【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药检测，具体涉及一种人类体外辅助生殖用液质量检测方法。
技术介绍
1、人类体外辅助生殖技术用液是指与人类配子和/或胚胎发生直接或间接接触，以准备、培养、转移或存储人类配子和/或胚胎的液体类医疗器械产品，如：取卵液、卵子与胚胎处理液、精子洗涤液、精子密度梯度分离液、精子制动液、体外受精液、卵裂胚培养液、囊胚培养液、配子/胚胎冷冻液、配子/胚胎解冻液、培养用油等；
2、例如在参考文献为《卵泡液葡萄糖代谢组学与卵母细胞发育潜能的研究进展》主要内容如下：
3、卵泡液是由卵巢颗粒细胞、卵泡膜细胞、血浆渗出物等一系列物质组成。已有研究表明，卵泡液中含有的葡萄糖、蛋白质、脂质、维生素等与卵母细胞的成熟有关。卵泡液构成了卵母细胞生长的微环境，很大程度影响了其发育与成熟，卵泡液成份及含量的变化，最终导致了卵母细胞低成熟度及高碎片率，因此可用来预测卵母细胞的成熟度和质量；
4、有研究表明，在卵母细胞成熟的过程中，与糖代谢有关的葡萄糖转运体发挥作用，能够充份的利用葡萄糖。同时，代谢过程中产生的代谢产物，如无氧氧化时，通过糖酵解产生丙酮酸等，可以为卵母细胞的成熟和发育提供必要的能量和产物。适宜的葡萄糖浓度有利于提高卵母细胞质量，同样，相对好的代谢途径也能影响卵母细胞生长与发育。卵母细胞在体外培养的实验中，也证实了这一点，只有在合适的葡萄糖浓度下，卵母细胞和胚胎发育才不会受到影响，而子宫内膜异位症、ivf卵裂失败等患者的卵母细胞质量下降与其葡萄糖下降有很大联系。也有相关动物实验研究表明，葡萄糖浓度能够影
5、综上可以总结出，合适的葡萄糖浓度有益于卵母细胞发育与成熟；
6、葡萄糖是三大营养物质之一，卵母细胞的发育与成熟离不开葡萄糖代谢，通过卵泡液靶向与非靶向代谢物检测技术，检测卵泡液中葡萄糖代谢物的含量、种类以及不同的代谢通路，进行统计学分析，找到差异代谢物和差异代谢通路，对卵母细胞发育潜能有更好的预测。近几年越来越多的学者，利用卵泡液葡萄糖代谢组学技术来评估与预测卵母细胞的发育潜能。虽然目前仍有技术限制，相信通过大量的临床试验与研究，未来能够更好地应用于临床，来提高卵母细胞质量，优化辅助生殖技术，获得更高的临床妊娠率；
7、人类体外辅助生殖技术用液通常包含无机盐、ph调节剂、能量底物、抗生素、溶剂等组分。其中能量底物常用试剂为葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠等，且该类组分的含量通常较低。
8、根据《人类体外辅助生殖技术用液注册技术审查指导原则》的要求需制定葡萄糖定量要求和检测方法并检测。
9、当前葡萄糖的检测方法有如下几种类型：
10、1.旋光度
11、《中国药典》中规定的葡萄糖注射液中葡萄糖含量的检测方法如下：
12、精密量取本品适量(约相当于葡萄糖10g)，置100ml量瓶中，加氨试液0.2ml(10％或10％以下规格的本品可直接取样测定)，用水稀释至刻度，摇匀，静置10分钟，在25℃时，依法测定旋光度(通则0621)，与2.0852相乘，即得供试量中含有c6h12o6·h2o的重量(g)；
13、该方法仅适用于组分简单、葡萄糖含量高、易检测的药品，如葡萄糖注射液、葡萄糖酸钙(口服液/颗粒)、葡萄糖酸锌(口服液/颗粒)等；
14、2.高效液相色谱
15、福建师范大学生命科学学院逯平杰、发育与神经生物学福建省高等学校重点实验室叶冰莹和农业农村部甘蔗遗传改良重点开放实验室陈如凯等人联合发表一篇文章《高效液相色谱法测定甘蔗节间果糖、葡萄糖和蔗糖的含量》；
16、方法参数如下：采用agilent zorbax carbohydrate柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相为乙腈-水(75:25，v/v)，流速1.0ml/min，柱温30℃，检测器温度35℃。该法相对标准偏差(rsd)为0.82％～0.87％(n＝5)，加标回收率为97.84％～99.12％，糖类质量浓度在0.625～20mg/ml内呈现良好的线性关系，相关系数在0.9982(n＝6)以上；
17、该方法针对于甘蔗中组分葡萄糖、果糖、蔗糖而建立，用该方法检测体外辅助生殖技术用液发现会有很多干扰杂质，无法准确检测出葡萄糖含量。
技术实现思路
1、专利技术目的：本专利技术的目的是提供一种人类体外辅助生殖用液质量检测方法，以解决体外辅助生殖用液中检测葡萄糖含量检测中杂质干扰的技术问题。
2、本专利技术的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：一种人类体外辅助生殖用液质量检测方法，包括蔗糖和葡萄糖的含量测定。
3、可选地：葡萄糖的含量测定方法包括以下步骤：
4、步骤一：标准添加蔗糖和葡萄糖试品溶液的制备，称取葡萄糖标准品约0.1g(精确至0.001g)，用水溶解定容至50ml，配制成浓度约为2000mg/l的标准储备液；
5、步骤二：对照添加蔗糖和葡萄糖试品溶液的制备，准确移取5ml标准储备液于10ml容量瓶中，用水定容至刻度，配制成浓度约为1000mg/l的二级储备液；
6、对步骤一和步骤二的样品制备
7、a.将一定体积乙醇溶液提前放置在-18℃冰箱中冷冻。
8、b.用移液器准确移取2ml样品溶液，缓慢且准确加入-18℃乙醇3ml，涡旋30s，放置在-18℃冰箱中30min，5000r离心8min，取上清液过0.45μm滤膜至2ml透明螺纹口样品瓶中，得到样品测试溶液。
9、步骤三：色谱条件：色谱柱：acquity uplc beh amide(50mm*2.1mm，1.7um)，色谱柱柱温50℃，流动相由乙腈和超纯水组成，采用梯度洗脱，洗脱流速0.2ml/min，测试时间20min，进样量1.0μl，具体为：
10、色谱条件
11、
12、
13、步骤四：精密吸取不同浓度对照添加蔗糖和葡萄糖试品溶液以及标准添加蔗糖和葡萄糖试品溶液1μl注入高效液相色谱仪，记录图谱。
14、采用的仪器为：
15、超高效液相色谱仪h-cl ass(waters(中国)有限公司；
16、天平(精确至0.1mg)me204(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)；低速台式离心机td6m盐城市凯特实验仪器有限公司；
17、超纯水仪master touch-ruv上海和泰仪器有限公司；
18、涡旋仪mx-s美国赛洛捷克仪器公司
19、可选地：所述流动相梯度洗脱条件为：
20、
21、与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：本专利技术能测定不同辅助生殖用液中本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种人类体外辅助生殖用液质量检测方法，其特征在于，包括蔗糖和葡萄糖的含量测定。
2.根据权利要求1所述的一种人类体外辅助生殖用液质量检测方法，其特征在于：葡萄糖的含量测定方法包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的一种人类体外辅助生殖用液质量检测方法，其特征在于：所述流动相梯度洗脱条件为：
【技术特征摘要】
1.一种人类体外辅助生殖用液质量检测方法，其特征在于，包括蔗糖和葡萄糖的含量测定。
2.根据权利要求1所述的一种人类体外辅助生殖用液质量检测方法，其...
【专利技术属性】
技术研发人员：薛松果，匡延平，
申请(专利权)人：江苏瑞辅达医疗器械有限公司，
类型：发明
国别省市：
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