；对照组施加fitc，处理一段时间后将根部根尖区域组织进行压片，然后置于20×10倍的荧光显微镜下进行观察、拍照、定位分析。
8、优选的，步骤(2)所述的fitc-胍丁胺浓度为5μm/l，所述的fitc浓度为5μm/l。
9、优选的，步骤(2)中处理时间为5.5-6.5h；更为优选的，步骤(2)中处理时间为6h。
10、(3)胍丁胺体内结合蛋白的鉴定
11、对植物根部总蛋白进行了提取(具体提取方法详见“高度特异性小麦atg8抗体的研制及其在细胞自噬检测中的应用，作物学报，2022,48(09)”)。然后进行对胍丁胺结合蛋白的鉴定过程，具体步骤如下：
12、1)结合蛋白的识别：取2ml总蛋白，其中1ml加fitc-胍丁胺；另外1ml加fitc作为对照，冰上孵育2-3h。
13、2)结合蛋白的分离：向上述每份总蛋白中分别加入抗fitc的兔抗多克隆抗体，冰上过夜孵育；然后向每份总蛋白中加入protein a agarose，冰上孵育2-3h，离心，弃掉上清，用1×pbs清洗；然后加入1×pbs重悬沉淀，加入10×蛋白上样缓冲液，混匀后，沸水浴10min。
14、3)结合蛋白的鉴定：对步骤2)中得到蛋白进行sds-page凝胶电泳，考马斯亮蓝染色，脱色后，切取胶条进行质谱鉴定(具体方法详见“高度特异性小麦atg8抗体的研制及其在细胞自噬检测中的应用，作物学报，2022,48(09)”)。
15、优选的，步骤(3)所述的fitc-胍丁胺浓度为10μm/l，所述的fitc浓度为10μm/l。
16、优选的，步骤(3)中抗fitc的兔抗多克隆抗体加入量为5μl；protein a agarose加入量为50μl；10*蛋白上样缓冲液的加入量为10μl。
17、优选的，步骤(3)中离心条件为2000r/min离心5min。
18、本专利技术所述的胍丁胺在植物体内定位及结合蛋白鉴定的方法，突破了现有技术壁垒，能够更简单、直观的实现胍丁胺在植物体内的定位及结合蛋白的鉴定，且耗时少。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种胍丁胺在植物体内定位及结合蛋白鉴定的方法，其特征在于，具体步骤包括：
2.根据权利要求1所示的一种胍丁胺在植物体内定位及结合蛋白鉴定的方法，其特征在于，步骤(2)所述的FITC-胍丁胺浓度为5μM/L，所述的FITC浓度为5μM/L。
3.根据权利要求1所示的一种胍丁胺在植物体内定位及结合蛋白鉴定的方法，其特征在于，步骤(2)中处理时间为5.5-6.5h。
4.根据权利要求3所示的一种胍丁胺在植物体内定位及结合蛋白鉴定的方法，其特征在于，步骤(2)中处理时间为6h。
5.根据权利要求1所示的一种胍丁胺在植物体内定位及结合蛋白鉴定的方法，其特征在于，步骤(3)所述的FITC-胍丁胺浓度为10μM/L。
6.根据权利要求1所示的一种胍丁胺在植物体内定位及结合蛋白鉴定的方法，其特征在于，步骤(3)中抗FITC的兔抗多克隆抗体加入量为5μL；Protein A agarose加入量为50μL；10*蛋白上样缓冲液的加入量为10μL。
7.根据权利要求1所示的一种胍丁胺在植物体内定位及结合蛋白鉴定的方法，其特征
...【技术特征摘要】
1.一种胍丁胺在植物体内定位及结合蛋白鉴定的方法，其特征在于，具体步骤包括：
2.根据权利要求1所示的一种胍丁胺在植物体内定位及结合蛋白鉴定的方法，其特征在于，步骤(2)所述的fitc-胍丁胺浓度为5μm/l，所述的fitc浓度为5μm/l。
3.根据权利要求1所示的一种胍丁胺在植物体内定位及结合蛋白鉴定的方法，其特征在于，步骤(2)中处理时间为5.5-6.5h。
4.根据权利要求3所示的一种胍丁胺在植物体内定位及结合蛋白鉴定的方法，其特征在于，步骤(2)中处理时间为6h。
...
【专利技术属性】
技术研发人员：李永波，樊庆琦，程敦公，崔德周，
申请(专利权)人：山东省农业科学院作物研究所，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。