【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及高效合成乳酰-n-岩藻糖基五糖-ⅴ的工程大肠杆菌的构建方法及应用，属于微生物代谢工程。
技术介绍
1、通过微生物高效合成母乳寡糖正在受到人们的广泛关注，因为母乳寡糖正在成为商业婴儿配方奶粉的新金标准。然而，目前大多数研究集中在短链母乳寡糖上，如三糖和四糖，而对于长链母乳寡糖的微生物合成研究不多。乳酰-n-岩藻糖基五糖-ⅴ(lnfp v)是一种典型的母乳五糖。迄今为止，二百多种母乳寡糖的结构已经被确定。目前已经积累了各种纯化的母乳寡糖对于健康的作用研究，但对于lnfp v对健康的影响研究较少，其原因可能为难以获得足够的纯化的lnfp v，而lnfpv的生物合成为其提供了可能。
2、目前，乳酰-n-岩藻糖基五糖-ⅴ的合成方法分为化学合成法、酶法合成法和细胞工厂法。化学合成因其过程复杂且有毒性，无法进一步大规模生产。酶法合成需要昂贵的核苷酸糖底物和辅因子的加入，限制了其工业化生产。lnfp v是在乳糖-n-新四糖(lnt)的末端葡萄糖上通过α1,3键连接一个岩藻糖。利用来自脆弱拟杆菌nctc 9343和幽门螺旋杆菌d...
【技术保护点】
1.一种α1-,3/4-岩藻糖基转移酶突变体，其特征在于，所述突变体以Bacteroidesfragilis NCTC 9343的Bf13FT为野生型酶，对第55位酪氨酸、第57位半胱氨酸、第60位苏氨酸、第78位缬氨酸或第128位赖氨酸进行突变。
2.根据权利要求1所述的α1-,3/4-岩藻糖基转移酶突变体，其特征在于，所述突变体以Bacteroides fragilis NCTC 9343的Bf13FT为野生型酶，将第55位酪氨酸突变为苯丙氨酸、第57位半胱氨酸突变为蛋氨酸、第60位苏氨酸突变为蛋氨酸或半胱氨酸、第78位缬氨酸突变为精氨酸、或第128位...
【技术特征摘要】
1.一种α1-,3/4-岩藻糖基转移酶突变体，其特征在于，所述突变体以bacteroidesfragilis nctc 9343的bf13ft为野生型酶，对第55位酪氨酸、第57位半胱氨酸、第60位苏氨酸、第78位缬氨酸或第128位赖氨酸进行突变。
2.根据权利要求1所述的α1-,3/4-岩藻糖基转移酶突变体，其特征在于，所述突变体以bacteroides fragilis nctc 9343的bf13ft为野生型酶，将第55位酪氨酸突变为苯丙氨酸、第57位半胱氨酸突变为蛋氨酸、第60位苏氨酸突变为蛋氨酸或半胱氨酸、第78位缬氨酸突变为精氨酸、或第128位赖氨酸突变为天冬氨酸。
3.编码权利要求1或2所述α1-,3/4-岩藻糖基转移酶突变体的基因。
4.表达权利要求1或2所述α1-,3/4-岩藻糖基转移酶突变体或权利要求3所述基因的重组载体。
5.携带权利要求3所述基因或权利要求4所述重组载体的宿主细胞。
6.一种制备lnfp v的大肠杆菌基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌为，以大肠杆菌为宿主，敲除基因组上的wecb，nagb，lacz，ugd，整合表达基因gale和基因lgta，游离...
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。