【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及人类体外辅助生殖，特别涉及一种人类体外辅助生殖技术用液中辛酸钠检测方法。
技术介绍
1、人类体外辅助生殖技术用液是指与人类配子和/或胚胎发生直接或间接接触，以准备、培养、转移或存储人类配子和/或胚胎的液体类医疗器械产品，如：取卵液、卵子与胚胎处理液、精子洗涤液、精子密度梯度分离液、精子制动液、体外受精液、卵裂胚培养液、囊胚培养液、配子/胚胎冷冻液、配子/胚胎解冻液、培养用油等。
2、人类体外辅助生殖技术用液通常包含无机盐、ph调节剂、能量底物、抗生素、白蛋白、溶剂等组分，其中白蛋白属于药物组分。
3、根据《人类体外辅助生殖技术用液注册技术审查指导原则》的要求需制定提供产品中药物与其他成分相互作用及稳定性研究资料。根据文献《辛酸钠含量对人白蛋白稳定性的影响》“辛酸钠被广泛用作人白蛋白的稳定剂，它在白蛋白加热保温过程中能够起稳定作用，防止白蛋白的变性，确保制品有良好的外观。然而，辛酸钠有一定的毒性，需控制其在人白蛋白中的含量”，因此需在体外辅助生殖技术用液中检测辛酸钠的含量。
4、人血白蛋白在体外辅助生殖技术中的含量为(2～20)g/l，由文献可知在人血白蛋白中辛酸钠的含量大致在(0.063～0.290)mmo l/l·g范围内，所以在体外辅助生殖技术用液中的辛酸钠最小含量为0.02g/l。
5、当前辛酸钠的检定方法在《中国药典》2020年版第三部3111辛酸钠测定法中有描述使用气相色谱的方法进行检测。根据药典描述“另取辛酸对照品约0.15g，精密称定，置10ml量瓶中，
6、《中国药典》所载的检测方法，常用于辛酸钠浓度较高的场合，而人血白蛋白中的辛酸钠含量较低，两者不属于一个数量级，因此用该方法对人血白蛋白中的辛酸钠含量进行检测时误差极大。
7、因此，为了提高检测的精确度，申请人提出使用气相色谱串联质谱的方法来检测人类体外辅助生殖技术用液中辛酸钠含量。该检测方法灵敏度好、分析精准，适合定量分析。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种人类体外辅助生殖技术用液中辛酸钠检测方法，具有灵敏度好、分析精准，适合定量分析的特点。
2、本专利技术的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：一种人类体外辅助生殖技术用液中辛酸钠检测方法，包括以下步骤：
3、s1.配制标准溶液：
4、s11.配制浓度为1000mg/l的庚酸二级储备液；
5、s12.配制浓度为200mg/l辛酸二级储备液；
6、s13.配制辛酸浓度分别为50.00μg/ml、20.00μg/ml、10.00μg/ml、5.00μg/ml、2.00μg/ml的标准溶液；
7、s2.配制样品溶液：
8、s21.配制浓度为1.5mo l/l的高氯酸；
9、s22.配制样品溶液；
10、s3.配制空白溶液；
11、s4.使用气相色谱质谱联用仪分别对标准溶液、空白溶液、样品溶液进行检测并获取其图谱；
12、s5.数据处理和计算；
13、s51.以标准溶液中辛酸与庚酸浓度之比c标x/c内标作为横坐标，以辛酸与庚酸色谱峰面积之比a标x/a内标作为纵坐标，绘制标准曲线，计算其线性回归方程；
14、s52.计算出样品溶液的辛酸与庚酸色谱峰面积之比a样x/a内样，并将其带入s51的方程中，获得其辛酸与庚酸浓度之比c样x/c内样，进而计算出样品溶液中辛酸的浓度c样x。
15、作为优选，s11具体包括：
16、庚酸标准测试溶液的制备：称取庚酸标准品0.1136g，用三氯甲烷庚酸定容至10ml，配制成浓度为10000mg/l(ppm)的标准储备液；
17、准确移取1.0ml庚酸标准储备液于10ml容量瓶中，用三氯甲烷定容至刻度，配制成浓度约为1000mg/l的庚酸二级储备液。
18、作为优选，s12具体包括：
19、辛酸标准测试溶液的制备：称取辛酸标准品0.1199g，用三氯甲烷稀释定容至10ml，配制成浓度为10000mg/l(ppm)的标准储备液；
20、准确移取0.2ml辛酸标准储备液于10ml容量瓶中，用三氯甲烷定容至刻度，配制成浓度约为200mg/l的辛酸二级储备液。
21、作为优选，s13具体包括：
22、移取一定体积的辛酸二级储备液和20μl庚酸二级储备液，以及一定体积的三氯甲烷至2ml透明螺纹口样品瓶中，拧盖摇匀，得到浓度分别为2.00μg/ml、5.00μg/ml、10.00μg/ml、20.00μg/ml、50.00μg/ml的标准曲线工作溶液，具体配制如下：
23、标准溶液名称：std1，移取来源：辛酸二级储备液，移取体积(ml)：0.25，三氯甲烷体积(ml)：0.73，标准溶液浓度(μg/ml)：50.00；
24、标准溶液名称：std2，移取来源：辛酸二级储备液，移取体积(ml)：0.10，三氯甲烷体积(ml)：0.88，标准溶液浓度(μg/ml)：20.00；
25、标准溶液名称：std3，移取来源：std2，移取体积(ml)：0.20，三氯甲烷体积(ml)：0.78，标准溶液浓度(μg/ml)：10.00；
26、标准溶液名称：std4，移取来源：std2，移取体积(ml)：0.25，三氯甲烷体积(ml)：0.73，标准溶液浓度(μg/ml)：5.00；
27、标准溶液名称：std5，移取来源：std3，移取体积(ml)：0.20，三氯甲烷体积(ml)：0.78，标准溶液浓度(μg/ml)：2.00。
28、作为优选，s21具体包括：
29、1.5m高氯酸(1.5mo l/l高氯酸)配制：在装有一定体积一级水的10ml容量瓶中准确加入1.2ml70％高氯酸，待混合均匀后，用一级水定容至刻度。
30、作为优选，s22具体包括：
31、准确量取0.5ml样品，加10000mg/l庚酸内标溶液20μl，1.5m高氯酸溶液0.2ml，涡旋混合1min，加入三氯甲烷3ml，加盖，振摇2min，以3000r/min转离心10min，将三氯甲烷层转移至10ml容量瓶中；再加入3ml三氯甲烷重复上述步骤，充分萃取，合并萃取液并用三氯甲烷定容至10ml；取上清液过0.22μm滤膜至2ml透明螺纹口样品瓶中，得到样品溶液。
32、作为优选，s3具体包括：
33、准确量取0.5ml一级水，加10000mg/l庚酸内标溶液20μl，1.5m高氯酸溶液0.2ml，涡旋混合1min，加入三氯甲烷3ml，加盖，振摇2min，以3000r/min转离心10min，将三氯甲烷层转移至10ml容量瓶中；再加入3ml三氯甲烷重复上述步骤，充分萃取，本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种人类体外辅助生殖技术用液中辛酸钠检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种人类体外辅助生殖技术用液中辛酸钠检测方法，其特征在于，S11具体包括：
3.根据权利要求1所述的一种人类体外辅助生殖技术用液中辛酸钠检测方法，其特征在于，S12具体包括：
4.根据权利要求1所述的一种人类体外辅助生殖技术用液中辛酸钠检测方法，其特征在于，S13具体包括：
5.根据权利要求1所述的一种人类体外辅助生殖技术用液中辛酸钠检测方法，其特征在于，S21具体包括：
6.根据权利要求1所述的一种人类体外辅助生殖技术用液中辛酸钠检测方法，其特征在于，S22具体包括：
7.根据权利要求1所述的一种人类体外辅助生殖技术用液中辛酸钠检测方法，其特征在于，S3具体包括：
8.根据权利要求1所述的一种人类体外辅助生殖技术用液中辛酸钠检测方法，其特征在于，S4具体为：
【技术特征摘要】
1.一种人类体外辅助生殖技术用液中辛酸钠检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种人类体外辅助生殖技术用液中辛酸钠检测方法，其特征在于，s11具体包括：
3.根据权利要求1所述的一种人类体外辅助生殖技术用液中辛酸钠检测方法，其特征在于，s12具体包括：
4.根据权利要求1所述的一种人类体外辅助生殖技术用液中辛酸钠检测方法，其特征在于，s13具体包括：
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【专利技术属性】
技术研发人员：薛松果，匡延平，
申请(专利权)人：江苏瑞辅达医疗器械有限公司，
类型：发明
国别省市：
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